卵黃抗體在毛皮動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用

文│莊金秋 梅建國(guó) 王玉茂（山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院）

卵黃抗體在毛皮動(dòng)物疾病防治中的應(yīng)用

文│莊金秋 梅建國(guó) 王玉茂（山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院）

卵黃抗體（Immunoglobulin of yolk，IgY）是鳥(niǎo)類(lèi)、爬行動(dòng)物和兩棲類(lèi)動(dòng)物體卵黃中存在的主要免疫球蛋白，一般從被抗原免疫的母雞卵黃中提取。當(dāng)母雞機(jī)體受到抗原作用后，誘導(dǎo)體內(nèi)漿細(xì)胞分泌抗體，免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）隨血液循環(huán)到達(dá)卵巢并選擇性地轉(zhuǎn)移到成熟卵泡中形成IgY。與IgG相比，IgY具有抗原用量少、制備周期短、對(duì)動(dòng)物損傷小、產(chǎn)量大、特異性強(qiáng)、靈敏度高，可進(jìn)行定量檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于人及動(dòng)物的細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)及腫瘤等疾病的診斷與防治，并顯示出了良好的應(yīng)用前景。

一、兔瘟

兔瘟，又叫兔病毒性出血癥，是由病毒引起的一種急性、熱性、敗血性和毀滅性的傳染病。該病新疫區(qū)死亡率可達(dá)95%以上，老疫區(qū)一般為70%～85%，常呈暴發(fā)性流行，發(fā)病率及死亡率極高，給養(yǎng)兔業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前該病尚無(wú)有效治療藥物，疫苗接種7～10天后才能產(chǎn)生足夠抗體，不能及時(shí)有效保護(hù)。因此，研究在疫苗免疫建立之前對(duì)兔瘟易感兔群有保護(hù)作用的方法，對(duì)控制該病具有一定意義。

王孝友等用兔瘟抗原免疫產(chǎn)蛋雞，收集高免蛋，精制IgY，采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）測(cè)定的最高滴度為15log2。通過(guò)的被動(dòng)免疫保護(hù)試驗(yàn)證實(shí)，滴度稀釋至13log2時(shí)肌內(nèi)注射體重2.0～2.5千克的健康非免家兔5.0毫升/只，可抵抗兔瘟強(qiáng)毒RC株1.0毫升（血凝價(jià)HA為9log2）的攻擊。臨床應(yīng)用效果顯示：IgY（HI為13log2）對(duì)發(fā)病兔進(jìn)行緊急防治，治愈率為84.38%～92.86%，能迅速控制疫情。

張宏偉試驗(yàn)采用兔瘟分離毒株制成滅活組織疫苗。經(jīng)基礎(chǔ)免疫3次和加強(qiáng)免疫普通產(chǎn)蛋雞，可使其IgY的HI效價(jià)達(dá)到14log2，并能維持7周以上。攻毒保護(hù)試驗(yàn)表明，在攻毒前每只兔注射2.0毫升/千克的IgY（卵黃抗體含量0.5毫克/毫升），連用3天，對(duì)攻毒兔的保護(hù)率達(dá)100%，取得與高免血清一致效果。使用試驗(yàn)結(jié)果測(cè)出的有效治療劑量對(duì)3個(gè)兔群在兔瘟高發(fā)季節(jié)前，間隔15天進(jìn)行2次預(yù)防接種，與歷年相比，有效降低發(fā)病率。

湯少偉、王治方等制備的兔瘟IgY也顯示出了較好的治療效果，對(duì)兔瘟早期治愈率為80%，對(duì)兔瘟緊急預(yù)防有效率為100%，并認(rèn)為其研制的IgY安全性良好，作用迅速，非常值得推廣。核衣殼蛋白VP60是兔瘟的主要免疫原性蛋白，Li等重組表達(dá)VP60蛋白N端的250個(gè)氨基酸，并制備IgY，結(jié)果表明特異性IgY可顯著保護(hù)兔感染病毒，持續(xù)治療5天后可顯著提高其存活率。

二、兔大腸桿菌病

兔大腸桿菌病，又稱(chēng)黏液性腸炎，是由致病性大腸桿菌及其產(chǎn)生的毒素所引起的一種暴發(fā)性腸道疾病，斷奶后不久的幼兔多發(fā)，且病程長(zhǎng)，反復(fù)發(fā)作，死亡率高。范作良等采用滅活菌苗進(jìn)行基礎(chǔ)免疫、加強(qiáng)免疫，滅活油乳劑疫苗進(jìn)行超強(qiáng)化免疫和維持免疫程序。通過(guò)微量凝集試驗(yàn)方法，研究了雞抗兔大腸桿菌高免IgY的消長(zhǎng)規(guī)律及臨床應(yīng)用。結(jié)果表明，超強(qiáng)化免疫5周后，抗體效價(jià)達(dá)到高峰，9周后抗體效價(jià)逐漸下降。同一劑量IgY效價(jià)達(dá)26小時(shí)，肌內(nèi)注射2毫升/千克體重，連用3天對(duì)兔大腸桿菌感染的治愈率達(dá)90%。與頭孢噻肟進(jìn)行的對(duì)比田間治療試驗(yàn)，IgY的治愈率顯著高于頭孢噻肟。

三、其他傳染病

特種毛皮動(dòng)物（水貂、狐貍、貉）主要傳染病包括犬瘟熱、水貂細(xì)小病毒性腸炎、水貂阿留申病、狐貍腦炎、水貂出血性肺炎、狐加德納氏菌病等。

我國(guó)閆新華等率先應(yīng)用水貂腸炎病毒免疫蛋雞制備IgY，結(jié)果表明，經(jīng)5次免疫制備的IgY，于最后一次免疫后第10天其酸性糖蛋白（AGP）效價(jià)達(dá)1∶25；第30天效價(jià)為1∶8。該抗體較穩(wěn)定，4℃保存120天、-20℃保存180天效價(jià)不變。用該抗體治療細(xì)小病毒性腸炎病犬，治愈率高達(dá)93.9%，證實(shí)其制備的IgY是成功的，可用于犬細(xì)小病毒性腸炎的治療。

譚婷婷采用分離株水貂細(xì)小病毒MEV-ZYL-1免疫蛋雞，使其產(chǎn)生抗MEV抗體的雞蛋，并利用氯仿和飽和硫酸銨結(jié)合的方法提純出IgY，HI效價(jià)可維持在9log2以上，這為水貂MEV防治奠定了基礎(chǔ)。

莊金秋試驗(yàn)應(yīng)用水貂犬瘟熱病毒（CDV）分離毒作為接種病毒抗原免疫蛋雞制備IgY，并用AGP法和間接ELISA法測(cè)定其抗體水平。結(jié)果顯示IgY的最高抗體滴度與IgG接近，蛋雞3免后3～5天可開(kāi)始持續(xù)收集雞蛋制備IgY。臨床上應(yīng)用其制備水貂CDV精制IgY和高免血清治療制劑對(duì)水貂犬瘟熱的綜合治療進(jìn)行了探索。結(jié)果表明，精制IgY起到較好的治療效果，可進(jìn)行批量生產(chǎn)用于臨床治療。

王玉燕分別用犬瘟熱疫苗和犬腺病毒（CAV）疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，制備了活性較高的抗CDV、CAV的IgY。對(duì)IgY的提純方法研究的結(jié)果表明，卵黃液用10倍pH5.0的去離子水稀釋后的去脂率和IgY提取效果最好，用PEG6000提取的IgY活性最高，0.07%海藻酸鈉-硫酸銨法提取IgY的工藝流程適用于工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用。其所制備的抗狐主要疫病的IgY具有較高的活性，可作為特異性的工具蛋白用于相應(yīng)抗原抗體的檢測(cè)。隨著人們對(duì)IgY研究的不斷深入，緩釋技術(shù)逐漸用于IgY應(yīng)用研究中以增強(qiáng)其作用效果。

Li等用海藻酸鈉和殼聚糖為原料制備的微膠囊來(lái)包被IgY，既改變了IgY的抗胃酸能力，又減緩了IgY釋放速度，增強(qiáng)了IgY的添加效果。張婧蘭將制備的CDV和犬細(xì)小病毒（CPV）高免IgY，分別加入酸化0.25%殼聚糖溶液中，IgY與殼聚糖的質(zhì)量比為1∶10，以硫酸鈉為交聯(lián)劑，在超聲作用下利用形成的殼聚糖微球?qū)gY進(jìn)行包封，包封效果優(yōu)良。在pH為1的模擬胃液內(nèi)37℃搖床2小時(shí)，制備的載藥殼聚糖微球能夠很好地保護(hù)IgY。德國(guó)、韓國(guó)、日本也有大量相關(guān)IgY治療制劑的報(bào)道。應(yīng)用IgY防治特種毛皮動(dòng)物疾病，不會(huì)出現(xiàn)應(yīng)用動(dòng)物高免血清治療引起的副作用，又可避免同源或近源材料帶毒而導(dǎo)致本動(dòng)物發(fā)病的潛在危險(xiǎn)，對(duì)有效降低疾病暴發(fā)，減少損失將具有重要意義。

自KIemperer首次報(bào)道雞蛋中存在抗體以來(lái)，學(xué)者對(duì)IgY的研究不斷加深。歐洲替代方法驗(yàn)證中心（ECVAM）建議以IgY代替哺乳動(dòng)物IgG作為試驗(yàn)和生產(chǎn)的抗體，不僅因?yàn)镮gY的結(jié)構(gòu)與IgG相似，而且IgY在許多功能方面優(yōu)于IgG。在國(guó)內(nèi)，雞也是率先實(shí)現(xiàn)SPF化和產(chǎn)業(yè)化的試驗(yàn)動(dòng)物，有利于IgY的規(guī)模化生產(chǎn)。因此，IgY在重大動(dòng)物疫病防治與診斷方面擁有非常廣闊的應(yīng)用前景。但是，目前來(lái)說(shuō)在利用IgY進(jìn)行動(dòng)物疾病治療的過(guò)程中，需要注意一些問(wèn)題，如通常IgY在動(dòng)物發(fā)病的初期其治療的效果顯著，IgY與動(dòng)物疫苗接種二者之間應(yīng)間隔一定的時(shí)間，同時(shí)IgY的注射效果比較好，而用作飲水效果不是十分顯著。

相信隨著人們對(duì)于IgY研究的不斷深入，其生產(chǎn)制備技術(shù)的不斷發(fā)展，IgY將在動(dòng)物疾病防治中發(fā)揮出更大的作用。

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系毛皮動(dòng)物創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：SDAIT-18-011-15）