分析不同化學藥物中有關物質的分析方法

周之鴿(江蘇省蘇州市東曜藥業有限公司，江蘇 蘇州 215126)

化學藥物中的有關物質對于藥品的純度有著重要的影響，會造成藥物療效的降低，甚至會對人體產生危害或者發生嚴重的不良反應。化學藥物中的有關物質多是有機物，其來源主要是藥物制備過程中的中間物。

1 HPLC法分析安乃近中的有關物質

1.1 儀器和試劑材料準備

HPLC法分析需要使用的儀器主要有:HPLC儀、電子天平和pH試紙，需要使用的試劑包含甲醇，三乙胺、超純水和磷酸二氫鈉二水合物。

1.2 溶液制備

精密稱取安乃近樣品50mg放入10mL的容量瓶中，然后用無水甲醇溶解，并稀釋到刻度，制成濃度為5mg/mL的溶液樣本，作為供試品溶液。溶液需要隨用隨配，不能用放置許久的樣品。另精密稱取4-N-去甲基安乃近5mg放入到200mL的容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，搖勻，制成濃度為2.5ug/mL的溶液樣本，作為對照溶液[1]。

1.3 色譜工作條件

色譜柱狀態為ODSC184.6*150mm,5um，HPLC儀的檢測波長控制在254nm，流動相內的甲醇與磷酸鹽緩沖液(1000mL濃度為6.0g/L的磷酸二氫鈉二水合物，加入1mL的三乙胺，并用高濃度氫氧化鈉將pH值調為7)的比例為25:75，流速為1.0mL/min,進樣量為 10ul。

1.4 進樣

在上述色譜儀條件下，取供試品溶液和對照溶液10ul，按藥典規定，分別注入到HPLC儀中，得到的色譜圖分別如圖1和圖2。

將圖1與圖2對比可得，4-N去甲基安乃近發生時間在6分鐘左右，因此，由圖1和圖2綜合可得安乃近樣品所含的雜質種類，具體如圖3所示，且4-N去甲基安乃近的波峰已確定。

圖1 :安乃近樣品(供試品溶液)色譜圖

圖2 :安乃近樣品(對照溶液)色譜圖

圖3 :安乃近樣品所含雜質色圖譜

圖4 :甲酰氨基安替比林色譜圖

據圖3可知，色圖譜中還存在未知雜質1和未知雜質2，根據安乃近生成過程中的有關物質，可以確定這兩種未知雜質分別可能為甲酰氨基安替比林和氨基安替比林。在HPLC儀工作條件不變的情況下，取合成中間體甲酰氨基安替比林、氨基安替比林進行色譜分析，可以分別得到圖4、圖5的色譜圖，再將適量的兩種物質同時加入到安乃片樣品中，可以得到兩種對照品的色譜圖(圖4)[2]。

圖5 :氨基安替比林色譜圖

圖6 :安乃近加入兩種對照品后的色譜圖

根據色譜圖4、5、6對比分析可以得出:兩個未知雜質的保留時間與甲酰胺基安替比林和氨基安替比林完全一致；再對圖4進行分析，明顯可以看出在加入兩種對照品后，原有的兩種雜質色譜波峰出現明顯的升高。據此兩點可以判定安安乃近中的兩種未知雜質分別是甲酰胺基安替比林和氨基安替比林。

2 UPLC法分析三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液的有關物質

2.1 儀器和試劑材料準備

UPLC法分析需要使用的儀器主要有:UPLC儀、電子天平，需要使用的試劑包含枸櫞酸、枸櫞酸鈉、四丁基溴化銨以及濃度為10%的四丁基氫氧化銨溶液、超純水。

2.2 溶液制備

酸破壞溶液:三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL，加入1毫升2mol/l的HCL溶液，沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調為6.5，加入10mL水。

堿破壞溶液，三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL，加入1毫升3mol/l的NaOH溶液,在沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調為6.5，再加入10mL水。

氧化破壞溶液:三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL，加入1毫升30%的過氧化氫溶液,在沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調為6.5，再加入10mL水。

氧化破壞空白溶液:取1毫升30%的過氧化氫溶液,加水10mL,在沸水中放2h，取出冷卻后將pH值調為6.5，再加入10mL水。

高溫破壞溶液:三磷酸胞苷二鈉氯化鈉注射液10mL,在沸水中放4h，取出冷卻再加入10mL水。

2.3 色譜工作條件

色譜柱狀態為HSS T3 50mm*2.1nm,1.8um，UPLC儀的檢測波長控制在280nm，流動相為枸櫞酸鹽緩沖液(取9.76g枸櫞酸和1.03g枸櫞酸鈉到1000mL容器中，先加900mL的水進行溶解，并將pH值調為3.0，再加入2.5mL10%濃度的四丁基氫氧化銨,最后加水到刻度)，流速為1.0mL/min,進樣量為10ul，柱溫25℃[3]。

2.4 進樣

在上述色譜儀條件下，分別取各種溶液10ul，按藥典規定，分別注入到UPLC儀中，得到的色譜圖分別如下:

據圖分析可得，三磷酸胞苷二鈉氯化鈉的主要成分保留時間在14.7min，通過酸、堿、高溫和氧化破壞后，各種有關物質能夠與主峰產生較好的分離，根據專屬性實驗，可以確定其有關物質分別為一磷酸胞苷二鈉和二磷酸胞苷二鈉[4]。

3 結語

隨著人們生活水平的日益提高和健康意識的逐步提升，對于藥物的質量要求也會越來越高，因此，必須加強對化學藥物中有關成分的判定與分析，以控制其含量，提高化學藥物的質量。HPLC和UPLC作為化學藥物有關物質判定的有效方法，應加強對兩種方法的了解與掌握，提高有關物質分析的效率。

[1]黃紅深.安乃近有關物質檢查[J].北方藥學,2011,(02):7-8.

[2]李濤,胡昌勤,畢開順.洛伐他汀有關物質HPLC分析方法的優化[J].藥物分析雜志,2011,(09):1707-1714.

[3]雷勇勝,宋麗明,蔣慶峰.液質聯用技術在藥物的有關物質分析中的應用[J].現代儀器,2011,(04):9-13+8.

[4]張彤,周長明,韓南銀.HPLC法測定三磷酸胞苷二鈉注射液的有關物質和含量[J].藥物分析雜志,2013,(01):154-158.