陽江地區地貧初篩（血常規法）陽性家庭發生率與地貧基因檢測結果的調查研究

敖 東 李梅桂 唐元紅 李 婭

廣東省陽江市婦幼保健院，廣東陽江 529500

陽江地區地貧初篩（血常規法）陽性家庭發生率與地貧基因檢測結果的調查研究

敖 東 李梅桂 唐元紅 李 婭

廣東省陽江市婦幼保健院，廣東陽江 529500

目的 探討血常規法和基因檢測在地中海貧血中的臨床價值。 方法 收集陽江地區600對國家免費孕前優生檢驗標本（疑似地貧），按照操作規程檢驗上述對象的MCV、MCH，將初篩結果同地貧基因檢測結果進行比較。 結果 雙方夫妻MCV、MCH下降300對（600人），基因檢測確診519人，符合率86.5%；夫妻單方MCV、MCH下降300對（600人），基因確診244人，符合率81.33%，單方MCV、MCH正?；驍y帶率4.0%。 結論 地貧高發地區血常規和基因檢測配合應用對地貧的檢出有重要的指導意義。

陽江地區；地中海貧血；血常規；地貧基因

地中海貧血（簡稱地貧），是全球最大的單基因遺傳病之一，該病在全球都有分布，也是我國目前最常見的遺傳血液病，而廣東省的發病率達11.66%，排在全國第2位[1-2]。地貧基因攜帶者和重型地貧患兒給家庭、社會帶來沉重的經濟負擔和不可估量的精神負擔[3]。本研究對陽江地區地貧初篩陽性家庭發生率和地貧基因的檢測結果進行調查研究，以期提高該病的檢出率，現將其報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年6月～2014年8月陽江地區600對（1200人）國家免費孕前優生檢驗標本（疑似地貧），男600人，女600人，均為夫妻關系，年齡21～36歲，平均（29.8±3.6）歲。

1.2 地貧初篩

采取血常規法檢查紅細胞平均體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白量（MCH）。檢測儀器：西門子血液自動分析儀測定，MCV正常范圍80 ～ 90fL，低于80L提示陽性，MCH正常范圍27 ～ 31pg，低于27pg提示陽性。

1.3 地貧基因檢測

用EDTA-K2抗凝血2mL用全血DNA快速提取試劑從抗凝全血中抽提人基因組DNA，嚴格按照操作說明進行，所有初篩夫妻的基因檢測卡上填寫相關資料和MCV、MCH，檢測儀器：PCR擴增儀（GeneAmp PCR System 9700），試劑盒（潮州凱普生物化學有限公司）主要成份：α-地貧PCR MIX、α-地貧DNA聚合酶、β-地貧PCR MIX、β-地貧DNA聚合酶、UNG酶、雜交液、WB1、封阻液、酶標液、雜交膜、NBT/BCIP、陰性對照。檢驗方法：DNA分離提取、配制PCR擴增試劑（含α-地貧和β-地貧擴增試劑）、加樣、地貧基因擴增程序（α基因：50℃ 15min，95℃ 10min，然后95℃ 1min，68℃30s，72℃ 30s，共35個循環，72℃延伸5min；β基因條件：50℃ 15min，95℃ 10min，然后94℃ 1min，55℃ 30s，72℃ 30s，共35個循環，72℃延伸5min）、雜交實驗前的準備、PCR產物雜交過程顯色過程、結果的判定（將擴增產物同地貧基因突變寡核苷酸探針進行反向點雜交，確定基因突變類型）。將反饋回來的地貧基因結果與本中心的篩查結果比對統計。符合率=基因陽性/初篩陽性×100%。

1.4 統計學分析

本研究使用Excel 2003軟件對數據進行統計，計數資料用對數、人數和百分比表示。

2 結果

雙方夫妻MCV、MCH下降300對（600人），基因檢測確診519人，符合率86.5%，MCV、MCH同時下降用基因檢測確診的夫妻中，α基因異常有311例（-SEA基因缺失253例占81.35%、-α3.7基因缺失37例占11.90%、-α4.2基因缺失9例占2.89%、ααQS/αα基因突變6例占1.93%、αα/ ααWS基因突變6例占1.93%）；β基因異常154例（-17/β基因突變11例占7.14%、-28/β基因突變56例占36.36%、14-15/β4基因突變4例占2.60%、41-42/β基因突變57例占37.01%、71-72/β基因突變9例占5.84%、654/β基因突變17例占11.04%）。αβ混合型地貧27例。519例基因異常中有228例是α同型地貧基因、有76例夫妻是β同型地貧，對子代的遺傳機率是： 1/4為正常胎兒，1/2為輕型地貧（同父母一樣），而1/4為重型地貧患者。其中重型α地貧患者（血紅蛋白Barts病）胎兒大多在30～40周時死于宮內，或早產或流產，有的出生后數小時內死亡。重型β地貧患者出生時接近正常，但6個月后逐漸出現臨床癥狀，而是心力衰竭和肝纖維化及肝功能衰竭，是導致患兒死亡的重要原因之一，多于5歲前死亡，見表1。

夫妻單方MCV、MCH下降300對（600人），基因確診244人，符合率81.33%，a基因異常有154例（--SEA基因缺失113例占73.38%、-α3.7基因缺失17例占11.04%、-α4.2基因缺失19例占12.34%、ααQS/αα基因突變3例占1.95%、αα/ααWS基因突變2例占1.298%）；β基因異常66例（-17/β基因突變5例占7.58%、-28/β基因突變24例占36.36%、41-42/β基因突變22例占33.33%、71-72/β基因突變4例占6.06%、654/ β基因突變11例占 16.67%），αβ混合型地貧12例。單方血常規正常300對（300人），基因攜帶率4.0%（12例）。

表1 雙方夫妻MCV、MCH下降300對（600人）

從上面的統計來看：陽江地區孕前檢查地貧基因攜帶情況a基因異常以--SEA基因缺失-α3.7基因缺失和為主，非缺失型突變占少數。β基因突變以-28/β基因突變和41-42/β基因突變為主，其它突變也常見。見表2。

表2 夫妻單方MCV、MCH下降300對（600人），基因確診244人

3 討論

相關數據統計廣東平均每9個人就有地貧基因攜帶者，基因攜帶者可出現不同程度貧血，每800個新生兒就有1個可能成為重癥患兒[4-5]。由于重癥地貧患兒沒有特別有效的治療方法，有的只能靠輸血維持生命，有的未出生時或出生后不久便死亡，由此可見地貧給家庭、社會的危害性[6-7]。孕前對夫妻雙方進行地貧篩查是降低新生兒出生缺陷避免重癥地貧兒的出生的關鍵。PCR基因檢測是判斷地貧的金標準，其原理是采用生物素標記的引物分別對α-珠蛋白基因缺失及基因突變區域和β-珠蛋白基因突變區域進行特異性擴增，將擴增產物與標記不同缺失或突變類型地中海貧血探針的尼龍膜在導流雜交儀上進行導流雜交，然后通過化學顯色對結果進行判讀[8]。但該技術要求條件相對較高，費用大，欠發達地區推廣困難[9]，尋找簡便、經濟、準確性好的初篩方法顯得尤為重要。本研究將600對孕前檢測夫妻中MCV、MCH同時或單方下降的視為可疑，然后將該結果同基因檢測結果進行了對比，結果提示總符合率78.02%，夫妻單方或雙方MCV、MCH下降的符合率與其相一致，和謝建渝等[10-11]報道結果相符，研究中夫妻單方MCV、MCH正常的基因攜帶率4.1%。由此可見MCV、MCH對地貧的篩查具有重要的指導意義，夫妻雙方若存在MCV、MCH下降就需要進行基因檢測，明確診斷，以避免缺陷新生兒的出生[12]。

綜上所述，通過血常規初篩和基因檢測的配合應用可排除或診斷雙方夫妻是否患有地貧基因，對地貧的檢測率大大提高，明顯降低新生兒出生缺陷，避免重癥地貧兒的出生。

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Investigation of thalassemia screening(blood france)incidence of positive family and thalassemia gene test results for Yangjiang

AO Dong LI Meigui TANG Yuanhong LI Ya
Yangjiang Maternal and Child Care Service Centre of Guangdong Province,Yangjiang 529500,China

Objective To investigate the clinical value of blood france and gene test for thalassemia. Methods 600 pairs of pregnancy eugenic test specimens(suspected thalassemia)were selected from Yangjiang area.The MCV and MCH of the specimen were all detected accordance with the rules.The screening results were then compared with gene test results. Results MCV and MCH of couples decreased were 300 pairs(600 people),and genetic testing confirmed 519 people.The coincidence rate was 86.5%.MCV and MCH of couples unilateral decreased were 300 pairs(600 people),and genetic testing confirmed 244 people.The coincidence rate was 81.33%.Gene carrying rate of couples unilateral with normal MCV and MCH was 4.0%. Conclusion Blood application with genetic testing has important guiding significance for thalassemia detection of high thalassemia prone areas.

Yangjiang area;Thalassemia;Blood france;Thalassemia gene

R556

A

2095-0616（2015）07-205-04

2014-11-17）