黃顙魚(yú)重組生長(zhǎng)激素的制備及對(duì)其魚(yú)苗生長(zhǎng)的影響

姜麗娟 劉文生 林齊鵬 饒飛翔 楊惠暖 王 娟 王 濤 付晶晶

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黃顙魚(yú)重組生長(zhǎng)激素的制備及對(duì)其魚(yú)苗生長(zhǎng)的影響

姜麗娟1劉文生1林齊鵬2饒飛翔1楊惠暖1王 娟1王 濤1付晶晶1

(1. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院, 廣州 510642; 2. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)公共基礎(chǔ)課實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心, 廣州 510642)

生長(zhǎng)激素在漁業(yè)生產(chǎn)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值, 通過(guò)制備黃顙魚(yú)()同源重組生長(zhǎng)激素并用于促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn), 從而為建立魚(yú)苗快速培育方法提供理論依據(jù)。根據(jù)已知黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素(PfGH)基因cDNA序列, 利用IPTG誘導(dǎo)和SDS-PAGE分析方法, Western印跡表明在IPTG終濃度1.0 mmol/L、溫度17℃和培養(yǎng)時(shí)間14h的條件下, 黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素基因在大腸桿菌中大量表達(dá), 獲得重組生長(zhǎng)激素蛋白。然后, 隨機(jī)選取黃顙魚(yú)分為4組放入室內(nèi)水族箱中進(jìn)行養(yǎng)殖, 每箱35尾, 體質(zhì)量為(0.85±0.01) g, 每組設(shè)3個(gè)平行, 水體循環(huán)凈化。用制備的重組生長(zhǎng)激素濃度分別為0、1、5和10 mg/L對(duì)黃顙魚(yú)進(jìn)行浸泡處理, 每周一次, 0為對(duì)照組。在養(yǎng)殖4周后, 對(duì)各組增重率和特定生長(zhǎng)率進(jìn)行比較, 結(jié)果表明1 mg/L組增重率和特定生長(zhǎng)率分別比對(duì)照組提高了29.67% (<0.05)和11.90% (<0.05), 5 mg/L組增重率和特定生長(zhǎng)率分別比對(duì)照組提高了21.32% (<0.05)和8.83% (<0.05), 各組間體成分等均無(wú)明顯差異。停用生長(zhǎng)激素4周后, 各組黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)性能、體成分等均無(wú)顯著差異。研究表明通過(guò)原核表達(dá)可以獲得黃顙魚(yú)重組生長(zhǎng)激素, 用于促進(jìn)魚(yú)苗生長(zhǎng)培育的最佳浸泡濃度為1 mg/L。

黃顙魚(yú); 生長(zhǎng)激素; 原核表達(dá); 浸泡; 增重率

魚(yú)類生長(zhǎng)激素(Growth hormone, GH)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用已經(jīng)成為研究熱點(diǎn), 外源生長(zhǎng)激素能被魚(yú)類消化道吸收, 硬骨魚(yú)類小腸上皮細(xì)胞可以通過(guò)胞飲作用吸收大分子, 并以具有免疫活性和生物活性的形式進(jìn)入血液[1—3]。利用自身的GH促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng), 具有同源性強(qiáng)、效用劑量低等優(yōu)點(diǎn)[4]。應(yīng)用基因工程技術(shù)合成魚(yú)類重組GH(rGH), 不僅解決了魚(yú)體內(nèi)GH量少且提取繁瑣等問(wèn)題, 而且具有與天然GH相同的生物活性。通過(guò)注射[5, 6]、埋植、浸泡[7, 8]、灌喂和投喂[9, 10]等方式將外源GH引入魚(yú)體內(nèi), 均能引起魚(yú)體血漿GH水平升高[11, 12], 促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng)[13—16]。如每2周一次對(duì)鯔注射重組黃鰭鯛生長(zhǎng)激素, 16周后試驗(yàn)組的體重和體長(zhǎng)增長(zhǎng)分別比對(duì)照組快65%和22%[17]; 用重組鮭生長(zhǎng)激素作為飼料添加劑投喂羅非魚(yú), 具有很強(qiáng)的促進(jìn)魚(yú)體生長(zhǎng)作用[10]; 通過(guò)注射、灌喂和投喂三種方式將金槍魚(yú)基因重組生長(zhǎng)激素導(dǎo)入草魚(yú)體內(nèi), 均能提高草魚(yú)魚(yú)種的相對(duì)體重和相對(duì)體長(zhǎng)生長(zhǎng)率[18]; 用重組鰻生長(zhǎng)激素溶液定期浸泡真鯛仔魚(yú), 4周后就能看出明顯的增長(zhǎng)效果[7]。另外, 研究表明, 外源GH在魚(yú)體半衰期短, 不會(huì)產(chǎn)生積累[3], 不會(huì)影響魚(yú)體組成成分[19]。

黃顙魚(yú)()隸屬于鲇形目(Siluri-formes), 鲿科(Bagridae), 黃顙魚(yú)屬(), 主要產(chǎn)于長(zhǎng)江及支流[20], 我國(guó)大部分地區(qū)都有分布。因其味道鮮美, 肉質(zhì)細(xì)嫩, 無(wú)肌間刺, 且蛋白質(zhì)豐富, 深受廣大消費(fèi)者的青睞[21], 是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類之一[22]。由于濫捕及水域環(huán)境問(wèn)題等原因, 野生黃顙魚(yú)資源數(shù)量銳減, 而市場(chǎng)需求越來(lái)越大。然而, 黃顙魚(yú)生長(zhǎng)速度慢, 1齡可達(dá): 5.6 cm/5.7 g , 2齡: 9.8 cm/20.6 g , 3齡: 13.5 cm/36 g , 4齡: 16 cm/58.2 g , 5齡: 17.8 cm/81.3 g , 最大個(gè)體30 cm , (500—750) g[23], 商品魚(yú)市場(chǎng)出現(xiàn)供不應(yīng)求。因此, 本研究選擇原核表達(dá)方法制備黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素重組蛋白, 并用于對(duì)黃顙魚(yú)魚(yú)苗進(jìn)行浸泡處理, 然后觀察在不同濃度重組生長(zhǎng)激素作用下, 幼魚(yú)的生長(zhǎng)、形態(tài)性狀及魚(yú)體組成分的變化, 確定最適的浸泡濃度, 為建立黃顙魚(yú)魚(yú)苗的快速培育技術(shù)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 GH的原核表達(dá)

根據(jù)已報(bào)道的黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素cDNA ORF序列[24], 去掉20個(gè)氨基酸的信號(hào)肽序列后, 將成熟肽基因片段定向插入融合表達(dá)載體pET-28a(+), 命名為pET-PfGH。根據(jù)黃顙魚(yú)GH成熟肽cDNA編碼序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物, 通過(guò)PCR擴(kuò)增得到黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素cDNA片段, 上游引物F: 5′-CTGGCTGCCAAGA TGATGGA-3′, R: 5′-TCTCCACCTTGTGCATGTCC- 3′, 由上海捷瑞生物工程有限公司合成。用PCR方法篩選陽(yáng)性克隆, 上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行測(cè)序, 獲得重組質(zhì)粒pET-PfGH轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)。培養(yǎng)重組質(zhì)粒單菌落, 誘導(dǎo)表達(dá), 收集菌體, 裂解菌體。取全菌液、超聲破碎后上清和沉淀分別制樣, 12%的SDS-PAGE進(jìn)行電泳分析。

1.2 GH的純化回收

將菌體裂解液上清用0.22 μm 過(guò)濾器過(guò)濾后, 用北京康為世紀(jì)生物科技有限公司的5 mL預(yù)裝柱, 采用Ni-瓊脂糖凝膠親和層析分離帶His標(biāo)簽的重組蛋白, 用Binding Buffer (20 mmol/L Tris-HCl, 10 mmol/L咪唑, 0.5 mol/L NaCl, pH 7.9)等倍稀釋后負(fù)載上柱, 流速為10倍柱體積/h, 收集流穿液; 使用15倍柱體積的Binding Buffer沖洗柱子, 洗去雜蛋白; 依次用含咪唑濃度為5、10、25、50、150、300、400和500 mmol/L 的Elution Buffer (20 mmol/L Tris-HCl, 0.5 mol/L NaCl, pH 7.9)洗脫, 收集洗脫峰, 進(jìn)行 SDS-PAGE 分析。將洗脫后的蛋白溶液加入到10 kD的Millipore超濾管中, 4℃、4000 r/min離心10min, 棄下部液體, 同時(shí)加入與棄液相同體積的生理鹽水, 離心并重復(fù)三次, 收集上部液體。

將全菌液、超聲裂解液上清、沉淀和純化后的蛋白Western 印跡分析, 一抗為抗His標(biāo)簽鼠單克隆抗體, 二抗為HRP標(biāo)記山羊抗小鼠IgG (H+L), 使用康為世紀(jì)BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定目的蛋白濃度。

1.3 黃顙魚(yú)魚(yú)苗養(yǎng)殖

實(shí)驗(yàn)魚(yú)購(gòu)自本地養(yǎng)殖場(chǎng)同批全雄黃顙魚(yú)魚(yú)苗, 隨機(jī)選取體質(zhì)量為(0.85±0.0078) g的魚(yú)苗放入80 cm × 60 cm × 50 cm的水族箱中飼養(yǎng), 每箱35尾。實(shí)驗(yàn)分為4組, 其中對(duì)照組1個(gè)組, 試驗(yàn)組3個(gè)組, 各組間無(wú)差異性, 每組3個(gè)平行, 養(yǎng)殖水體保持循環(huán)凈化, 連續(xù)充氧, 每天換水一次(約1/3), 投餌分上、下午各一次, 日投餌量為魚(yú)體重的4%—6%, 飼料購(gòu)自?shī)W特飼料有限公司。養(yǎng)殖時(shí)間從2013年7月6日至2013年8月31日。分別配制黃顙魚(yú)重組生長(zhǎng)激素溶液濃度為: 0、1、5和10 mg/L, 每周分別對(duì)4組魚(yú)苗進(jìn)行浸泡一次, 每次浸泡45min (保持增氧), 飼養(yǎng)4周, 共浸泡4次后, 對(duì)照組和試驗(yàn)組均不作任何處理, 再續(xù)養(yǎng)4周。

1.4 采樣及測(cè)定

在飼養(yǎng)4周和8周后各采樣一次(采樣前魚(yú)禁食24h), 每次每箱隨機(jī)選取15尾魚(yú), 隨機(jī)取5尾魚(yú)測(cè)量體長(zhǎng)、體重以及肝胰臟等內(nèi)臟重量, 5尾魚(yú)用于全魚(yú)體成分分析, 5尾魚(yú)用于分子生物學(xué)分析, 取肝胰臟于凍存管中, 并迅速放入液氮中, –80℃冰箱保存。

全魚(yú)粗蛋白測(cè)定采用凱氏微量定氮法, 粗脂肪采用索氏抽提法測(cè)定; 粗灰分采用燒灼法(550℃), 水分的測(cè)定采用105℃恒溫烘干失重法。

1.5 數(shù)據(jù)處理

存活率(Survival rate,, %) =100×成活魚(yú)尾數(shù)/投放魚(yú)尾數(shù)

增重率(Weight gain rate,, %)=100×(W–0)/0

特定生長(zhǎng)率(Special growth rate,,%/d) = 100×(Ln W– Ln0)/

肥滿度(Condition factor,, %)=100×體重/體長(zhǎng)3

臟體比(Viscerasomatic index,, %) = 100×內(nèi)臟重/體重

肝體比(Hepaticsomatic index,, %) = 100×肝重/體重

其中,W、0分別為黃顙魚(yú)養(yǎng)殖末均重和養(yǎng)殖初均重,為養(yǎng)殖天數(shù)。

數(shù)據(jù)采用SPSS(V20)軟件進(jìn)行單因素方差分析 (One-way ANOVA), 差異顯著時(shí)(0.05)通過(guò)Duncan’s方法進(jìn)行多重比較, 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean± SE)”表示。

2 結(jié)果

2.1 黃顙魚(yú)GH的制備純化

獲得重組質(zhì)粒pET-PfGH轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21 (DE3)后, 涂布在含卡那霉素LB 平板上, 挑取單菌落進(jìn)行PCR鑒定得到大約424 bp 的片段, 電泳圖譜帶符合預(yù)期結(jié)果。對(duì)獲得的陽(yáng)性重組子進(jìn)行 DNA 測(cè)序, 結(jié)果表明, 黃顙魚(yú)GH成熟肽cDNA編碼序列已插入到pET-28a上, 并成功轉(zhuǎn)移到大腸桿菌BL21中, 將它命名為pET-PfGH-BL21。

pET-PfGH-BL21宿主菌在IPTG誘導(dǎo)前無(wú)GH融合蛋白表達(dá), 而誘導(dǎo)后可見(jiàn)一明顯的蛋白帶, 分子量約為21 kD。37℃誘導(dǎo)4h后超聲裂解, 目的蛋白主要存在于沉淀部分, 表明誘導(dǎo)表達(dá)的重組GH主要以包涵體形式存在于細(xì)胞內(nèi)。而17℃誘導(dǎo)的目的蛋白在上清和沉淀中均出現(xiàn), 表明降低溫度可以減少包涵體, 增加可溶性蛋白的產(chǎn)生。

重組生長(zhǎng)激素融合多肽采用Ni-瓊脂糖凝膠親和層析。分離純化后的重組GH在SDS-PAGE上表現(xiàn)為單一條帶, 分子量約為21 kD。通過(guò)Western Blot檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)有陽(yáng)性條帶出現(xiàn), 其大小與SDS- PAGE中的特異性條帶相符合, 表明在17℃誘導(dǎo)表達(dá)全菌液、超聲裂解液上清、沉淀和純化后的蛋白都含有黃顙魚(yú)重組GH, 且都具有免疫活性, 經(jīng)蛋白定量試劑盒檢測(cè)獲得蛋白濃度為8.02 mg/mL。經(jīng)制備純化后的GH蛋白供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

2.2 重組GH處理對(duì)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

用本實(shí)驗(yàn)制備的重組生長(zhǎng)激素浸泡處理黃顙魚(yú)魚(yú)苗, 養(yǎng)殖4周后, 實(shí)驗(yàn)組魚(yú)苗的增重率、特定生長(zhǎng)率均比對(duì)照組高(表1)。從表1可知, 1 mg/L組、5 mg/L組與對(duì)照組之間差異顯著(<0.05), 1 mg/L組最高, 其增重率、特定生長(zhǎng)率比對(duì)照組分別高出29.67%、11.90%, 各組之間存活率則無(wú)顯著差異。停用生長(zhǎng)激素4周后, 各組的魚(yú)種增重率、特定生長(zhǎng)率和存活率均無(wú)顯著差異(表2)。

2.3 重組GH對(duì)幼魚(yú)形態(tài)發(fā)育的影響

黃顙魚(yú)幼魚(yú)通過(guò)GH浸泡處理并養(yǎng)殖4周后, 對(duì)其形態(tài)性狀進(jìn)行測(cè)定, 獲得了肥滿度、肝體比、臟體比等指標(biāo)(表3)。由表3可知, 實(shí)驗(yàn)組的肥滿度與對(duì)照組相比沒(méi)有顯著差異; 與對(duì)照組比較, 試驗(yàn)組的肝體比均出現(xiàn)下降, 10 mg/L組肝體比顯著低于對(duì)照組; 各組之間臟體比沒(méi)有顯著差異。而在生長(zhǎng)激素停用4周后, 所有各組幼魚(yú)的肥滿度、肝體比、臟體比均無(wú)顯著差異(表4)。

2.4 重組GH對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響

不同GH濃度浸泡對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分均未產(chǎn)生顯著影響(表5)。停用生長(zhǎng)激素后各組之間也無(wú)明顯差異(表6)。

表1 不同濃度GH浸泡對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)增重率、特定生長(zhǎng)率和存活率的影響

注: 表中數(shù)據(jù)為3個(gè)重復(fù)的平均值。表中同一列標(biāo)有不同字母的數(shù)據(jù)表示差異顯著(<0.05); 下同

Note: Data are the means of triplicate. Values with different superscripts have significant differences (<0.05); the same applies bellow

表2 生長(zhǎng)激素停用后對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)增重率、特定生長(zhǎng)率和存活率的影響

表3 不同濃度GH浸泡對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)形態(tài)發(fā)育的影響

表4 生長(zhǎng)激素停用后對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)形態(tài)發(fā)育的影響

表5 不同GH浸泡濃度對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響

表6 不同GH浸泡濃度對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響

3 討論

利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行功能基因的原核表達(dá)具有操作簡(jiǎn)單, 成本低, 純化工藝成熟等優(yōu)點(diǎn)[25]。已知黃顙魚(yú)cDNA序列的開(kāi)放閱讀框?yàn)?03 bp, 編碼長(zhǎng)度為200氨基酸的多肽, 其中信號(hào)肽為20氨基酸, 成熟肽為180氨基酸。由于魚(yú)類GH的信號(hào)肽序列不能被大腸桿菌所識(shí)別, 因此, 大腸桿菌作為原核表達(dá)宿主菌, 在合成基因時(shí)應(yīng)去除編碼GH成熟肽以外的信號(hào)肽序列。本研究采用原核融合表達(dá)載體pET-28a, 其在外源蛋白兩翼各融合表達(dá)1個(gè)6×His的標(biāo)簽, 可用于目的蛋白的純化與鑒定[26], 融合多肽理論估計(jì)分子量為21.27 kD, 與SDS-PAGE電泳結(jié)果相當(dāng)。經(jīng)大腸桿菌表達(dá)的魚(yú)類GH往往形成包涵體, 通常要進(jìn)行比較復(fù)雜的變性復(fù)性處理, 結(jié)果可能使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變, 活性及產(chǎn)量降低。通過(guò)摸索誘導(dǎo)溫度, 發(fā)現(xiàn)37℃誘導(dǎo)出來(lái)的黃顙魚(yú)重組蛋白主要是以不溶性的包涵體出現(xiàn)在超聲裂解后的沉淀中, 而17℃誘導(dǎo)的重組蛋白很大部分出現(xiàn)在菌體破碎液上清層, 為可溶性蛋白。利用Ni-瓊脂糖凝膠親和層析、咪唑梯度洗脫、電泳, 獲得了高純度帶His標(biāo)簽的重組蛋白, 并最終制備了具有生物活性的重組黃顙魚(yú)GH。通過(guò)浸泡, 外源生長(zhǎng)激素可由魚(yú)類的口腔、鰓、腸道、皮膚等途徑進(jìn)入血液, 血漿中的生長(zhǎng)激素與肝細(xì)胞和腸道的受體結(jié)合以后才能發(fā)揮促生長(zhǎng)生理效應(yīng)[27—29]。本研究中黃顙魚(yú)幼魚(yú)1 mg/L組的增重率優(yōu)于5 mg/L組和10 mg/L組, 1 mg/L外源生長(zhǎng)激素的浸泡效果最好, 該組的增重率和特定生長(zhǎng)率均最高, 說(shuō)明外源生長(zhǎng)激素用量不是越多越好, 這是因?yàn)樯L(zhǎng)激素的受體數(shù)量受限制, 若使用過(guò)量的外源生長(zhǎng)激素會(huì)造成部分激素沒(méi)有受體可結(jié)合, 反而會(huì)反饋性地促進(jìn)下丘腦分泌生長(zhǎng)激素抑制因子, 從而抑制垂體合成釋放生長(zhǎng)激素。高劑量的外源生長(zhǎng)激素引起的負(fù)反應(yīng), 從而降低了它可以替補(bǔ)內(nèi)源生長(zhǎng)激素不足進(jìn)而促進(jìn)魚(yú)體生長(zhǎng)的作用。Kayes[30]也曾報(bào)道過(guò)這種現(xiàn)象和負(fù)反應(yīng)。只有外源生長(zhǎng)激素使用適當(dāng), 才能取得較好的促生長(zhǎng)效果。張慶[18]對(duì)草魚(yú)、施兆鴻和周一紅[8]對(duì)黑鯛稚魚(yú)、Agellon等[19]對(duì)虹鱒的研究也有相似的報(bào)道。因此, 在生產(chǎn)實(shí)踐中黃顙魚(yú)外源生長(zhǎng)激素浸泡用量為1 mg/L較合適。由于通過(guò)原核表達(dá)獲得大量生長(zhǎng)激素的成本高, 而真核表達(dá)系統(tǒng)較之大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng), 具有表達(dá)量高, 外源基因不易丟失、安全性好的優(yōu)點(diǎn), 因此, 在實(shí)際生產(chǎn)中, 可以采用真核表達(dá)方式進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)生長(zhǎng)激素, 使生產(chǎn)成本進(jìn)一步降低。

有關(guān)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的變化, 結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分等物質(zhì)均無(wú)明顯差異, 說(shuō)明浸泡外源生長(zhǎng)激素對(duì)黃顙魚(yú)粗蛋白、粗脂肪等物質(zhì)含量沒(méi)有影響, Wilson[31]也報(bào)道過(guò)外源生長(zhǎng)激素能促進(jìn)生長(zhǎng)主要表現(xiàn)在刺激脂肪細(xì)胞的生長(zhǎng)。從本實(shí)驗(yàn)黃顙魚(yú)的肥滿度變化結(jié)果來(lái)看, 外源生長(zhǎng)激素對(duì)體重和體長(zhǎng)的影響同樣明顯, 體長(zhǎng)的增長(zhǎng)即是骨組織生長(zhǎng), 而體重增加是否包含脂肪成分的變化需要進(jìn)一步的研究。

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THE PREPARATION OF RECOMBINANT GROWTH HORMONE AND ITS EFFECTS ON THE GROWTH OF JUVENILE IN

JIANG Li-Juan1, LIU Wen-Sheng1, LIN Qi-Peng2, RAO Fei-Xiang1, YANG Hui-Nuan1, WANG Juan1, WANG Tao1and FU Jing-Jing1

(1. College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 2. Public Basic Course and Experimental Teaching Center, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China)

In this study, the mature peptide-encoding cDNA sequence of the growth hormone of(PfGH) was inserted into the prokaryote expression vector pET-28a (+). The recombinant plasmid of pET-PfGH was then transfected intoBL21 (DE3) and was induced by IPTG. The SDS-PAGE results showed thatBL21 (DE3) with pET-PfGH expressed a specific fusion protein with a molecular weight of 21 KD. The western blot test revealed that the protein contained a 6-His tag. PfGH was abundantly expressed incultured at 17℃ for 14 hours with the final IPTG concentration of 1.0 mmol/L. After ultrasonic disruption the soluble recombinant protein was reco-vered and purified, and was then applied to juvenile. The subjects with the average weight of (0.85±0.01) g were randomly divided into four groups and were raised in an indoor aquarium. Every group had three repeats with 35 fish in each. The experiments were conducted in the interior circulation water purification system. During the 4-week feeding trial, four groups were soaked in liquid containing the recombinant GH at different concentrations of 0 (the control), 1 (group 1), 5 (group 2) and 10 mg/L (group 3) respectively, and the soaking frequency was once a week. At the end of the trial, our results showed that compared to the control group, the weight gain rate () and the specific growth rate () of group 1 increased by 29.67% (<0.05) and 11.90% (<0.05) respectively; theandof group 2 increased by 21.32% (<0.05) and 8.83% (<0.05) respectively. However, the body composition was not significantly different between the four groups. Furthermore, no significant difference was detected in the growth performance and the body composition between the four groups in 4 weeks after the cease of growth hormone treatment.

; Growth hormone; Prokaryotic expression; Immersion; Weight gain rate

10.7541/2015.36

S961.6

A

1000-3207(2015)02-0275-06

2014-05-09;

2014-09-15

廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項(xiàng)(A201101G02, A201301F03); 廣州市農(nóng)業(yè)科技項(xiàng)目(2011)資助

姜麗娟(1986—), 湖北黃石人; 碩士研究生; 研究方向水生生物學(xué)。E-mail: 364613168@qq.com

劉文生(1965—), 教授, 博士; E-mail: wsliu@scau.edu.cn