水貂細菌病的病原分離·鑒定及藥敏試驗

徐云飛，王贈超，鄒玲，李文立，任慧英(青島農業大學動物科技學院，山東青島266109)

山東省地處沿海地區，其得天獨厚的地理和氣候條件，加上發達的畜禽養殖業和豐富的海洋漁業資源，為水貂養殖業的發展提供了堅實的基礎，使山東省成為全國水貂養殖的大省。據海關貿易總署統計，全國平均年產水貂皮1 200萬張，其中山東省占2/3。目前，在山東省沿海地區和家禽養殖大縣，水貂養殖業已經成為農民增收的主要手段，成為當地經濟發展和農民致富的支柱產業［1－2］。然而，由于養殖密度過大、疾病防疫意識淡薄等原因，水貂傳染病不斷發生，給水貂養殖業造成巨大的經濟損失。筆者對某水貂場的病死水貂進行病原的分離、鑒定及藥敏試驗，以期避免抗菌藥的濫用，減少耐藥菌株的產生，為臨床治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 病料 病料來自山東威海某水貂養殖場病死水貂。

1.2 試劑與儀器 普通營養瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、三糖鐵瓊脂培養基，均購自北京路橋技術有限責任公司;微量糖發酵管和藥敏紙片，均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 細菌的分離培養 無菌條件下，取病死水貂心臟、肝臟、肺臟等病料劃線接種于普通營養瓊脂培養基和麥康凱培養基上，37℃下培養24 h。挑取單個菌落進行革蘭氏染色后，置于顯微鏡下進行鏡檢。

1.4 細菌的生化鑒定 挑取單菌落分別接種于微量糖發酵管、三糖鐵瓊脂培養基，對疑似腸桿菌科的細菌，按照常規方法進行吲哚、MR、VP及檸檬酸鹽利用試驗(簡稱IMViC試驗)［3］。

1.5 藥敏試驗 將純化的菌落接種于普通肉湯，37℃搖床培養12 h。將新鮮菌液用滅菌生理鹽水稀釋至濃度108CFU/ml，用滅菌的棉棒涂布于普通瓊脂平板。然后，將18種藥敏紙片貼在培養基的表面，37℃培養18 h后觀察結果［4］，按照 CLSL 標準進行藥物敏感性評價［5］。

表1 各分離菌株的生化試驗結果及檢出率

2 結果與分析

2.1 細菌分離培養及鑒定結果 由表1可知，在病死水貂中共分離到7種細菌，共17株，菌落形態、染色特性及生化試驗表明全部為革蘭氏陰性菌，隸屬腸桿菌科。其中，分離率最高的細菌為大腸桿菌(59%)，其次為哈夫尼菌(12%);另外，還分離到耶爾森菌、成團泛菌、志賀氏菌、沙門氏菌和克雷伯菌，占分離菌株的29%。在麥康凱培養基上，大腸桿菌和克雷伯菌形成紅色菌落，但克雷伯菌的菌落粘稠，用接種環可挑起絲狀物，另外也不能利用蔗糖。哈夫尼菌、耶爾森、成團泛菌、志賀氏菌和沙門氏菌均不能利用乳糖，所以在麥康凱培養基上均形成無色菌落，在三糖鐵培養基上的表現及IMViC試驗結果均存在差異。

2.2 藥敏試驗結果 從表2可以看出，70%以上的菌株對頭孢派酮、頭孢西叮、頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢吡肟、左氧沙星和磷霉素敏感，23%以上的菌株對頭孢哌酮、阿米卡星的敏感性處于中介，30%以上的菌株對頭孢噻吩、頭孢呋辛、環丙沙星、諾氟沙星、鏈霉素、氯霉素、四環素和氨芐西林耐藥。所有分離菌株對頭孢西叮、頭孢他啶和頭孢吡肟均敏感。

表2 藥敏試驗結果

3 討論

目前臨床上治療水貂細菌性疾病的藥物有很多，但由于養殖戶長期濫用抗生素，使細菌的耐藥性不斷增加，造成水貂患病后缺乏有效藥物，甚至無藥可用。該試驗結果發現從病死水貂體內分離出的7種細菌對15種抗生素均產生了一定程度的耐藥性。同時試驗結果也表明，同一種細菌不同菌株的耐藥性也不相同。這與細菌表達的多樣性有關［6］。因此，同一種細菌引發的感染用相同的藥物治療，治療效果可能會差別很大，一旦出現治療無效的情況應立即進行藥敏試驗，篩選敏感藥物，加以治療。但是，由于細菌耐藥性的產生與抗生素的長期大劑量使用有關，在臨床治療中應選擇比較敏感的藥物聯合或交替使用，以減少單個藥物的使用劑量和使用時間，從而減緩耐藥菌株的產生［7］。

水貂細菌病的發生是由多種病原引起的。對某水貂養殖場進行了連續檢測，共分離到7種細菌，均為腸桿菌科細菌，說明腸桿菌科的細菌是目前水貂細菌病發生的主要病原。腸桿菌科細菌中，沙門氏菌、志賀氏菌、克雷伯菌、大腸桿菌和耶爾森菌對人和動物具有廣泛的致病性［8］，具有重要的公共衛生意義，應引起足夠重視。哈夫尼菌和成團泛菌大多為條件致病菌，水貂患此類細菌病與水貂的抵抗力降低有直接關系［9－10］。在氣候突變、管理不當時，水貂抵抗力下降，環境中和體內的條件性致病菌容易入侵機體，引起疾病的發生，但一般不會造成大面積流行。

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