新風膠囊肝腎亞急性毒性實驗研究

成 遙，張 賀，孟 楣，劉 健

(1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院藥學部，國家中醫藥管理局中藥制劑三級實驗室，安徽合肥 230031;2.安徽中醫藥大學，安徽合肥 230012)

新風膠囊(XFC)為安徽中醫藥大學第一附屬醫院(以下簡稱我院)劉健教授自創的經驗方，并由我院藥學部進一步研發為醫院制劑，于2005年取得了安徽省醫院制劑的批準文號(皖藥制字20050062)，該方由黃芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣等4味中藥組成，具有益氣健脾，化濕通絡之功效。臨床主要用于治療風濕類疾病，如類風濕性關節炎，強直性脊椎炎，系統性紅斑狼瘡等，療效確切安全。該制劑中雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)系衛矛科雷公藤屬植物，味苦、性寒，有大毒，歸肝、腎經，藥用部位為根，是祖國醫學中一種常見草藥，應用歷史悠久，具有祛風除濕、通絡止痛、消腫止痛、解毒殺蟲等功效［1］，1960年代以來應用于治療類風濕性關節炎(RA)，起效快而療效好，逐漸受到世界范圍內的認可［2］。與此同時，現代藥理學證實，雷公藤對人體的肝、腎、生殖等功能有一定影響，是近年來發生中毒事件最多的草藥之一，其中肝腎損害屢見不鮮，柯坤宇［3］報道，因類風濕性關節炎服用雷公藤多苷片(40 mg·d－1)30 d致急性肝損害1例。黃光照等［4］報道了4例雷公藤中毒的尸檢病理報告，其中2例死于急性腎功能衰竭。雷公藤為XFC主要構成藥物，XFC安全性的臨床循證醫學證據較多，劉健等［5－7］均做過深入的研究，但關于XFC安全性的實驗數據較匱乏，為進一步驗證XFC的安全性及其是否具有雷公藤樣的肝腎毒性，本實驗研究了XFC對大鼠的肝腎亞急性毒性，為臨床安全用藥提供依據?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物和儀器 SD大鼠60只，雌雄各半，體重180～220 g，由安徽長臨河科技有限公司提供，SPF級，準字號為scxk(皖)2014－002。我院SPF級動物房內飼養，溫度20℃，相對濕度55% ～65%。動物食用全營養顆粒飼料，滅菌注射用水。ZN17-UX/UW型動物天平。DM0421E型低速離心機。日立CA7600全自動生化分析儀。奧林巴斯CKX31-C11BF型光學顯微鏡。

1.2 藥品及試劑 新風膠囊(安徽中醫藥大學第一附屬醫院制劑，批號20140521);雷公藤飲片(購自我院中草藥房，由我院李立華主任藥師鑒定);10%水合氯醛;10%甲醛溶液。

1.3 方法

1.3.1 分組及給藥 取60只SD大鼠常規飼養適應1周后，隨機分為5組:雷公藤組、XFC組(低、中、高)和空白對照組(CON組)，每組12只。雷公藤組劑量為原生藥 1.92 g·kg－1·d－1、XFC 組(低、中、高)大鼠分別灌胃給予相應XFC膠囊內容物溶解藥液 0.6 、1.2 、2.4 g·kg－1·d－1。相當于臨床成人(體重以 60 kg計)用量0.06 g·kg－1·d－1的10、20、40倍。連續給藥30 d?？瞻捉M每日灌服等量滅菌注射用水。給藥體積為15 mL·kg－1。給藥期間正常供給飼料與滅菌注射用水。

1.3.2 觀察指標和檢測方法 實驗期間，考察大鼠的一般狀態:包括毛色變化、精神狀態、活動情況、飲食飲水量等，稱取大鼠逐日體重。于第31天給藥后，10%水合氯醛輕度麻醉后腹主動脈取血，留取的血樣靜置后，于4 500 r·min－1離心15 min，分離血清，－20℃保存，用全自動生化分析儀測定血清谷丙轉氨酸(ALT)、谷草轉氨酸(AST)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)。解剖大鼠，留肝、腎組織，稱質量，計算臟器系數，留取肝、腎組織于10%甲醛中保存，制作組織切片(取材、固定、脫水、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、HE染色)，顯微鏡下觀察。

1.4 統計學分析 使用SPSS 19統計軟件處理，各組數據以(±s)表示，多組之間比較采用單因素方差分析(one way－ANOVA)表示，方差齊性檢驗采用t檢驗，多組之間兩兩比較采用LSD－t檢驗的方法，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 實驗結果

2.1 動物一般狀況 給藥期間無大鼠死亡，與空白組比較，其余各組大鼠毛色、精神、活動等一般狀況均未見明顯異常，體重增長差異無統計學意義(P＞0.05);各組大鼠肝、腎臟器官均未見明顯腫脹，其肝腎指數也無明顯差異(P＞0.05)，見表1。

表1 新風膠囊對大鼠肝腎功能體質量及肝腎指數的影響(±s，n=12)

表1 新風膠囊對大鼠肝腎功能體質量及肝腎指數的影響(±s，n=12)

組別 初質量/g 處死時質量/g 肝臟指數/mg·g－1 腎臟指數/mg·g －1雷公藤組 202.0 ±10.1 323.2 ±20.5 37.15 ±2.43 16.58 ±3.23空白對照組 194.5 ±8.0 267.5 ±10.4 35.67 ±1.89 16.43 ±2.82 XFC 低劑量組 216.6 ±5.6 295.4 ±20.7 36.15 ±2.02 16.51 ±2.08 XFC 中劑量組 204.9 ±10.3 302.6 ±13.8 36.65 ±1.83 16.09 ±3.14 XFC 高劑量組 206.6 ±11.2 314.3 ±15.6 37.04 ±2.12 16.23 ±3.07

2.2 血清生化指標檢測結果 給藥30 d后，與空白組比較，雷公藤組各肝腎功能指標水平均明顯升高(P＜0.05)，見表2。由表2可知，XFC的低、中、高三個劑量組測得的ALT、AST值與空白組比較P＞0.05，雷公藤組 P ＜0.05，由此可見雷公藤組的轉氨酶指標顯著升高，提示肝功能有所惡化，而XFC各個劑量組對肝功能無明顯影響;XFC的低、中、高三個劑量組測得的BUN、SCr值與空白組比較P＞0.05，與雷公藤組比較 P ＜0.05，由此可見雷公藤組的BUN、SCr水平顯著升高，提示腎功能有所惡化，而XFC各個劑量組對腎功能無明顯影響。

2.3 新風膠囊對大鼠肝、腎組織學的影響

2.3.1 對肝組織學的影響 結果見圖1，空白對照組大鼠的肝切片可見，肝組織結構完整，匯管區及小葉內無炎細胞浸潤，肝細胞無變性(圖1A)。雷公藤組可見，肝組織結構完整，少量匯管區可見炎細胞(以中性粒細胞為主)浸潤，小葉內少量炎性細胞浸潤，中央靜脈周圍肝細胞胞漿疏松水腫，其余肝細胞變性不顯著(圖1B)。XFC各組可見肝組織結構完整，匯管區及小葉內未見炎細胞浸潤，肝細胞胞漿略微疏松水腫，其余肝細胞變性不顯著(圖1C，1D，1E)。

表2 新風膠囊對大鼠肝腎功能血液學指標的影響(±s，n=12)

表2 新風膠囊對大鼠肝腎功能血液學指標的影響(±s，n=12)

注:與空白對照組相比▲P＜0.05。

組別 ALT/IU·L－1 AST/IU·L－1 BUN/mmol·L－1 SCr/μmol·L －1雷公藤組 55.00±12.13▲ 121.17 ±20.15▲ 8.45±1.21▲ 34.43 ±6.37▲空白對照組 44.50 ±8.06 102.50 ±8.09 7.76 ±0.87 31.83 ±5.23 XFC 低劑量組 46.63 ±7.34 106.25 ±7.39 8.15 ±1.00 30.15 ±3.31 XFC 中劑量組 47.04 ±9.11 116.80 ±6.75 6.65 ±0.76 29.18 ±4.36 XFC 高劑量組 46.60 ±8.24 104.32 ±8.65 8.04 ±0.98 30.23 ±5.09

2.3.2 對腎組織學的影響 結果見圖2?？瞻捉M腎小球和腎皮質、髓質未見充血，未見炎細胞浸潤，近曲小管及遠曲小管上皮細胞無變性(圖2A)。雷公藤組腎小球和腎皮質、髓質現充血，近曲小管上皮細胞略腫脹，可見粉染細顆粒，皮、髓質交界處偶見灶狀炎細胞浸潤(圖2B)。XFC低、中、高組腎皮質、髓質未見充血，高劑量組皮質內腎小球略現充血，近曲小管及遠曲小管無顯著改變(圖2C、2D、2E)。

3 討論

本實驗著重考察新風膠囊對大鼠肝腎的亞急性毒性，以相當于XFC臨床成人用量(2.4 g·d－1)的10、20、40倍劑量給藥，以常規的肝腎功能檢測指標血清ALT、AST和血清BUN、SCr作為指標，方法簡便，結果易得。結果顯示，雷公藤組所測肝腎功能指標水平顯著升高，肝、腎功能減退，產生一定的病理損傷，但損傷程度較輕，大鼠的體重和肝腎指數未現顯著異常，主要表現為細胞腫脹和少量炎性細胞浸潤。這進一步驗證了雷公藤對肝腎的毒副作用，而新風膠囊各劑量組肝腎指標水平與空白對照組相比未見明顯異常，肝腎功能正常，組織病理學改變亦十分輕微，這提示在人40倍耐受劑量下XFC仍未見雷公藤樣肝腎毒性。

新風膠囊為我院劉健教授在“脾虛致痹”理論啟發下，與臨床實踐相結合而自創的驗方，君藥為黃芪、薏苡仁，臣藥為雷公藤、蜈蚣。作為新風膠囊臣藥的雷公藤臨床應用廣泛，對多種疾病尤其是風濕類疾病療效好、見效快，幾乎沒有可以完全替代的藥物，與此同時，據臨床觀察，雷公藤的肝腎毒副作用發生率為58.1%［8］，肝臟與腎臟是人體重要的代謝器官，體內產生的毒物與廢物必須依靠肝、腎排出，但其自身非常脆弱。如何降低雷公藤的肝腎毒副作用，已成為現今中藥領域的研究熱點，關于雷公藤配伍減毒的研究已有顯著進展，與雷公藤配伍減毒的藥物有甘草、女貞子、鳳尾草、白芍總苷、阿魏酸鈉、茶多酚、番茄紅素等［9－17］，但雷公藤與黃芪、薏苡仁配伍減毒的用法仍不多見。我院劉健教授獨創性的提出讓黃芪和薏苡仁來和雷公藤配伍來降低它的毒副作用，本實驗驗證了這一成果。黃芪和薏苡仁的現代藥理學研究表明，這兩味藥物內不同成分對肝細胞、腎細胞有保護作用，對肝癌細胞有抑制作用。黃芪多糖可保護肝細胞化學性損傷，并對CYP1A和CYP3A的表達有積極作用。黃芪注射液能抵抗自由基介導的脂質過氧化，對大鼠的腎臟有保護作用［18－21］。薏苡仁脂肪酸和薏苡仁油對人肝癌細胞具有抑制作用并可誘導其凋亡，從而抑制腫瘤生長［22－23］。以薏苡仁油為主要成分的康萊特注射液已成為抗腫瘤治療輔助藥物廣泛應用于臨床［24］。關于本制劑中單味藥黃芪、薏苡仁對大鼠肝、腎等重要器官的保護作用機制，將在后面的研究中做更深一步的探討。

［1］郭艷紅，譚 墾.雷公藤的毒性及其研究概況［J］.中藥材，2007，30(1):112－117.

［2］Chen BJ.Triptolide，a novel immunosuppressive and anti－ inflammatory agentpurified from aChinese herbTripterygium wilfordiiHook f［J］.Leuk Lymphoma，2001，42(3):253－265.

［3］柯坤宇.雷公藤多苷片引起肝損害一例報告［J］.實用臨床醫學，2009，10(7):40－42.

［4］黃光照，李 玲，劉 良，等.雷公藤中毒的尸檢病理變化－附4例尸檢報告［J］.中國中西醫結合雜志，2009，29(2):165－168.

［5］劉 健，徐桂琴.新風膠囊治療類風濕性關節炎臨床療效的系統評價［J］.中醫藥臨床，2011，23(6):502－508.

［6］黃傳兵，諶 曦，汪 元，等.新風膠囊聯合來氟米特治療強直性脊柱炎臨床研究［J］.中醫藥臨床，2011，23(5):405－408.

［7］黃傳兵，劉 健，諶 曦，等.新風膠囊治療類風濕性關節炎療效觀察［J］.中醫藥臨床，2013，33(12):1399－1403.

［8］Chen BH.In vitro propagation of a medicinal plant:Tripterygium wilfordii Hook f［J］.Forestry Stud China，2009，11(3):174－178.

［9］張 靜，江 瑩，王 芳，等.基于“異類相制”理論探討雷公藤肝毒性配伍減毒的作用［J］.中草藥，2014，45(18):2711－2715.

［10］李涯松，童培建，馬紅珍，等.甘草對雷公藤治療類風濕關節炎的減毒增效作用［J］.中國中西醫結合雜志，2006，26(12):1117－1119.

［11］呂娟濤，湯 浩.女貞子多糖對肝損傷保護作用的實驗研究［J］.中國醫院藥學雜志，2010，30(12):1024－1025.

［12］劉建群，洪 沁，張 維，等.鳳尾草對雷公藤甲素的減毒作用［J］.中國醫院藥學雜志，2010，30(6):443－446.

［13］李振彬，王志強，宮彩霞，等.白芍總苷對雷公藤多苷治療狼瘡性腎炎減毒增效作用的實驗研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2009，20(6):513－516.

［14］劉 偉，曹 勇，王鳳娟，等.阿魏酸鈉干預雷公藤多苷致小鼠肝損傷［J］.武漢大學學報(醫學版)，2006，27(4):468－470.

［15］李欽民，韓 真.茶多酚對雷公藤內酯醇致小鼠肝損害的保護作用［J］.世界華人消化雜志，2006，14(9):908－911.

［16］何 軍，趙春景，廖昌軍，等.番茄紅素對雷公藤多苷致小鼠肝損害的保護作用［J］.中國臨床藥理學與治療學，2010，10(15):1096－1098.

［17］馮 哲，周學平.中藥性味相制配伍減毒的方法探要［J］.中華中醫藥雜志，2013，28(3):595－598.

［18］賈 睿，杜金梁，曹麗萍，等.黃芪多糖對鯉化學性肝細胞損傷的抑制作用［J］.華中農業大學學報，2014，33(2):103－110.

［19］陳瑾歆，何 軍，張娟娟，等.黃芪多糖對人肝癌細胞HepG2凋亡相關基因表達的影響［J］.中國老年學雜志，2014，34(1):124－126.

［20］馬 丹，謝曉娜，鄒敬濤，等.黃芪注射液對糖尿病大鼠腎臟的保護作用及其機制［J］.吉林大學學報(醫學版)，2014，40(2):267－269.

［21］鄧海鷗，林 凱，黎映蘭，等.黃芪多糖對老年早期糖尿病腎病者TNF－α、IL－6和免疫功能的影響［J］.中藥材，2014，37(4):713－716.

［22］包永睿，王 帥，孟憲生，等.薏苡仁脂肪酸類成分對人肝癌細胞株SMMC－7721細胞周期及細胞凋亡的影響［J］.中成藥，2014，36(2):235－239.

［23］張明發，沈雅琴.薏苡仁油抗肝癌的藥理作用與臨床應用［J］.現代藥物與臨床，2010，25(6):422－426.

［24］趙為武，李 俊，郭曉關，等.薏苡仁提取油的成分分析［J］.安徽農業科學，2014，42(1):257－258.