E-鈣黏蛋白基因啟動子區甲基化與膀胱癌關聯性的Meta分析

張書卿，張緒亮，張博，洪亮

E-鈣黏蛋白基因啟動子區甲基化與膀胱癌關聯性的Meta分析

張書卿，張緒亮，張博，洪亮

目的將既往有關E-鈣黏蛋白（CDH1）基因啟動子區甲基化與膀胱癌關系的研究進行Meta分析，評估CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌的具體關聯。方法參照Cochrane協作網制定的檢索策略在國內外相關數據庫進行檢索，篩選并納入文獻后，提取文獻信息：第一作者、文獻發表時間、國家、語種、研究設計、樣本量、種族、病理亞型、甲基化檢測方法、基因甲基化頻率等。采用STATA12.0進行Meta分析，計算優勢比（OR）及其95%可信區間（95%CI）。結果本Meta分析共計納入10項病例對照研究，通過檢測其中620例膀胱癌組織和341例正常或癌旁組織的CDH1基因甲基化頻率，結果發現膀胱癌組織中的甲基化頻率明顯高于正常或癌旁組織（OR=3.09，95%CI：1.13～8.50，P=0.029）；亞組分析結果顯示，在亞洲人群中膀胱癌組織中的甲基化頻率明顯高于正常或癌旁組織（OR= 3.85，95%CI：1.46～10.14，P=0.006），而在歐美人群中未發現此種差異（OR=2.22，95%CI：0.38～12.91，P=0.375）；采用MSP方法檢測時，膀胱癌組織與癌旁及正常組織間CDH1基因啟動子區甲基化頻率存在明顯差異（P＜0.001），采用Q-MSP方法檢測時，兩組CDH1基因啟動子區甲基化頻率無明顯差異（P=0.818）。結論CDH1基因啟動子區甲基化可能參與了膀胱癌的發生和發展。

E-鈣黏蛋白；甲基化；膀胱癌；Meta分析

膀胱癌是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，具有多發、高復發、預后差等特點，嚴重威脅患者的生命，成為一個重要的公共衛生問題[1-2]。在初次就診的膀胱癌患者中，有70%～80%是淺表性癌，多可經手術切除或經尿道電切術而治愈[3]。然而，20%～30%的復發患者伴有惡性程度增高或浸潤能力增強，且浸潤性膀胱癌的死亡人數是淺表性膀胱癌的2.459倍[4]。關于膀胱癌的發生機制目前尚不明確，分子生物學技術的發展使得對膀胱癌的認識也逐步深入，膀胱癌診斷與治療的未來方向將是在對其分子機制充分認識的基礎上進行[5]。最新研究顯示，多種抑癌基因啟動子區5′CpG島的高甲基化可導致基因失活，從而使蛋白表達下調進而促進腫瘤的發生發展[6]。E-鈣黏蛋白（E-cadherin，CDH1）基因是一種腫瘤抑制和腫瘤轉移抑制基因，于1995年首先克隆出來[7]。CDH1為鈣依賴性黏附蛋白家族中的重要成員，其表達于所有上皮細胞，在Ca2+的參與下介導細胞間的黏附[8]。近年來大量臨床病理學研究證實，CDH1表達下調或缺失是眾多惡性腫瘤的普遍現象，如頭頸部腫瘤、乳腺癌、食管癌、胃癌、結腸癌、膀胱癌及前列腺癌等[9]。研究還發現，CDH1下調與缺失可導致有關的腫瘤抑制基因失活，如CDH1基因5′端啟動子區甲基化與腫瘤的侵襲和轉移密切有關[10]，然而該結論尚存爭議。因此，本文將既往關于CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性的研究進行Meta分析，以期為膀胱癌的臨床診斷和治療提供科學依據。

1 資料與方法

1.1 檢索策略參照Cochrane協作網制定的檢索策略在以下數據庫進行檢索：Cochrane Library（1993—2013年）、MEDLINE（1966—2013年）、EMBASE（1980—2013年）、Web of Science（1945—2013年）、EBSCO-CINAHL（1982—2013年）、萬方（1998—2013年）和CNKI（1915—2013年）。檢索詞：甲基化、methylation、突變、mutation、膀胱癌、bladder cancer、E-鈣黏蛋白、CDH1、E-cadherin等。采用主題詞結合自由詞原則進行檢索，并手工檢索納入文獻的參考文獻以發現潛在符合納入標準的研究。

1.2 文獻納入標準（1）有關CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性的臨床對照研究或隊列研究。（2）所有患者均經術前膀胱鏡檢查及術后病理檢查證實為膀胱癌。（3）納入文獻病例數不少于30例。（4）文獻的語種為中文或英文。（5）納入文獻應提供完整的病例資料如甲基化頻率等數據，若同一作者采用相同資料進行了多項研究并發表，則僅納入樣本量最大的或者最近發表的研究。

1.3 數據提取采用統一制定的數據收集表，由兩位研究者分別獨立提取數據，包括第一作者、文獻發表時間、國家、語種、研究設計、樣本量、種族、病理亞型、甲基化檢測方法、基因甲基化頻率等。數據提取過程中若出現爭議，通過與第三方討論解決分歧。

1.4 納入文獻質量評價由2位研究者根據STREGA原則分別對納入文獻的質量進行評價：（1）樣本量是否充分。（2）是否詳細介紹診斷標準。（3）分組匹配情況。（4）組間是否具有可比性，對照組基因型分布應符合Hardy-Weinberg（H-W）遺傳平衡定律。（5）基因檢測方法是否合理。（6）數據是否充分。每滿足一項記為1分，總分≥3分者為高質量文獻。

1.5 統計學方法Meta分析采用STATA 12.0軟件進行。CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性關聯的強弱程度用優勢比（odds ratios，OR）及其95%可信區間（95%CI）表示，并對OR值的顯著性進行Z檢驗。根據研究對象的種族、甲基化檢測方法的不同進行亞組分析。使用以卡方檢驗為基礎的Q檢驗衡量樣本的同質性，并以I2值的大小評價多個納入研究之間同質性的程度（I2值愈大提示異質性愈明顯）。各研究間異質性采用Cochrane Q檢驗進行評價，若P＜0.10則提示存在異質性，采用隨機效應模型（DerSimonian Laird法）分析，反之則采用固定效應模型（Mantel-Haenszel法）分析。采用Begger漏斗圖和Egger線性回歸分析納入文獻是否存在發表偏倚以評價原始分析結果的真實可靠性。

2 結果

2.1 納入研究的基本信息最初檢索到相關文獻113篇，根據其題目和關鍵詞剔除45篇，進一步閱讀摘要、全文及數據后剔除58篇，最終10項病例對照研究符合納入標準[11-20]，文獻篩選過程見圖1，發表時間2001年—2012年。本Meta分析共計762例研究對象，包括620例膀胱癌患者和142例健康對照人群。762例研究對象中共收集961例組織樣本進行CDH1基因啟動子區甲基化頻率檢測，包括620例膀胱癌組織，199例癌旁組織，142例正常膀胱上皮組織。納入研究中8項采用特異性聚合酶鏈式反應（MSP）法檢測，另2項采用定量甲基化特異性聚合酶鏈反應（Q-MSP）法檢測。納入文獻的基線特征和質量評價見表1。

Fig.1Flow chart of literature search and study selection圖1 文獻篩選流程圖

2.2 CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性10項研究之間存在明顯的異質性（I2=81.5%，P＜0.001），因此采用隨機效應模型來分析CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性的關聯，結果發現膀胱癌組織的CDH1基因啟動子區的甲基化比例明顯高于癌旁及正常組織（OR=3.09，95%CI：1.13～8.50，P=0.029），見圖2。

Tab.1Baseline characteristics and methodological quality of all included studies表1 納入文獻基線特征與質量評分

Fig.2The forest plot of CDH1 gene promoter methylation associated with bladder cancer susceptibility圖2 CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性關聯的森林圖

2.3 亞組分析研究對象種族亞組分析結果示：亞洲人群膀胱癌組織中CDH1基因啟動子區甲基化頻率較高（OR=3.85，95%CI：1.46～10.14，P=0.006），而在歐美人群中沒有出現此結果（OR=2.22，95% CI：0.38～12.91，P=0.375），見圖3A。檢測方法亞組分析結果示：采用MSP方法檢測時，膀胱癌組織與癌旁及正常組織間CDH1基因啟動子區甲基化頻率存在明顯差異，采用Q-MSP方法檢測時，兩組CDH1基因啟動子區甲基化頻率無明顯差異，見圖3B。

2.4 異質性與發表偏移評價本研究采用逐一刪除納入研究進行敏感性分析以評價單一研究對總體結果的影響，結果表明無單一研究可顯著影響原始分析和亞組分析結果。Begger漏斗圖顯示圖形對稱提示無明確發表偏移，Egger線性回歸分析進一步證實納入文獻無發表偏移（t=2.60,P=0.019）。

Fig.3Subgroup analysis of CDH1 gene promoter methylation associated with bladder cancer susceptibility圖3 CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性關聯亞組分析圖

3 討論

人類腫瘤的發生、發展與DNA甲基化的異常修飾有關，而且早在腫瘤臨床確診之前就可檢測出特異基因的甲基化異常現象。李才政等[21]研究亦表明CDH1表達異常在膀胱癌的惡性進展中起重要作用，提示CDH1為一種侵襲抑制分子，可作為判斷膀胱癌惡性程度的指標。

本Meta分析結果提示CDH1基因啟動子區甲基化可能是導致CDH1蛋白表達降低的原因之一，由于本Meta分析存在研究間異質性，故根據種族進行了亞組分析，結果表明CDH1基因啟動子區甲基化與亞洲人群膀胱易感性密切相關，而與歐美人群無關。提示地域和種族因素是影響疾病易感性個體差異的重要原因，但造成這一差異的具體分子學機制尚不完全明確，可能與物種進化及自然選擇有關[22]。根據檢測方法不同進一步進行亞組分析結果表明，當納入研究采用MSP檢測方法時，膀胱癌組織與癌旁及正常組織間CDH1基因啟動子區甲基化頻率存在明顯差異，但當納入研究采用Q-MSP方法檢測時，兩組CDH1基因啟動子區甲基化頻率無統計學差異。本次研究的結果和既往研究結果基本一致，證實了CDH1基因啟動子區甲基化是膀胱癌的危險因素，它可能是膀胱癌早期診斷和預后判定的潛在生物標志物。

與其他Meta分析一樣，本研究存在一定的不足與局限性。首先，納入文獻過少可能無法全面評價CDH1基因啟動子區甲基化與膀胱癌易感性的真實關聯，并可能影響本Meta分析結果的統計效能。因此，仍需進一步開展樣本量更大的臨床研究以提供更具代表性的統計分析。其次，作為一種回顧性研究，Meta分析可能存在回顧或選擇偏移，也可能會影響本研究結果的可信度。再者，由于無法獲取納入研究的原始數據，導致無法評價其他指標如臨床分期、年齡、性別等因素聯合CDH1基因啟動子區甲基化對膀胱癌易感性的影響。

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(2014-05-25收稿2014-07-25修回)

（本文編輯閆娟）

Role of E-cadherin gene promoter methylation in bladder carcinogenesis:a Meta-analysis

ZHANG Shuqing,ZHANG Xuliang,ZHANG Bo,HONG Liang
Department of Surgical Oncology,Huangshi Central Hospital,Huangshi 435000,China

ObjectiveTo assess the role of E-cadherin(CDH1)promoter methylation in bladder carcinogenesis by meta-analysis.MethodsThe relevant database were searched by the retrieval strategy of Cochrane network.All included studies were collected following data:the first author’s surname,publication year of article,country,language of publication, design of study,sample size,ethnicity,histological subtypes,methylation detection method and genotype frequencies etc. This meta-analysis was performed using the STATA 12.0 software.The crude odds ratio(OR)with 95%confidence interval (CI)was calculated.ResultsTen case-control studies were included in this meta-analysis.The methylation frequency of CDH1 was detected in 620 bladder cancer tissues and 341 normal or cancerous tissues.Results showed that the methylation frequency of CDH1 was significantly higher in bladder cancer tissue than that of normal or cancerous tissue(OR=3.09,95% CI:1.13～8.50,P=0.029).Furthermore,the ethnicity-stratified analysis revealed that the methylation frequency of CDH1 was significantly higher in bladder cancer tissue of Asian populations than that of normal or cancerous tissue(OR=3.85,95% CI:1.46～10.14,P=0.006),but no such association was found in Caucasian populations（OR=2.22,95%CI:0.38-12.91,P= 0.375).The subgroup analysis based on the detection methods revealed that there was a statistically significant difference in the methylation frequency of CDH1 between bladder cancer tissue and adjacent tissues and normal tissues under the MSP subgroup(P＜0.001),while such association was not observed under the Q-MSP subgroup(P=0.818).ConclusionPromoter methylation of CDH1 gene may be involved in the occurrence and development of bladder cancer,which may serve as a biomarker for diagnosis and prognosis of bladder cancer.

E-cadherin;methylation;bladder cancer;Meta-analysis

R737.14

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2015.01.026

湖北省黃石市中心醫院普愛病區腫瘤外科（郵編435000）

張書卿（1980），男，主治醫師，學士，主要從事胸腹部腫瘤的基礎與臨床研究