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水貂細菌病的病原分離·鑒定及藥敏試驗

2015-12-22 01:49:42徐云飛王贈超鄒玲李文立任慧英青島農業大學動物科技學院山東青島266109
安徽農業科學 2015年12期

徐云飛,王贈超,鄒玲,李文立,任慧英(青島農業大學動物科技學院,山東青島266109)

山東省地處沿海地區,其得天獨厚的地理和氣候條件,加上發達的畜禽養殖業和豐富的海洋漁業資源,為水貂養殖業的發展提供了堅實的基礎,使山東省成為全國水貂養殖的大省。據海關貿易總署統計,全國平均年產水貂皮1 200萬張,其中山東省占2/3。目前,在山東省沿海地區和家禽養殖大縣,水貂養殖業已經成為農民增收的主要手段,成為當地經濟發展和農民致富的支柱產業[1-2]。然而,由于養殖密度過大、疾病防疫意識淡薄等原因,水貂傳染病不斷發生,給水貂養殖業造成巨大的經濟損失。筆者對某水貂場的病死水貂進行病原的分離、鑒定及藥敏試驗,以期避免抗菌藥的濫用,減少耐藥菌株的產生,為臨床治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 病料 病料來自山東威海某水貂養殖場病死水貂。

1.2 試劑與儀器 普通營養瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、三糖鐵瓊脂培養基,均購自北京路橋技術有限責任公司;微量糖發酵管和藥敏紙片,均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 細菌的分離培養 無菌條件下,取病死水貂心臟、肝臟、肺臟等病料劃線接種于普通營養瓊脂培養基和麥康凱培養基上,37℃下培養24 h。挑取單個菌落進行革蘭氏染色后,置于顯微鏡下進行鏡檢。

1.4 細菌的生化鑒定 挑取單菌落分別接種于微量糖發酵管、三糖鐵瓊脂培養基,對疑似腸桿菌科的細菌,按照常規方法進行吲哚、MR、VP及檸檬酸鹽利用試驗(簡稱IMViC試驗)[3]。

1.5 藥敏試驗 將純化的菌落接種于普通肉湯,37℃搖床培養12 h。將新鮮菌液用滅菌生理鹽水稀釋至濃度108CFU/ml,用滅菌的棉棒涂布于普通瓊脂平板。然后,將18種藥敏紙片貼在培養基的表面,37℃培養18 h后觀察結果[4],按照 CLSL 標準進行藥物敏感性評價[5]。

表1 各分離菌株的生化試驗結果及檢出率

2 結果與分析

2.1 細菌分離培養及鑒定結果 由表1可知,在病死水貂中共分離到7種細菌,共17株,菌落形態、染色特性及生化試驗表明全部為革蘭氏陰性菌,隸屬腸桿菌科。其中,分離率最高的細菌為大腸桿菌(59%),其次為哈夫尼菌(12%);另外,還分離到耶爾森菌、成團泛菌、志賀氏菌、沙門氏菌和克雷伯菌,占分離菌株的29%。在麥康凱培養基上,大腸桿菌和克雷伯菌形成紅色菌落,但克雷伯菌的菌落粘稠,用接種環可挑起絲狀物,另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶爾森、成團泛菌、志賀氏菌和沙門氏菌均不能利用乳糖,所以在麥康凱培養基上均形成無色菌落,在三糖鐵培養基上的表現及IMViC試驗結果均存在差異。

2.2 藥敏試驗結果 從表2可以看出,70%以上的菌株對頭孢派酮、頭孢西叮、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感,23%以上的菌株對頭孢哌酮、阿米卡星的敏感性處于中介,30%以上的菌株對頭孢噻吩、頭孢呋辛、環丙沙星、諾氟沙星、鏈霉素、氯霉素、四環素和氨芐西林耐藥。所有分離菌株對頭孢西叮、頭孢他啶和頭孢吡肟均敏感。

表2 藥敏試驗結果

3 討論

目前臨床上治療水貂細菌性疾病的藥物有很多,但由于養殖戶長期濫用抗生素,使細菌的耐藥性不斷增加,造成水貂患病后缺乏有效藥物,甚至無藥可用。該試驗結果發現從病死水貂體內分離出的7種細菌對15種抗生素均產生了一定程度的耐藥性。同時試驗結果也表明,同一種細菌不同菌株的耐藥性也不相同。這與細菌表達的多樣性有關[6]。因此,同一種細菌引發的感染用相同的藥物治療,治療效果可能會差別很大,一旦出現治療無效的情況應立即進行藥敏試驗,篩選敏感藥物,加以治療。但是,由于細菌耐藥性的產生與抗生素的長期大劑量使用有關,在臨床治療中應選擇比較敏感的藥物聯合或交替使用,以減少單個藥物的使用劑量和使用時間,從而減緩耐藥菌株的產生[7]。

水貂細菌病的發生是由多種病原引起的。對某水貂養殖場進行了連續檢測,共分離到7種細菌,均為腸桿菌科細菌,說明腸桿菌科的細菌是目前水貂細菌病發生的主要病原。腸桿菌科細菌中,沙門氏菌、志賀氏菌、克雷伯菌、大腸桿菌和耶爾森菌對人和動物具有廣泛的致病性[8],具有重要的公共衛生意義,應引起足夠重視。哈夫尼菌和成團泛菌大多為條件致病菌,水貂患此類細菌病與水貂的抵抗力降低有直接關系[9-10]。在氣候突變、管理不當時,水貂抵抗力下降,環境中和體內的條件性致病菌容易入侵機體,引起疾病的發生,但一般不會造成大面積流行。

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