桂參通脈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究※

梁君昭 竇建衛(wèi) 袁倩倩 岳寶森 王 蓓 黃 芊

(陜西省西安市中醫(yī)醫(yī)院科教科，陜西 西安 710001)

1 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院天然藥物研究中心，陜西 西安710061

2 陜西省西安市中醫(yī)醫(yī)院制劑科，陜西 西安 710001

桂參通脈膠囊由桂枝、黨參、黃芪、茯苓、葛根、郁金等藥物組成，具有補(bǔ)氣益心、活血通脈、化痰祛濁的功效，臨床上常用于胸痹心氣虧虛、痰瘀交阻所致胸悶氣短、心悸乏力、夜眠不安及冠心病心肌缺血、心律失常、心功能不全等。為良好的控制桂參通脈膠囊的質(zhì)量，本研究對(duì)處方中葛根、郁金、茯苓的薄層鑒別方法進(jìn)行研究，并建立了桂枝中桂皮醛的含量測(cè)定方法，結(jié)果如下。

1 試驗(yàn)材料

1．1 儀器 高效液相色譜儀(HPLC)(包括LC-20AT恒流泵，SPD-20A紫外檢測(cè)器，LCsolution色譜工作站)，日本島津公司;AB135-S 0．01 mg電子天平，梅特勒—托利多。

1．2 藥品及試劑 桂參通脈膠囊，陜西省西安市中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，批號(hào)130101、130302、130503;桂皮醛對(duì)照品(批號(hào)110710-200212)、葛根對(duì)照藥材(批號(hào)121175-200503)、郁金對(duì)照藥材(批號(hào)120949-200504)、茯苓對(duì)照藥材(批號(hào)121117-200504)，均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 薄層色譜鑒別

2．1．1 葛根薄層色譜鑒別［1］取桂參通脈膠囊內(nèi)容物3 g，加甲醇15 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?．5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取葛根對(duì)照藥材0．8 g、缺葛根藥材陰性樣品3 g，同法制成對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(7∶2．5∶0．25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見封3，圖1。

2．1．2 郁金薄層色譜鑒別 取桂參通脈膠囊內(nèi)容物3 g，加無水乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取郁金對(duì)照藥材2 g、缺郁金藥材陰性樣品3 g，同法制成對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷—乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的主斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見封3，圖2。

2．1．3 茯苓薄層色譜鑒別［2］取桂參通脈膠囊內(nèi)容物3 g，加乙醚50 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取茯苓對(duì)照藥材1 g、缺茯苓藥材陰性樣品3 g，同法制成對(duì)照藥材溶液、陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(20∶5∶0．5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸—乙醇(4∶1)混合溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，于日光下檢視。結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上顯相同的主斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。見封3，圖3。

2．2 桂皮醛含量測(cè)定

2．2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Phecda-C18柱，以乙腈—水(32∶68)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為290 nm，柱溫40℃，流速1 mL/min。按桂皮醛計(jì)算，理論板數(shù)應(yīng)不低于3 000。在此色譜條件下，桂皮醛與雜質(zhì)峰可達(dá)分離。

2．2．2 溶液制備

2．2．2．1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取桂皮醛對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL含10 μg的溶液，即得。

2．2．2．2 供試品溶液制備 取桂參通脈膠囊內(nèi)容物約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率40 Hz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2．2．2．3 陰性對(duì)照品溶液制備 取缺桂枝模擬制劑，按2．2．2．2項(xiàng)下制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2．2．3 測(cè)定方法 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，注入 HPLC儀，測(cè)定，以峰面積按標(biāo)外法計(jì)算桂皮醛含量。

2．2．4 干擾性試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各10 μL，注入HPLC儀。結(jié)果表明，陰性對(duì)照品溶液的 HPLC圖譜中，未呈現(xiàn)與桂皮醛對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，表明陰性對(duì)照無干擾。見圖4、5、6。

圖4 對(duì)照品溶液HPLC圖

圖5 供試品溶液HPLC圖

圖6 陰性對(duì)照品溶液HPLC圖

2．2．5 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 2．0、5．0、10．0、15．0 和 20．0 μL，測(cè)定峰面積。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得桂皮醛回歸方程為 Y=5 829．3X+2 496．1，r=0．999 8。結(jié)果顯示，桂皮醛在0．020 5 ～ 0．205 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見圖7。

圖7 桂皮醛線性關(guān)系考察結(jié)果

2．2．6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(批號(hào) 130101)10 μL，分別于0、1、2、4、6 和8 h 進(jìn)樣，測(cè)定桂皮醛峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，考察樣品8 h內(nèi)穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，桂皮醛RSD=0．46%(n=6)。說明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2．2．7 精密度試驗(yàn)

2．2．7．1 中間精密度試驗(yàn) 取桂參通脈膠囊(批號(hào)130101)適量，由不同分析人員按 2．2．2．2項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液。各精密吸取10 μL進(jìn)樣2次，測(cè)定桂皮醛峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，由不同分析人員制備的同一批號(hào)樣品中，桂皮醛含量基本一致，RSD=0．44%，表明該方法中間精密度良好。

2．2．7．2 重復(fù)性試驗(yàn) 取桂參通脈膠囊(批號(hào)130101)內(nèi)容物 0．4、0．5 和0．6 g，各取3 份，精密稱定，按照2．2．2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。各精密吸取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算RSD。結(jié)果顯示，桂皮醛的平均含量為 4．52 mg/g，RSD=0．88%(n=9)，表明該方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表1。

表1 桂參通脈膠囊重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 n=9

2．2．8 加樣回收率試驗(yàn) 取桂參通脈膠囊(批號(hào)130101)樣品適量，約0．25 g，共取6份，精密稱定，分別精密加入桂皮醛濃度為1．112 mg/mL的對(duì)照品溶液1 mL，按照2．2．2．2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各精密吸取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定桂皮醛峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，桂皮醛平均回收率為 98．6%，RSD=0．68%(n=6)。結(jié)果見表 2。

表2 桂皮醛加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 n=6

2．2．9 含量測(cè)定 取3批不同批次的桂參通脈膠囊樣品，采用2．2．1項(xiàng)色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示，3批樣品中桂皮醛的平均含量為4．50 mg/g顆粒。

3 討論

3．1 波長選擇 取桂皮醛供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照品溶液，于紫外分光光度下進(jìn)行波長掃描，波長范圍200～350 nm。結(jié)果顯示，對(duì)照品溶液及供試品溶液在波長290 nm處吸收最大，且陰性對(duì)照品溶液在此波長下無吸收，故將檢測(cè)波長定為290 nm。

3．2 供試品提取條件考察 為了更好的將供試品中桂皮醛提取出，本試驗(yàn)分別對(duì)提取溶劑、提取時(shí)間、提取功率進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用甲醇超聲處理(功率250 W，頻率40 Hz)30 min時(shí)，提取率最高。

桂參通脈膠囊中的葛根、郁金及茯苓薄層色譜鑒別結(jié)果顯示，各薄層斑點(diǎn)不受樣品中其他藥材的干擾。表明該方法專屬性強(qiáng)，能夠很好地鑒別該樣品中的3味藥材。該處方中桂枝具有發(fā)汗解肌、散寒止痛、溫通經(jīng)脈、平?jīng)_降氣等功效［3］，是處方中的君藥。本試驗(yàn)通過建立桂枝中桂皮醛含量測(cè)定方法，可有效控制桂參通脈膠囊的質(zhì)量。

［1］ 國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典:2010年版［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:861．

［2］ 張義生，梁惟俊，范彥博，等．調(diào)脂康口服液的薄層色譜鑒別［J］．中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32(7):556-558．

［3］ 劉萍，張麗萍．桂枝化學(xué)成分及心血管藥理作用研究［J］．遼寧中醫(yī)雜志，2012，39(10):1926-1927．