饑餓對鯽魚前腸形態影響研究

[摘 要] " 用石蠟切片的方法研究饑餓對鯽魚消化系統的形態結構和組織學的影響。本文將通過實驗，對饑餓不同時間鯽魚前腸切片的觀察，研究饑餓對鯽魚前腸直徑、前腸微絨毛和腸壁的影響，并運用組織切片的方法研究饑餓對鯽魚消化系統組織結構的影響。

[關鍵詞] 鯽魚 " "饑餓 " "前腸 " "消化系統

[中圖分類號] S917 [文獻標識碼] A [文章編號] 1003-1650 （2015）04-0288-01

1 " 材料與方法

1.1 " 材料來源

實驗用魚為鯽魚，取健康鯽魚30尾進行實驗。所取鯽魚體長18.9～20.9cm，體重210～265g，分別置于室內8個1.0m×0.8m×0.6m水族箱內，并用增氧機充氣，水溫11～13℃，pH7.0左右，每天換水一次。

1.2 " 實驗方法

操作期間不投餌，對饑餓魚體進行解剖，并取其前腸3～5mm置于95%福爾馬林溶液中保存，每三天取樣一次，每次2～3尾。

對不同時間段的八組饑餓魚體所取前腸進行切片觀察。切片制作方法如下：

1.2.1試劑配制

1.2.1.1透明劑的配制

（1）3：1酒精二甲苯溶液500ml " 純酒精375ml加純二甲苯125ml

（2）1：1酒精二甲苯溶液500ml " 純酒精250ml 加純二甲苯250ml

（3）1：3酒精二甲苯溶液500ml " 純酒精125ml 加純二甲苯375ml

1.2.1.2酸酒精500ml

發煙HCL（36%～40%）5ml加純酒精100ml加蒸餾水400ml

1.2.1.3堿酒精500ml

NaOH2.5g加純酒精100ml加蒸餾水400ml

1.2.1.4伊紅酸溶液500ml

伊紅2.5g加95%酒精500ml

1.2.1.5 貼附劑130ml

65ml雞蛋清加65ml甘油加1g水楊酸鈉

1.2.1.6Delafieled蘇木精

依次加入冰醋酸5ml純酒精50ml 后加入蘇木精1g然后加甘油50ml并以5g鉀明礬50ml蒸餾水的熱溶液混合

1.2.2操作步驟

1.2.2.1前腸的截取：

將不同饑餓程度的鯽魚解剖后，在前腸同一位置截取3-5mm。

1.2.2.2石蠟切片的一般步驟：

（1）采集標本與固定.

將前腸放入95%的福爾馬林中。

（2）沖洗

將前腸取出放入廣口瓶中，用微流水沖洗12小時以上，洗去固定劑。

（3）脫水

將沖洗好的標本放入35%、50%、75%、85%、95%、100%、100%的酒精溶液中脫水，每次脫水1-2小時。

（4）透明

將脫完水的標本依次放入1：3的酒精二甲苯溶液、2：2的酒精二甲苯溶液、3：1的酒精二甲苯溶液、純二甲苯溶液、純二甲苯溶液中浸泡，每步浸泡約30分鐘。

（5）透蠟

標本依次放入3：1的二甲苯石蠟溶液、2：2的二甲苯石蠟溶液、1：3的二甲苯石蠟溶液、純石蠟溶液、純石蠟溶液中浸泡，每次約30分鐘，且放入恒溫箱中。

（6）包埋

用硬紙做成小盒，將石蠟和組織一起放入，待冷卻后將石蠟修成一定大小，放在蠟座上。

（7）切片

第一部粗切，其厚度在50～100微米左右，直至組織全部暴露后，再細切，直至組織表面均勻一致，無白點，再將切的蠟片放入溫水中。

（8）展片、貼片

將切好的組織片放人45℃的恒溫水浴鍋中讓其展開，然后將組織切片貼在粘有粘附劑的載玻片上直至切片自然干燥。

（9）染色

a.脫蠟

將載玻片放入純二甲苯浸泡5-6分鐘依氣溫而定直至石蠟完全溶解為止

b.脫脂

放入二甲苯與純酒精等量混合液5分鐘，然后放入純酒精中5分鐘

c.下行復水

依次放入95%酒精浸泡3分鐘、85%酒精浸泡3分鐘、75%酒精浸泡3分鐘、50%酒精浸泡3分鐘、35%酒精浸泡3分鐘

d.水洗

放入水中片刻

e.染色

放入Delafieled蘇木精10-30分鐘或更長

f.水洗

放入流水中洗5分鐘

g.分色

將組織片放入酸酒精1-2分鐘

h.水洗

水洗片刻

i.中和

放入堿酒精約1-2分鐘

j.水洗

水洗片刻

k.上行脫水與復染

依次放入35%酒精浸泡3分鐘、50%酒精浸泡3分鐘、75%酒精浸泡3分鐘、85%酒精浸泡3分鐘

l.透明

依次放入純酒精與等量二甲苯混合液5分鐘、二甲苯溶液5分鐘

（10）封片 " 用加拿大樹脂封片

2 " 結果

實驗結果見表2-1

表2-1 鯽魚前腸短軸長、絨毛長、前腸壁厚和前腸徑隨饑餓天數的變化：

3 " 討論

研究顯示，饑餓使鯽魚產生明顯的組織學衰退，特別是消化道系統。隨饑餓程度加深，其前腸徑逐漸變短，直接原因為魚體長期處于饑餓狀態，營養吸收不充分。

通過實驗中，對饑餓鯽魚前腸切片的進一步觀察測量發現，由于長期饑餓導致的營養不足使前腸絨毛高度下降，且密度變小。另外，從對切片的觀察可以得到：隨著鯽魚饑餓程度的加深，紋狀緣變得不明顯，絨毛不整齊，個別地方萎縮、斷裂或脫落，顯著區別于正常形態。

參考文獻

[1]殷名稱.魚類早期生活史研究與其進展.水產學報，1991，15（4）：348～358.

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