抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體提取方法探究

2015-12-14 09:23:26張桂榮王振輝劉玉梅劉

獸醫導刊 2015年18期

張桂榮王振輝劉玉梅劉軍

(1.吉林農業科技學院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松樹鎮畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正業生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體提取方法探究

張桂榮1王振輝1劉玉梅2劉軍3

(1.吉林農業科技學院,吉林吉林 132101; 2.吉林省白山市松樹鎮畜牧站,吉林吉林 134704; 3.吉林正業生物制品股份有限公司,吉林吉林 132101)

為了探究抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體的最佳提取方法。采用泊洛沙姆法卵黃抗體的脫脂方法試驗。通過對濃度、蛋白質含量、效價等結果進行比較。試驗結果顯示:由泊洛沙姆作為脂肪沉淀劑,其泊洛沙姆濃度為1.2%、辛酸濃度為0.2%時制得的抗體物理性狀好,抗體收率最高,效價高,抗體效價為1:64。

雛鴨病毒性肝炎;卵黃抗體;脫脂

1 方法

1.1 免疫雞蛋收集與蛋黃的分離

取收集的雞蛋，浸入42℃的0. 1%新潔爾滅水溶液中消毒15 min；隨后將雞蛋浸入溫度為95℃以上的水中消毒5 s，取出后于無菌條件下晾干或吹干；打蛋分離蛋清與卵黃，充分除去蛋清和卵黃系膜，將卵黃收集于一容器中，攪拌均勻，然后分別裝在三個容器內。

1.2 泊洛沙姆法雛鴨病毒性肝炎卵黃抗體去脂試驗[1]

泊洛沙姆法提卵黃抗體步驟

1.2.1 泊洛沙姆濃度的優化

分別取卵黃液20ml，用去離子水做4倍稀釋，加入泊洛沙姆，使其終濃度分別為0.6%、0.8%、1%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%。靜置后用紗布過濾，取上清。

1.2.2 pH值的優化

分別取卵黃液20ml，用去離子水做4倍稀釋，加入泊洛沙姆，使其終濃度為上步所得的最佳濃度。用稀鹽酸調pH值，使pH值分別為5.2、5.7、6.2、6.7、7.2、7.7。靜置后用紗布過濾，取上清。

1.2.3 辛酸濃度的優化

分別取卵黃液20ml，用去離子水做4倍稀釋，加入泊洛沙姆，使其終濃度為上步所得的最佳濃度和pH。靜置后用紗布過濾，取上清，加入不同濃度辛酸，靜置48h。此后去除上層脂肪層，將粗提的抗體液用微孔濾器過濾至澄清。

1.3 脫脂抗體的效價測定[2]

采用瓊脂擴散試驗測定抗體效價。將1%瓊脂溶于100ml的8%NaCl溶液的適量稀釋后的抗體與等量瓊脂混勻加入約0.01%的硫氯汞鈉鹽作為防腐劑，澆注成板，凝固后，在板上打孔，孔徑3mm，孔間距10mm，孔中加入抗原，每孔10μl，放置濕盒中，37℃溫箱，抗原就會向孔的四周擴散，邊擴散邊與瓊脂中的抗體結合。24～48h后觀察結果。

1.4 蛋白質濃度的測定

將制得的抗體液用飽和硫酸銨法沉淀蛋白后，各組試驗樣品以同樣的稀釋倍數稀釋，用ND-1000型紫外分光光度計測定卵黃抗體的蛋白含量。