高效液相色譜法測定飼料添加劑中糖精鈉含量

潘 城， 黃永輝， 黃何何， 謝 勇， 胡朝陽， 高 希

（福建省產品質量檢驗研究院，福建福州 350002）

糖精化學名為鄰磺酰苯甲酰胺，是一種人工甜味劑。糖精鈉以鈉鹽的形式存在，呈無色至白色結晶，易溶于水，無臭或微有芳香味，在生物體內不被分解。糖精鈉屬于食品添加劑，在味覺上能引起甜味，但對生物體沒有任何營養價值。當食用過多的糖精時，會影響腸胃消化酶的分泌，同時降低了小腸的吸收功能，使食欲降低 （曉唐，2004）。研究表明，糖精鈉會引起生理性質的變化，具有致癌作用（劉寧和沈明浩，2007）。

目前，對糖精鈉的測定方法包括分光光度法（周彤和戈早川，1999）、薄層色譜法（葉蔚云和羅健，1997）、毛細管電泳法（衷明華和李云，2009）、高效液相色譜法（謝麗琪等，2003；尹艷春和李智紅，2003）、離子色譜法（卜宇宏等，2011）以及液相色譜-質譜法（秦昉等，2005）等。分光光度法、薄層色譜法和毛細管電泳法容易產生假陽性，不能準確定量，而且耗時較長；液相色譜-質譜法具有很高的特異性，能夠準確地進行定性與定量，但費用高，無法普遍使用；高效液相色譜法具有分離效率高，選擇性好，檢測靈敏度高等特點，是常用的檢測方法。本實驗采用高效液相色譜法建立簡單、快速、準確的飼料添加劑中糖精鈉分離檢測技術。該方法的建立可為飼料添加劑中糖精鈉的合理、應用提供有效的技術支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Waters 2695高效液相色譜儀配光電二極管陣列檢測器 （美國Waters公司）；DS-8510超聲波發生器 （上海生析超聲儀器有限公司）；Milli Q超純水制備器（美國Milipor公司）。

甲醇，色譜純，山東禹王實業有限公司；其他試劑為分析純。糖精鈉（純度≥98.0%），購于美國sigma試劑公司。

1.2 標準儲備液和工作溶液配制 標準儲備液的配制：準確稱取糖精鈉標準品0.1 g，用超純水溶解并定容至100 mL，配制成濃度為1.0 mg/mL的標準儲備液。

標準工作液的配制：將糖精鈉標準儲備液采用逐級稀釋的方法配制成濃度為0.01～0.5 mg/mL系列標準工作溶液，所有標準儲備液和標準工作溶液均置于0～4℃冰箱中保存。

1.3 樣品前處理 稱取飼料添加劑樣品0.01 g于100 mL的燒杯中，加入50 mL超純水，于超聲波振蕩器中超聲萃取20 min后，轉移至100 mL容量瓶中，加入200 g/L乙酸鋅溶液和100 g/L亞鐵氰化鉀溶液各1 mL沉淀蛋白，超純水混勻定容至刻度。提取液經10000 r/min離心5 min后，取上清液，以0.45 μm濾膜過濾，濾液供分析用。

1.4 色譜條件 色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美國 Welch 公司）；柱溫：35 ℃；檢測波長230 nm；流速 1.0 mL/min；進樣量 10 μL。 流動相A：甲醇；流動相B：20 mmol/L乙酸銨溶液。梯度洗脫程序：0～ 13 min，7%A；13～13.5 min，7%A 線性增長至 60%A；13.5～15min， 保持 60%A；15～15.5 min，60%A 線性降低至 7%A；15.5～ 20 min，保持7%A。

2 結果與討論

2.1 色譜條件優化 C18色譜柱以硅膠為基質，在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團（ODS），固定相較為穩定，被廣泛運用。本方法采用C18柱可以很好地將糖精鈉與其他化合物分離。同時實驗比較了甲醇-水和甲醇-乙酸銨 （20 mmol/L）溶液兩種流動相體系，在甲醇-乙酸銨（20 mmol/L）溶液流動相體系下，目標物糖精鈉具有更好的峰形，因而選擇后者作為流動相。糖精鈉標準溶液色譜圖、飼料添加劑樣品色譜圖和飼料添加劑樣品加標色譜圖見圖1。

2.2 前處理條件優化 糖精鈉具有較好的水溶性，實驗結合超聲波振蕩器可充分萃取飼料添加劑樣品中的糖精鈉。提取液中的蛋白質等化合物可能會對測定樣品中的糖精鈉產生干擾，實驗通過選用乙酸鋅和亞鐵氰化鉀作為沉淀劑，降低了其他化合物對檢測準確性的影響。

圖1 糖精鈉標準溶液色譜圖（A）、飼料添加劑樣品色譜圖（B）和飼料添加劑樣品加標色譜圖（C）

2.3 線性方程、線性關系、檢出限及定量限 配制糖精鈉系列標準工作溶液，濃度為0.01～0.5 mg/mL，以糖精鈉的峰面積對濃度進行線性回歸，線性方程、相關系數、檢出限及定量限見表1。結果表明，糖精鈉為0.01～0.5 mg/mL時具有很好的線性關系，相關系數R為1.0000。以3倍信噪比（S/N=3）為檢出限，以10倍信噪比（S/N=10）為定量限，糖精鈉的檢出限為1.5 mg/g，定量限為5 mg/g。

表1 回歸參數和最低檢測限

2.4 回收率和精密度 在優化后的測試條件下，取空白飼料添加劑樣品進行加標回收率測試，加標水平分別為255、510、100 mg/g，每個水平重復分析3次，結果見表2。從表2可知，該方法的加標回收率為88.2%～98.6%，相對標準偏差RSD為0.4%～3.0%，結果表明，該方法適用于飼料添加劑中糖精鈉的日常分析檢測。

表2 糖精鈉加標回收率實驗結果

3 結論

本實驗采用超聲萃取法結合高效液相色譜-光電二極管陣列檢測器，建立了飼料添加劑中糖精鈉含量的測定方法。該方法操作簡單，準確可靠，靈敏度高，適用于飼料添加劑樣品中糖精鈉含量的測定。

[1]卜宇宏，李明，李靜.離子色譜測定白酒中甜蜜素、糖精鈉和安賽蜜[J].釀酒，2011，38（5）：71～73.

[2]劉寧，沈明浩．食品毒理學[M]．北京：中國輕工業出版社，2007.307.

[3]秦昉，王林祥，陶冠軍.液質聯用法同時測定黃酒中糖精鈉和甜蜜素[J].釀酒科技，2005，9：84～86.

[4]曉唐.糖精鈉對人體有哪些危害[J].監督與選擇，2004，7：11.

[5]謝麗琪，鄭衛平，岳振峰，等.焙烤食品中糖精鈉、富馬酸二甲酯、苯甲酸和山梨酸的高效液相色譜法測定[J].分析測試學報，2003，22（3）：94～96.

[6]葉蔚云，羅健.食品中糖精鈉的熒光猝滅薄層掃描測定[J].食品科學，1997，18（7）：55～57.

[7]尹艷春，李智紅.反相高效液相色譜法同時測定食品中甜蜜素、糖精鈉和苯甲酸鈉[J].理化檢驗：化學分冊，2003，39（8）：469～470.

[8]衷明華，李云.毛細管電泳法分離測定潮汕涼果中的山梨酸、苯甲酸、糖精鈉[J].光譜實驗室，2009，26（6）：1568～1571.

[9]周彤，戈早川.多波長線性回歸導數分光光度法同時測定飲料中糖精鈉和苯甲酸[J].分析實驗室，1999，18（3）：87～89.