規模化豬場豬偽狂犬病毒野毒感染的血清學調查

（浙江博信藥業有限公司浙江湖州313307）

規模化豬場豬偽狂犬病毒野毒感染的血清學調查

占永祥，姜禮輝

（浙江博信藥業有限公司浙江湖州313307）

本次實驗主要是為了更好地了解浙江周邊規模化豬場偽狂犬野毒感染的情況。本實驗采用豬偽狂犬病毒野毒抗體ELISA診斷方法，對浙江周邊5個規模化豬場不同日齡段商品豬和公母豬的292份豬血清進行檢測分析。從檢測結果可知：現階段豬偽狂犬野毒感染情況比較嚴重，檢測結果是平均野毒陽性率為34.2%，其中5個場的野毒抗體最低為17.4%，最高為66.7%。

豬；偽狂犬；血清學；感染情況

豬偽狂犬病（Pseudorabies，PR）是由豬偽狂犬病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病。豬是該病的主要宿主和傳染源，健康豬與患豬、帶毒豬直接接觸可感染該病。母豬出現返情、屢配不孕，妊娠母豬流產，產木乃伊胎、死胎和產弱仔；初生仔豬帶毒感染率和死亡率可達100%；0～4周齡仔豬出現腹瀉及神經癥狀，4～12周齡豬出現神經癥狀或呼吸道疾病，12周齡至出欄育肥豬感染后多耐過，不發病呈隱性感染，呈現呼吸道疾病，對抗生素不敏感。造成長期帶毒、排毒，成為最危險的傳染源，表現為生長緩慢、飼料報酬降低，嚴重影響養豬生產。許多國家和地區都報道過該病的流行，隨著養豬業集約化規模化的發展，全國大部分省市已經呈現大面積的發病，并在許多豬場呈暴發流行趨勢，給我國養豬業造成了巨大的經濟損失。2014年12月-2015年3月筆者對浙江衢州、湖州5個規模場的豬血樣進行偽狂犬野毒調查，并提出相應的防控措施，現報告如下：

1 材料與方法

1.1 調查對象

浙江衢州、湖州5個規模化養豬場的不同日齡段商品豬和公母豬的292份豬血清進行檢測分析。

1.2 血液采集

2人1組，1人保定，1人采血。酒精棉球消毒，用5 mL一次性注射器從被檢豬前腔靜脈采集豬全血2～3 mL,采集后成斜面置保溫箱中，帶回分離血清，立即檢測。

1.3 診斷試劑盒

中美合資某品牌公司生產的豬偽狂犬病病毒gpI抗體檢測試劑盒（批號：281440），包括已包被好抗原的96孔酶聯反應板，標準陰、陽性血清對照，辣根過氧化物酶（HRPO），酶標抗體，TMB底物溶液、終止液、稀釋液、洗滌液等。

1.4 實驗儀器

酶聯免疫檢測儀、移液器（20～200 μL、200～1 000 μL）與移液器匹配的吸頭、恒溫箱、離心管、記號筆等。

1.5 實驗采用ELISA法

1）所有試劑盒在使用前一律恢復至18～26℃并使沉淀的鹽溶解。使用前濃縮液應用蒸餾水進行10倍稀釋。

2）在2個適當孔內分別加入100 μL 2倍稀釋（1∶2）的陰性對照。

3）在2個適當孔內分別加入100 μL 2倍稀釋（1∶2）的陽性對照。

4）在其余的孔內分別加入100 μL已稀釋好的被檢樣品。

5）用封板膜將反應板封閉，在18～26℃條件下孵育60 min。

6）時間到后，甩掉孔中的溶液，用洗滌液洗板3～5次，300 μL/孔，最后一次拍干。

7）每孔加酶標抗體-辣根過氧化物酶100 μL，置18～26℃孵育20 min。

8）時間到后，甩掉孔中溶液，洗滌3～5次，最后一次拍干。

9）每孔加TMB底物100 μL，置18～26℃孵育15 min。

10）每孔加終止液50 μL，使反應終止。

11）結果判定，在酶標儀上測各孔OD650值。通過計算樣品與陰性對照的比例（S/N）來確定偽狂犬野毒抗體的有無。陰性對照的平均值減去陽性平均值必須＞0.300，實驗方能有效。如果實驗無效操作可能有誤，試驗應重做。

S/N=樣品OD650值/陰性對照平均OD650值，注：①S/N小于或等于0.60，樣品確定為陽性；②S/N＞0.7，樣品確定為陰性；③0.6＜S/N≤0.7，樣品應重測。

2 檢測結果

各豬場不同日齡段商品豬和公母豬偽狂犬病毒野毒感染的檢測結果。

表1～3是衢州地區豬場，表4～5是湖州地區豬場，表6是整個結果陽性率統計。

表1 1場豬偽狂犬野毒感染的檢測結果（2014年12月11日）

表2 2場豬偽狂犬野毒感染的檢測結果（2014年12月18日）

表3 3場豬偽狂犬野毒感染的檢測結果（2015年1月21日）

表4 4場豬偽狂犬野毒感染的檢測結果（2015年2月10日）

表5 5場豬偽狂犬野毒感染的檢測結果（2015年3月24日）

表6 5個場豬偽狂犬病毒野毒感染的檢測結果統計表

3 實驗分析

本次實驗從表1～5可以看出偽狂犬帶毒發病現象還是比較嚴重。豬場野毒感染最高66.7%，最低17.4%。說明豬偽狂犬病野毒感染仍普遍存在，對養豬業帶來嚴重的經濟損失。

4 防控措施

4.1 制定合理的免疫程序

初生仔豬在0～3日齡首次滴鼻免疫，越早越好，讓疫苗占位三叉神經，起到保護作用，不受母源抗體干擾。每頭乳豬滴鼻1頭份，每鼻孔0.5頭份。然后在10周齡和14周齡進行第2次、第3次免疫、每頭肌注1頭份，后備種豬配種前免疫2次，間隔4周每頭肌注1頭份/次；經產母豬、公豬每年免疫3～4次，每頭肌注1頭份/次。對表5檢測出1頭公豬野毒陽性，建議淘汰。對母豬胎齡較大并且帶有野毒豬只及時淘汰，并且對發病保育豬緊急接種偽狂犬疫苗。

4.2 定期免疫監測

一是加強種豬和商品豬的偽狂犬病野毒抗體檢測，及時了解本場野毒感染情況，通過淘汰野毒抗體陽性種豬，為豬場凈化做準備條件。二是外引種豬和本場后備豬要適時檢測，保證是偽狂犬病野毒陰性豬才能進入種豬群。防止帶毒傳染。同時由于疫苗抗原含量、母源抗體高低、豬群健康狀況、生產管理情況。飼養管理條件不同，產生的免疫效果也不一樣，因此，要應用gB-ELISA抗體檢測法對免疫抗體進行檢測，隨時檢測疫苗的免疫應答反應，確保豬群有足夠免疫力，并且要檢測其他病毒性疾病在該場的穩定性（PRRSV），防止對偽狂犬疫苗的干擾。4.3建立嚴格的生物安全措施

①豬場實施嚴格管理，外來車輛不得進入生產區。對豬群實行全進全出的方案，為了更好的防控。各棟豬舍和各個生產區員工和用具相對獨立；②堅持開展滅鼠工作。鼠是偽狂犬病病毒的攜帶者，因此，消滅豬場的鼠類對控制該病具有重要意義；③嚴格執行消毒制度，2次/d豬欄的打掃，每周定期對豬體、豬舍、用具、周圍環境等進行2次消毒和清理；豬場門口要設立消毒池，進出豬場的員工必須洗澡、更衣、換鞋、洗手和紫外線消毒，對裝飼料進生產區的車輛也要嚴格消毒；④禁止員工從外帶豬肉進入生產區；豬場內不能飼養其他動物；⑤安排專門的員工對病死豬尸體及胎衣等進行無害化處理，糞尿進入沼氣池發酵處理，減少病原傳播。

4.4 飼養管理措施

①提高豬群飼養管理和保健預防，把好原料關，防止霉菌毒素侵入豬只，造成豬只抵抗力下降和霉菌毒素中毒引起的免疫抑制；②對豬舍“三度”（溫度、濕度、空氣新鮮度）加強控制，提高豬群自身抵抗力；③加強其他病毒性疾病的防控，防止其他疾病對豬偽狂犬病疫苗的免疫干擾作用，避免引起免疫失敗。■（編輯：趙曉松）

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.05.028