肝龍膠囊和美洲大蠊脫脂膏對正常大鼠膽汁分泌的影響

夏盟愷，曾　菁，牛春麗，彭　芳

（大理學院藥學與化學學院，云南大理　671000）

肝龍膠囊和美洲大蠊脫脂膏對正常大鼠膽汁分泌的影響

夏盟愷，曾菁，牛春麗，彭芳*

（大理學院藥學與化學學院，云南大理671000）

目的：研究肝龍膠囊和美洲大蠊脫脂膏對正常大鼠膽汁分泌的影響。方法：取80只大鼠隨機分組，各組均按20 mL∕kg進行灌胃給藥，1次∕d，連續給藥7 d。采用大鼠膽汁流量實驗、膽汁成分分析觀察受試藥的利膽作用。結果：肝龍膠囊無利膽作用，對膽汁成分無影響；而美洲大蠊脫脂膏具有利膽作用，其膽汁流量與對照組比較差異有統計學意義（P＜0．05），使膽汁中TBL、DBL、IBL的含量降低（P＜0．05）。結論：肝龍膠囊對正常大鼠無利膽作用；美洲大蠊脫脂膏則有利膽作用。

肝龍膠囊;美洲大蠊脫脂膏；利膽作用

［DOI］10．3969∕j．issn．1672-2345．2015．02．002

膽汁淤積是由于膽汁生成障礙或流動障礙所造成的一種臨床綜合征。無論何種原因所致的膽汁淤積均可導致肝臟損傷和慢性膽汁淤積性肝病。膽汁淤積通常伴隨有血清堿性磷酸酶升高、黃疸和高膽固醇血癥，并逐步發展為肝硬化甚至肝功能衰竭〔1〕。

肝龍膠囊是國家食品藥品監督管理局正式登記在案的抗肝炎中藥新藥。已有眾多文獻證明肝龍膠囊有顯著的抗乙型肝炎療效〔2-3〕。現研究發現，肝龍膠囊還有一定的抗脂質過氧化能力〔4〕，對酒精性肝損傷以及化學試劑造成的急性肝損傷有一定的修復能力，延緩或抑制損傷因素對肝臟造成的炎癥反應〔5-6〕，以及控制和調節肌肉收縮的能力〔7〕。

美洲大蠊脫脂膏是將美洲大蠊干燥蟲體粉碎后，用15倍量95%乙醇冷浸提取3次，所得乙醇液合并，濃縮得提取浸膏。所得到的浸膏，上聚酰胺柱，依次用水及不同比例的含水甲醇洗脫，定量收集，分別濃縮。其中某一劃段成分經冷凍干燥后即為所用樣品。通過計算，所提取物占生藥的比率為0．2%。康復新液是根據云南大理白族人民應用蜚蠊治療惡瘡的有效經驗，從美洲大蠊藥材提取液中分離、精制而成的生物制劑，其成分復雜，含有18種氨基酸，其中丙氨酸最多，還含有動物油脂、蛋白質、多元醇類及肽類活性物質，其中康復新液主要成分美洲大蠊浸膏的濃度為0．04 mg∕mL。

上述研究結果提示肝龍膠囊具有一定的抗肝損傷作用，如能進一步探索美洲大蠊來源的系列產品是否影響膽汁的分泌，這對美洲大蠊更好地改善消化系統消化吸收功能及如何減輕炎癥發生具有重要的指導意義。

1　實驗材料與方法

1．1動物標準SD健康大鼠80只，雌雄各半，體重250～300 g，由昆明醫科大學動物中心提供，合格證號：SCXK（滇）2008-0003。

1．2實驗試劑及藥品肝龍膠囊（昆明賽諾制藥有限公司，批號：國藥準字Z20050113）；康復新液（昆明賽諾制藥有限公司，批號：國藥準字Z53020054）；美洲大蠊脫脂膏（大理學院藥學與化學學院劉光明教授提供）。

1．3器材AE240電子分析天平（瑞士梅特勒有限公司）；1．0R型低溫高速離心機（德國Heraeus公司）；7180型全自動生化分析儀（日本Hitachi公司）。

1．4樣品及所用藥物的配制肝龍膠囊樣品用生理鹽水配制為3個濃度：0．125%、0．25%、0．5%；美洲大蠊脫脂膏樣品用生理鹽水配制為3個濃度：0．25%、0．5%、1%。

1．5肝龍膠囊對正常大鼠膽汁分泌的影響取體重250～300 g大鼠80只，雌雄各半，隨機分為8組，肝龍膠囊高劑量組（100．00 mg∕kg）、中劑量組（50．00 mg∕kg）、低劑量組（25．00 mg∕kg）；美洲大蠊脫脂膏高劑量組（200．00 mg∕kg）、中劑量組（100．00 mg∕kg）、低劑量組（50．00 mg∕kg）；陽性組（康復新）（0．36 mg∕kg），對照組（生理鹽水）。肝龍膠囊、美洲大蠊脫脂膏組、對照組、康復新組均按20 mL∕kg對大鼠進行灌胃給藥，1次∕d，連續給藥7 d。實驗前12 h禁食不禁水，實驗前每鼠腹腔注射20%烏拉坦（0．5 mL∕100 g）后，行腹部手術，仰位固定于固定板上，沿腹正中線切開2 cm，打開腹腔，在十二指腸降部腸系膜中找到白色有韌性的膽管，在其下穿2根絲線，結扎乳頭部，向肝臟方向作V形切口，插入1 mL塑料管，用小燒杯收集膽汁。手術后用止血鉗夾閉腹壁，以鹽水紗布覆蓋。待穩定20 min后，收集大鼠給藥后所分泌4 h膽汁，每30 min換一個小燒杯收集，共收集8次。記錄膽汁流量。實驗結束測定4 h的膽汁分泌總量，計算膽汁的體質量系數〔8-11〕。并測定膽汁中的總膽固醇（Total cholesterol，TC），總膽紅素（Total bilirubin，TBL），直接膽紅素（Direct bilirubin，DBL），間接膽紅素（Indirect bilirubin，IBL）和總膽汁酸（To?tal bile acid，TBA）。

膽汁的體質量系數=膽汁重量（g）÷體重量（g）× 100%

2　實驗結果

2．1肝龍膠囊對正常大鼠膽汁流量的影響對膽汁分泌量的影響：與對照組比較，康復新液組膽汁分泌量顯著性增多（P＜0．01），美洲大蠊脫脂膏中劑量組增多（P＜0．05）；與康復新液組比較，肝龍膠囊高、中劑量組顯著性減少（P＜0．01），肝龍膠囊低劑量組、美洲大蠊脫脂膏3個劑量組膽汁分泌量與康復新液組比較差異無統計學意義（P＞0．05）。對膽汁系數的影響：與對照組比較，康復新液組膽汁系數顯著性增大（P＜0．01），美洲大蠊脫脂膏中劑量組增大（P＜0．05）；與康復新液組比較，肝龍膠囊高、中劑量組顯著性減小（P＜0．01），肝龍膠囊低劑量組、美洲大蠊脫脂膏3個劑量組膽汁系數與康復新液組比較差異無統計學意義（P＞0．05）。膽汁分泌量與膽汁系數成正比，膽汁分泌量越多，膽汁系數越大。見表1。

表1　肝龍膠囊對正常大鼠4 h膽汁流量的影響（，n=10）

表1　肝龍膠囊對正常大鼠4 h膽汁流量的影響（，n=10）

注：與對照組比較*P＜0．05，**P＜0．01；與陽性組比較##P＜0．01。

膽汁系數∕% 0．46±0．25 0．36±0．21##0．45±0．17##0．61±0．24 0．56±0．10 0．67±0．09* 0．53±0．17 0．76±0．22**組別對照組肝龍膠囊高劑量組肝龍膠囊中劑量組肝龍膠囊低劑量組美洲大蠊脫脂膏高劑量組美洲大蠊脫脂膏中劑量組美洲大蠊脫脂膏低劑量組康復新液組劑量∕（mg∕kg）—100．00 50．00 25．00 200．00 100．00 50．00 0．36膽汁分泌量∕mL 1．16±0．62 0．90±0．52##1．13±0．43##1．51±0．61 1．40±0．25 1．66±0．21* 1．32±0．42 1．89±0．54**

2．2肝龍膠囊對正常大鼠膽汁主要成分的影響

美洲大蠊脫脂膏3個劑量組對TBL、DBL、IBL均有下降作用，但結果未出現濃度依賴性。其中美洲大蠊脫脂膏中劑量組的膽紅素與對照組比較差異均有統計學意義（P＜0．05），美洲大蠊脫脂膏低劑量組的TBL、IBL與對照組比較差異有統計學意義（P＜0．05），康復新的IBL、TC與對照組比較差異有統計學意義（P＜0．05）。見表2。

3　討論

膽汁是膽道中流動的一種特殊液體，75%由肝細胞分泌，25%由膽管細胞分泌。膽汁的成分中97%是水，水中溶解許多成分，除了鈣、鈉、鉀、碳酸氫鹽等無機成分之外，還包括膽色素、TC、膽鹽、TBA等有機成分。

表2　肝龍膠囊對正常大鼠膽汁主要成分的影響（，n=10）

表2　肝龍膠囊對正常大鼠膽汁主要成分的影響（，n=10）

注：與對照組比較*P＜0．05，**P＜0．01；與陽性組比較#P＜0．05。

組別對照組肝龍膠囊高劑量組肝龍膠囊中劑量組肝龍膠囊低劑量組美洲大蠊脫脂膏高劑量組美洲大蠊脫脂膏中劑量組美洲大蠊脫脂膏低劑量組康復新液組劑量∕（mg∕kg）—100．00 50．00 25．00 200．00 100．00 50．00 0．36 TBL∕（μmol∕L）138．13±68．12 144．18±37．43#115．80±36．41 99．31±19．12 115．84±29．31 67．01±10．09* 72．33±30．62* 79．35±17．26 DBL∕（μmol∕L）109．99±57．38 121．79±27．47#97．71±30．28 84．45±15．75 101．08±23．86 58．21±10．37* 63．54±26．89 68．68±13．67 IBL∕（μmol∕L）28．05±9．98 22．39±6．28#18．09±6．49 14．86±6．10 14．76±5．58 8．80±0．81** 8．79±4．01** 10．68±3．13* TC∕（mmol∕L）TBA∕（μmol∕L）0．32±0．08 0．31±0．04#0．34±0．08#0．27±0．08 0．32±0．02#0．30±0．03#0．31±0．07#0．24±0．04* 153．11±23．70 147．71±36．79 156．33±12．39 145．64±30．89 169．73±17．66 152．45±36．55 171．55±42．97 137．68±23．13

TBA是膽汁的重要組成和功能部分，除了促進脂肪酸吸收的作用之外，它還具有兩個重要的功能：抑制TC沉淀形成膽結石、通過向膽汁的主動運輸促進水分和溶質的輸出。膽紅素是體內鐵卟啉化合物的主要代謝產物，也是臨床上判斷黃疸的重要依據，而且是肝功能的重要指標。

實驗結果表明，美洲大蠊脫脂膏中劑量組膽汁分泌量與對照組比較有較大的增加，且差異具有統計學意義（P＜0．05）；康復新液組與對照組比較膽汁分泌量增加明顯，差異具有統計學意義（P＜0．01），提示美洲大蠊脫脂膏中劑量組、康復新液組對大鼠膽汁分泌有不同程度的促進作用。美洲大蠊脫脂膏低劑量組對TBL、IBL均有降低作用，美洲大蠊脫脂膏中劑量組對TBL、DBL、IBL均有降低作用，2個劑量組IBL含量與對照組比較降低明顯，差異具有統計學意義（P＜0．01），提示美洲大蠊脫脂膏可能通過降低膽紅素來減少膽汁淤塞以及其它肝膽疾病的發病率；康復新液對IBL、TC也有降低作用（P＜0．05），提示康復新液可能是通過降低IBL、TC來促進膽汁的分泌及改善機體的消化功能。本次實驗中各組TBA含量與對照組比較差異沒有統計學意義（P＞0．05），提示康復新液、美洲大蠊脫脂膏促膽汁分泌作用可能與TBA含量變化無關。

實驗中肝龍膠囊各劑量組膽汁分泌量、膽汁系數與對照組比較差異無統計學意義（P＞0．05），肝龍膠囊高劑量組TBL、DBL、IBL含量與對照組比較差異無統計學意義（P＞0．05），與康復新液組比較有所增多（P＜0．05）；肝龍膠囊高、中劑量TC含量與對照組比較差異無統計學意義，與康復新液組比較亦有所增多（P＜0．05）。肝龍膠囊低劑量組膽汁流量、膽紅素含量及TC含量與康復新液組比較差異無統計學意義（P＜0．05），而高、中劑量組膽汁流量、膽紅素含量及TC含量與康復新組比較差異具有統計學意義（P＜0．05），提示實驗可能受大鼠個體因素、劑量設計等因素的影響。綜上所述，肝龍膠囊并無利膽作用，與康復新液組比較，出現了膽汁流量減少、膽紅素及膽固醇含量升高等效果。

從美洲大蠊脫脂膏組膽汁各成分變化來看，美洲大蠊脫脂膏可能為水利膽劑，除了降低膽紅素濃度并未改變其它成分在膽汁中的濃度。本次實驗中因為考慮實驗中取血對大鼠術后生存的影響以及麻醉對血清膽紅素成分的影響，并未進行血清膽紅素的評估，故無法判斷膽汁中膽紅素降低是否產生了對肝臟的保護效果以及減少黃疸發生的作用，有待進一步研究。

從實驗結果中我們發現，肝龍膠囊、美洲大蠊脫脂膏的3個劑量組并未呈現明顯的量效關系，肝龍膠囊低劑量組膽汁流量、膽汁系數與對照組比較雖未出現統計學差異，但出現了流量增加、系數增大的趨勢，效果比肝龍膠囊高、中劑量組好；美洲大蠊脫脂膏中劑量促膽汁分泌的效果比高劑量好，美洲大蠊中、低劑量組對膽紅素的降低效應也較高劑量組明顯，分析可能的原因為藥物劑量設計不好，提示用藥原則應以選擇較小劑量、長期應用。

由于研究還處于初期階段，未能對膽汁中其它成分的變化進行測定，故可能存在尚未研究出來美洲大蠊脫脂膏促膽汁分泌的機制，有待進一步深入研究。

〔1〕余豐，梁飛立，鄧梅花，等．肝內膽汁淤積性肝病的中西醫論治〔J〕．現代中西醫結合雜志，2013，22（9）:1019-1021．

〔2〕杜一民，陳鴻珊，李樹楠，等．治療乙型肝炎新藥肝龍膠囊的藥效學初步研究〔J〕．時珍國醫國藥，2006，17（8）: 1369．

〔3〕謝榮慧，劉云華，趙玉蓉．肝龍膠囊治療慢性乙型肝炎療效分析〔J〕．中西醫結合肝病雜志，2003，13（16）:336．

〔4〕張成桂，焦春香，何正春，等．肝龍不同有效部位體外抗氧化活性的分析〔J〕．時珍國醫國藥，2011，22（1）:69-71．

〔5〕張旭強，何旭，陳俊雅，等．肝龍膠囊CⅡ-3對大鼠急性酒精性肝損傷的保護作用〔J〕．大理學院學報，2011，10（12）:1-5．

〔6〕甘平，張旭強，何旭，等．美洲大蠊醇提物對小鼠急性肝損傷的保護作用〔J〕．現代藥物與臨床，2011，17（8）:123-128．

〔7〕何正春，劉光明．美洲大蠊神經肽的研究進展〔J〕．天然產物研究與開發，2008，20（7）：180-186．

〔8〕孫付軍，陳慧慧，王春芳，等．柴胡、黃芩藥對利膽作用研究〔J〕．中成藥，2011，33（8）:1418-1420．

〔9〕明海霞，陳彥文，黃世佐，等．甘肅金銀花對實驗動物膽汁分泌及膽囊平滑肌的影響〔J〕．中醫藥學報，2014，42（1）:65-67．

〔10〕張帆，龐雪冰．溪黃草浸膏對動物膽汁分泌及免疫功能的影響〔J〕．中國藥師，2012，15（4）:575-576．

〔11〕田靜，蔣小琴，潘旭旺，等．復方茵柏顆粒對大鼠急性肝損傷的保護作用及對膽汁分泌的影響〔J〕．中華中醫藥學刊，2012，30（12）:2761-2763．

（責任編輯李楊）

Effect of Ganlong Capsule and Periplaneta americana Skimmed Cream on Bile Secretion of Normal Rats

Xia Mengkai,Zeng Jing,Niu Chunli,Peng Fang*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To investigate the effect of Ganlong capsule and Periplaneta americana skimmed cream on bile secretion of normal rats．Methods:80 rats were randomly divided into groups．After seven consecutive days of intragastric administration of 20 mL∕kgonce a day to each group,the effect was observed by the bile flow experiment and the analysis of bile composition．Results: Ganlong capsule had no choleretic effec,and no effect on bile compositon．Periplaneta americana skimmed cream had choleretic effect, and compared with NS group,the difference in the bile flow was statistically significant(P＜0．05),and the content of TBL,DBL and IBL in bile decreased(P＜0．05)．Conclusion:Ganlong capsule had no choleretic effect;Periplaneta americana skimmed cream had choleretic effect．

Ganlong capsule;Periplaneta americana skimmed cream;choleretic effect

R965．1

A

1672-2345（2015）02-0004-04

2014-08-02

2014-12-05

夏盟愷，碩士研究生，主要從事藥理學研究．

彭芳，教授．