啤酒廢酵母中谷胱甘肽的提取模型及最佳提取條件研究

李澤正，王 安，田儒俊

(四川大學(xué)，四川 成都 610044)

啤酒廢酵母中谷胱甘肽的提取模型及最佳提取條件研究

李澤正，王 安，田儒俊

(四川大學(xué)，四川 成都 610044)

摘要：指出了我國啤酒年產(chǎn)量已達到5000萬t，啤酒廢酵母的年產(chǎn)量可達50~75萬t。啤酒廢酵母主要綜合利用方式是將其作為飼料工業(yè)的原料，但是啤酒廢酵母中含有豐富的氨基酸、維生素、谷胱甘肽和礦物質(zhì)等有用成分，將其作為飼料工業(yè)原料后，這些營養(yǎng)成分的附加值將會嚴重減少。打破傳統(tǒng)的啤酒廢酵母利用方式，以成都某啤酒生產(chǎn)廠的啤酒廢酵母為原料提取谷胱甘肽，增加啤酒廢酵母的經(jīng)濟附加值。以啤酒廢酵母為研究原料，利用軟件Design-expert 6.0中的響應(yīng)面法分析了熱水法提取啤酒廢酵母中的谷胱甘肽(glutathione，簡稱GSH)的提取模型和最佳提取條件。通過響應(yīng)面法分析得出熱水法提取GSH的最佳實驗條件為：pH值1.6、溫度61.8℃、提取時間11.4min、料水比0.39g/mL。在此提取條件下，GSH的提取量達7.83mg/g，通過實驗驗證了理論值與實驗值的相對誤差為0.0008，表明響應(yīng)面法得出的提取模型和最佳實驗條件合理有效。

關(guān)鍵詞：啤酒廢酵母；谷胱甘肽；響應(yīng)面法；最佳

1引言

啤酒在食品工業(yè)中具有一定的戰(zhàn)略經(jīng)濟地位，2011年底世界上啤酒的年產(chǎn)量已達到1927億L，啤酒已成為繼茶、碳酸飲料、牛奶和咖啡后的第五大消費飲料[1]。中國是全球啤酒消費量和產(chǎn)量最大的國家，2011年我國啤酒總產(chǎn)量為0.5億t[2]，同時啤酒產(chǎn)量以每年6%的百分點不斷增長。

啤酒廢酵母是啤酒生產(chǎn)過程中的主要副產(chǎn)物之一，它是由啤酒和酵母細胞組成的泥漿狀混合物，含有豐富有用成分，各種物質(zhì)的含量如表1所示。

表1　干燥啤酒酵母中有用成分的含量

啤酒酵母的有用成分和含量相對食用酵母、面包酵母及精牛肉來說具有較高的營養(yǎng)價值。

隨著啤酒產(chǎn)量的逐年增加，啤酒廢酵母的產(chǎn)生量也不斷增大，其中每生產(chǎn)100t啤酒，就會產(chǎn)生大約1~1.5t的酵母泥[3]，廢酵母的含水量在70%～90%之間[4]。2/3的廢酵母來源于主發(fā)酵沉淀酵母，剩余的廢酵母主要是后發(fā)酵貯酒罐的沉淀酵母，這些啤酒廢酵母的合理化利用將會帶來可觀的收益，反之將會給環(huán)境帶來巨大挑戰(zhàn)。

目前啤酒廢酵母提取制藥物質(zhì)的研究中，有一個重要的研究方向是啤酒廢酵母提取谷胱甘肽，谷胱甘肽主要由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成，是一種含γ-酰胺鍵和巰基的三肽。谷胱甘肽是一種具有重要生理功能的活性肽，對維持身體正常的免疫系統(tǒng)、抗氧化和整合解毒等發(fā)揮重要作用。

本文以啤酒廢酵母作為原料，采用熱水法提取廢酵母中的GSH，同時通過響應(yīng)面實驗設(shè)計進行提取條件的優(yōu)化。

2實驗

2.1　實驗裝置

實驗裝置示意圖如圖1所示。

圖1　熱水法提取啤酒廢酵母中的GSH示意圖

2.2　實驗方法

2.2.1啤酒廢酵母預(yù)處理方法

實驗所用啤酒廢酵母取源于成都市某啤酒生產(chǎn)廠，將取得的啤酒酵母混合液分裝于離心管內(nèi)，以2500r/min速度離心20min，去掉上清液，加入5倍體積去離子水，用玻璃棒攪拌均勻，再以2500r/min速度離心20min，重復(fù)3次，去掉上清液，用稱量袋分裝沉淀的濕酵母，置于4℃的冰箱內(nèi)備用。

2.2.2含水量測定

參照城市污水污泥檢驗方法(CJ/T221-2005)，將均勻的預(yù)處理后的啤酒廢酵母稱量后放入恒重的蒸發(fā)皿在水浴上蒸干，然后在105℃的烘箱內(nèi)烘干至恒重，減少的重量與原重量的百分比值作為含水量，計算公式如下：

(1)

式中：m為廢酵母取樣質(zhì)量，g；m1為烘干恒重后蒸發(fā)皿與廢酵母的總質(zhì)量，g；m2為蒸發(fā)皿的質(zhì)量，g。

2.2.3GSH的測定

目前測量谷胱甘肽的方法主要有3種：四氧嘧啶法、亞硝基鐵氰化鈉法、5,5'二硫代雙(2-硝基苯甲酸)法(簡稱TNB法)。由于四氧嘧啶法靈敏度高(R2可達0.999以上)、準確度高、數(shù)據(jù)重現(xiàn)性好、顯色穩(wěn)定、能避免半胱氨酸等含巰基化合物的影響，因此本文采用四氧嘧啶法對啤酒廢酵母提取液中的GSH進行定量分析。在實驗條件下，GSH與四氧嘧啶反應(yīng)生成物在305nm有最高吸收峰，人們也將該法稱為四氧嘧啶305法。

(1)試劑配置。①1mg/mL GSH標準溶液。準確稱取0.1gGSH標準品，用去離子水定容至100mL。②0.02mg/L四氧嘧啶溶液。稱取0.08g四氧嘧啶試劑，用去離子水定容至25mL。③0.01mol/L甘氨酸溶液。稱取0.0752g甘氨酸，用去離子水定容至100mL。④磷酸鹽緩沖溶液。分別配置0.2mol/l磷酸二氫鈉中和0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液，將二者按照10∶1體積混合，既得0.2mol/L、pH值7.5的緩沖溶液。

(2)標準曲線繪制。分別取GSH標準液(1mg/mL)0、0.2、0.4、0.6、0.8和1mL于1~6號10mL比色管中，在各比色管中加入0.02(mg/L)四氧嘧啶溶液0.5mL，從1~10號比色管中加入0.5mL 0.01mol/L甘氨酸溶液，再加入0.5mL 0.2mol/L磷酸緩沖溶液，用去離子水稀釋到10mL，稀釋混勻后，靜置40min，用1cm比色皿以去離子水作為參比，在波長305nm處測量溶液的吸光度。以測得的吸光度A為縱坐標，GSH含量(mg)為橫坐標，繪制工作曲線。啤酒廢酵母提取液中的GSH的測量按照上述過程進行。

(3)樣品提取液中GSH的測定。取適量體積的酵母提取液于10mL比色管中，加入四氧嘧啶溶液、甘氨酸溶液、磷酸緩沖液各0.5mL，用去離子水稀釋至刻度，混勻后，靜置40min，用1cm比色皿測量吸光度，同時按照上述過程做空白試樣。吸光度計算公式如下：

A=abC

(2)

式中：A為濃度為C時溶液的吸光度；a為吸光系數(shù)，mL/(mg·cm)；b為比色皿厚度，cm；C為溶液中GSH濃度，mg/mL。

公式(2)中，a是與溶質(zhì)相關(guān)的常數(shù)。在同一測量條件下，測量溶液中GSH濃度時，ab的乘積為常數(shù)，因此吸光度值與溶液中GSH的濃度值成正比，通過配置GSH溶液標準系列，繪制標準曲線，測量樣品溶液的吸光度后，可以計算出樣品溶液中GSH的濃度。

2.2.4蛋白質(zhì)的測定

考馬斯亮藍G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌瑫r結(jié)合物在595nm處有最大光吸收，同時其光吸收值與蛋白質(zhì)的含量成正比，因此用該法作為蛋白質(zhì)定量測定方法。

(1)試劑配置。①1mg/mL牛血清白蛋白標準溶液。稱取0.1g牛血清白蛋白，用去離子水定容至100mL。②0.1mg/mL考馬斯亮藍G-250溶液。稱取0.1g考馬斯亮藍G-250試劑于250mL燒杯中，加入50mL90%乙醇充分溶解，再加入100mL85%的H2PO4,用去離子水定容至1000mL。

(2)標準曲線繪制。分別取牛血清包蛋白標準溶液：0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mL于1~6號10mL比色管中，分別在比色管中加入5mL考馬斯亮藍G-250溶液，再分別在1~6號比色管中加入去離子水，使比色管中的液體總體積為6mL。以去離子水為參比，用1cm比色皿在波長為595nm處測量吸光度。

(3)提取液中蛋白質(zhì)的測定。取適量體積的酵母提取液于10mL比色管中，在比色管中加入5mL考馬斯亮藍G-250溶液，同時加入一定體積的去離子水，使比色管中溶液總體積為6mL，做空白試樣，以去離子水為參比在波長595nm處測量樣品吸光度(A)。樣品中蛋白質(zhì)濃度的計算原理同公式(2)。

2.3　試驗設(shè)計分析方法

2.3.1響應(yīng)面分析法

響應(yīng)面分析法(Response surface methodology，RSM)是實驗條件尋優(yōu)的方法，該法主要采用數(shù)學(xué)與統(tǒng)計學(xué)相結(jié)合，考慮多因素(自變量)影響下對實驗結(jié)果的影響。其原理是通過多個確定性實驗，來模擬實驗因素與目標函數(shù)的極限狀態(tài)曲面，從而很容易地進行可靠性分析。響應(yīng)面法針對多變量試驗來說具有耗時短，所需費用、試劑及實驗材料少等優(yōu)點，因此用這種方法對實驗條件進行優(yōu)化時效率較高。其中響應(yīng)面方法有中心組合設(shè)計(Central Composite，包括通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計、二次正交組合設(shè)計等)、BOX設(shè)計(Box-Behnken設(shè)計)、二次飽和D-最優(yōu)設(shè)計(D-optimal設(shè)計)、均勻設(shè)計、田口設(shè)計等。

本文采用通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計進行實驗安排，考察n個因素(xi，i=1，2，3，…，n。)的不同水平對啤酒廢酵母提取液中谷胱甘肽含量(yi，i=1，2，3，…，n)、蛋白質(zhì)(zi，i=1，2，3，…，n)含量的影響，由m組實驗可得2m組數(shù)據(jù)(x1，x2，…，xn，y1)，(x1，x2，…，xn，z1)；…；(x1，x2，…，xn，ym)，(x1，x2，…，xn，zm)，在數(shù)學(xué)分析上用泰勒展開式模型來進行非線性擬合，一般二次的泰勒展開式就能滿足收斂，同時生物科學(xué)變量間的特點也遵循以下規(guī)律[32]：

(3)

(4)

(5)

其中如果系數(shù)ai、bi、…、0i(i=1、2)經(jīng)過檢驗可用，不僅能全面掌握自變量和因變量的關(guān)系，而且能求出方程的極值點，即確定了GSH含量最高值和對應(yīng)的最優(yōu)條件因素取值。

2.3.2正交試驗設(shè)計

正交實驗設(shè)計(orthogonal experimental design)是利用正交表的形式來安排多因素的不同水平的試驗設(shè)計。正交試驗設(shè)計的特點是用部分水平試驗組合代替全部水平試驗組合，進行試驗點的安排，試驗數(shù)據(jù)經(jīng)過分析挑選最優(yōu)水平組合(例如最優(yōu)配方、最優(yōu)工藝條件)。

3響應(yīng)面法優(yōu)化熱水法提取啤酒廢酵母中的GSH

3.1　啤酒廢酵母含水量分析和GSH提取步驟

3.1.1啤酒廢酵母含水量分析

本文所用啤酒廢酵母來自成都市某啤酒廠，啤酒廢酵母形貌如圖2所示。

圖2　啤酒廢酵母沉淀前后對照

啤酒廢酵母的含水量分析如表2所示。

表2　啤酒廢酵母的含水量分析

取4個樣的含水量的平均值作為啤酒廢酵母的含水量，即為90.35%。

3.1.2熱水法提取廢酵母中GSH的步驟

準確稱取預(yù)處理的啤酒廢酵母于250mL的燒杯中，根據(jù)料水比加入相應(yīng)的去離子水，再用濃硫酸調(diào)節(jié)至所需的pH值，將燒杯放置在一定溫度的恒溫水浴鍋中，在180r/min的條件下提取一定時間。提取后混合液冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至離心管中，在2500r/min條件下離心20min，將上清液裝入試劑瓶中及時測定提取液中GSH和蛋白質(zhì)含量。提取完后的固體廢物轉(zhuǎn)移至燒杯中，放入60℃的烘箱內(nèi)烘干至恒重，裝入樣品袋中，置于干燥皿中備用。

3.1.3標準曲線

(1)GSH標準曲線。采用四氧嘧啶法測定提取液中GSH的含量，標準系列的配置和測量結(jié)果如表3所示。

表3　GSH標準系列及測定結(jié)果

標準曲線見圖3所示。

圖3　谷胱甘肽標準曲線

由圖3可知標準曲線方程為y=0.003x+0.044,R2=0.998，在測定提取液中的GSH時，取0.5mL樣品進行測量，對照標準曲線方程計算提取液中GSH的含量。若樣品吸光度測量值超出標準曲線范圍，應(yīng)增加提取液體積或者稀釋后再進行測定。

(2)蛋白質(zhì)標準曲線。采用考馬斯亮藍法測定提取液中的蛋白質(zhì)，標準系列及結(jié)果如表4所示。

表4　蛋白質(zhì)標準系列及測量結(jié)果

蛋白質(zhì)標準曲線如圖4所示。

圖4　蛋白質(zhì)標準曲線

由圖4所示標準曲線方程為y=0.006x-0.045,R2=0.999，在測定提取液中的GSH時，取0.05mL樣品進行測量，對照標準曲線方程計算提取液中蛋白質(zhì)的含量。若樣品吸光度測量值超出標準曲線范圍，應(yīng)增加提取液體積或者稀釋后再進行測定。

3.2　單因素試驗

3.2.1pH值對GSH提取的影響

在溫度、時間和料水比不變(分別為65℃、5min、0.25g/mL)的條件下，加入濃硫酸調(diào)節(jié)溶液的pH值，在不同的pH值條件下提取啤酒廢酵母中的GSH和蛋白質(zhì)，結(jié)果如圖5所示。

圖5　pH值對GSH、蛋白質(zhì)提取的影響

由圖5可知當pH值為2時，GSH含量最大，隨著pH值的不斷增加，GSH和蛋白質(zhì)的提取量不斷降低，主要由于濃硫酸的添加量變少，啤酒酵母的細胞破裂數(shù)量減少，從而酵母細胞內(nèi)的GSH、蛋白質(zhì)沒有得到有效釋放。同時pH值的增大，提取過程中GSH氧化程度也加大，從而使提取液中GSH含量降低。

3.2.2溫度對GSH提取的影響

當pH值、時間和料水比保持不變(分別為2min、5min、0.25g/mL)，考察溫度分別為40、50、60、70、80、90℃時，提取液中GSH和蛋白質(zhì)含量的變化情況。實驗結(jié)果如圖6所示。

圖6　溫度對GSH、蛋白質(zhì)提取量的影響

由圖6可知，隨著溫度的升高，GSH的提取量不段增加，當增加溫度升高到60℃時，提取液中GSH的含量最高，同時蛋白質(zhì)的含量也最高，繼續(xù)升高提取溫度，GSH的含量幾乎保持恒定，而蛋白質(zhì)由于溫度的升高而逐漸降低，主要由于溫度升高蛋白質(zhì)將發(fā)生變性，從而含量降低。

3.2.3提取時間對GSH提取的影響

保持pH值、溫度和料水比不變且分別為2℃、60℃、0.25g/mL，考查在提取時間分別為0、5、10、15、20、30min條件下，GSH、蛋白質(zhì)提取量的變化，如圖7所示。

圖7　時間對GSH、蛋白質(zhì)提取量的影響

根據(jù)圖7得知，隨著提取時間增加，GSH的含量在不斷增加，蛋白質(zhì)的含量也不斷增加。當提取時間為5min時，GSH的提取量達到最大，增加提取時間GSH的提取量幾乎保持不變。

3.2.4料水比對GSH提取的影響

當pH值、溫度、時間分別保持為2℃、60℃、5min時，在料水比分別為0.05、0.25、0.45、0.65、0.85、1g/mL條件下，研究啤酒廢酵母提取液中GSH、蛋白質(zhì)含量變化情況，如圖8所示。

圖8　料水比對GSH、蛋白質(zhì)提取量的影響

根據(jù)圖8知，隨著料水比的增加GSH的提取量增加后降低，蛋白質(zhì)的提取量不斷降低。當料水比為0.2g/mL時，GSH的提取量最高。

3.3　響應(yīng)面分析

在單因素實驗基礎(chǔ)上，確定影響GSH提取因素的取值范圍，采用Design-expert 6.0軟件進行GSH提取優(yōu)化實驗的設(shè)計。

3.3.1中心組合設(shè)計因素水平

通過單因素實驗分析，選取pH值(x1)、提取溫度(x2)、提取時間(x3)、料水比(x4)四個因素作為自變量，采用響應(yīng)面法中的中心組合設(shè)計對谷胱甘肽的提取工藝條件進行優(yōu)化，具體的因素水平確定如表5所示。

表5響應(yīng)面分析從啤酒廢酵母提取GSH的因素水平

變量x范圍實際變量x1(pH值)x2/℃x3/minx4(料水比)標準化后z編碼z1z2z3z4上水平1.55050.21111零水平260100.350000下水平2.570150.5-1-1-1-1距零水平r點480200.652222距零水平r點14000.05-2-2-2-2標準差0.51050.15

3.3.2響應(yīng)面設(shè)計實驗結(jié)果分析

(1)實驗結(jié)果。應(yīng)用design expert 6軟件，根據(jù)表5實驗條件得到實驗安排及結(jié)果如表6所示。

表6　響應(yīng)面分析實驗安排及結(jié)果

(2)響應(yīng)面法分析谷胱甘肽響應(yīng)面方程及方差分析。通過Design expert 6.0對谷胱甘肽提取效果與各因素進行回歸擬合，得到如下方程：

y=-14.415-7.852x1+0.668x2+0.686x3+19.519x4-0.008x22-0.03x32-25.197x42+0.127x1x2

(6)

該回歸方程中自變量對因變量(影響因素對響應(yīng)值)的影響的顯著性用F檢驗進行判斷，其中p值大小表示顯著性的高低，當p<0.01為高度顯著(用“**”表示)，當p<0.05為顯著(用“*”表示)，方程的回歸分析如表7所示。

表7　谷胱甘肽含量結(jié)果方差分析

表7直觀反映了各因素及其交互作用對響應(yīng)值(GSH提取量)的影響，x1、 x2、x3、x4對模型的影響為高度顯著，同時x2、x3的二次方對模型的影響也為高度顯著，x1、 x2的交互對模型的影響也為高度顯著。模型項p<0.0001說明響應(yīng)值與x1…回歸的關(guān)系是極顯著。

圖9~圖13表示了各因素對GSH提取量的相應(yīng)情況。

圖9　溫度、pH值對GSH提取量的影響

圖10　pH值、時間對GSH提取量的影響

圖11　pH值、料水比對GSH提取量的影響

圖12　時間、溫度對GSH提取量的影響

圖13　料水比、溫度對GSH提取量的影響

(3)響應(yīng)面法對谷胱甘肽提取液中蛋白質(zhì)含量的分析。通過Design-expert 6.0 對GSH提取液中蛋白質(zhì)的含量的分析得出蛋白質(zhì)含量的方程模型如下：

z=-32.301+17.971x1+0.535x2+2.136x3+22.252x4-0.102x32-34.371x1x4

(7)

對方程(7)進行方差分析，分析結(jié)果如表8所示。

表8　蛋白質(zhì)含量結(jié)果方差分析

根據(jù)相應(yīng)方差分析表中p值的大小，可以看出，啤酒廢酵母提取GSH過程中，pH值、提取溫度、料水比等對提取液中蛋白質(zhì)含量的影響顯著，pH值與料水比的交互作用對蛋白質(zhì)的含量也有高度顯著影響。同時根據(jù)模型值P值大小表明所得方程對蛋白質(zhì)的提取量高度顯著，因此可用此方程來計算一定提取條件下的蛋白質(zhì)提取含量。

(4)驗證性試驗。分別對GSH的回歸方程的x1、x2、x3、x4求一階導(dǎo)數(shù)，可得如下4個方程：

y'(x1)=-7.852+0.127x2

(8)

y'(x2)=0.668-0.014x2+0.127x1

(9)

y'(x3)=0.686-0.06x3

(10)

y'(x4)=19.519-50.394x4

(11)

當?shù)箶?shù)為零時，求出的x1、x2、x3、x4對應(yīng)的y值最大，也即是啤酒廢酵母提取GSH的最佳提取條件。因此令方程(8)~(11)為零得：x1=1.6、x2=61.8、x3=11.4、x4=0.39，即GSH提取的最佳工藝條件為：pH值為1.6、溫度為61.8℃、提取時間為11.4min、料水比為0.39g/mL。

在此最佳工藝提取條件下，通過三組平行實驗，驗證該條件的GSH和蛋白質(zhì)提取結(jié)果的可靠性，實驗結(jié)果如表9所示。

表9　回歸模型實驗驗證

實驗驗證結(jié)果說明，實驗值與預(yù)測值吻合度高，相對誤差小，證明模型計算的值與優(yōu)化實驗的測定值是一致的。同時，所得GSH最優(yōu)提取條件下，蛋白質(zhì)的提取量不高，有利于GSH的提純等后續(xù)工藝進行。因此回歸方程為啤酒廢酵母細胞內(nèi)的GSH的提取提供了一個較好的模型，可將此模型應(yīng)用于GSH的提取工藝中。

4小結(jié)

(1)分析來自成都某啤酒生產(chǎn)廠的啤酒廢酵母的性質(zhì)，測定啤酒酵母的含水量為90.35%。

(2)利用單因素試驗分析pH值、溫度、提取時間、料水比對GSH、蛋白質(zhì)提取量的影響，分析得出：GSH最佳提取條件范圍為，pH值1.5~2.5，溫度50~70℃，提取時間5~15min，料水比0.2~0.5g/mL。

(3)利用Design-expert 6.0中的響應(yīng)面分析法和GSH的最佳實驗條件范圍進行實驗設(shè)計。根據(jù)實驗結(jié)果：從啤酒廢酵母中提取GSH的最佳實驗條件為pH值為1.6、溫度為61.8℃、提取時間為11.4min、料水比為0.39g/mL。根據(jù)預(yù)測模型計算出啤酒廢酵母中活性炭的最佳提取值可達7.829mg/g。

(4)通過實驗驗證預(yù)測模型得出的最佳實驗條件的GSH提取量值，最佳提取條件下進行的三組平行試驗的平均值為7.823mg/g，表明實際值與預(yù)測值大小基本一致，說明所得模型很好地反映了GSH的提取情況，可用于指導(dǎo)實踐工作。

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The Study on the Model and Optimal Condition of Extracting

Glutathione From Waste Beer Yeast

Li Zezheng, Wang An, Tian Rujun

(SichuanUniversity,Chengdu610064,China)

Abstract:In China, the annual production of beer has already exceeded 50 million tons and the annual production of waste beer yeast can reaches around 500,000 to 750,000 tons. The mainly comprehensive utilization of waste beer yeast is to use it as the raw material in feed industry. However, after being processed, several useful nutrients in waste beer yeast, including amino acids, vitamins, glutathione and minerals, will be extremely reduced. This article aims at exploring a new way for the further application of waste beer yeast and takes the waste beer yeasts come from a beer factory in Chengdu as raw materials to extract glutathione, which increases its economic value. Taking the waste beer yeast as research raw materials, the article analyzes the optimal model and condition of extracting glutathione through hydrothermal method based on the response surface method in Design-expert 6.0. The results indicate that the optimal conditions for extracting GSH are that the pH is 1.6, temperature is 61.8℃, extraction time is 11.4 minutes and the ratio of material and hot water is 0.39 g/mL. Under this condition, the best yield for the extraction is 7.83 mg/g. The relative error between theoretical prediction and experimental value is as low as 0.0008, which confirms that the model developed in this experiment and the optimizations of extraction conditions are reasonable and effective.

Key words:waste beer yeast; glutathione; response surface method; optimal

如何搶救受澇林木苗圃

林木苗圃受到洪澇災(zāi)害后，應(yīng)盡快進行搶救，以減少損失。首先要及時疏通溝渠，排除漬水和淤泥雜物，整理苗圃地，平整苗床，做到明水直流，暗水直落。與此同時，要扶正苗木，洗凈苗木上的淤泥雜物。待苗木恢復(fù)生機后再進行松土、除草，以促進苗木根系的生長發(fā)育。這是搶救苗木的基本措施，必須切實做好。

待苗圃地稍為干燥后，即可追施有機肥料和施氮、磷、鉀肥，也可選施草木灰，防止苗木爛根，然后再施淡水肥。過幾天后可噴施少量植物生長促進劑，以促進苗木根系吸收能力，加速苗木健康成長，提高抗病蟲能力。在清理苗圃地淤泥雜物的基礎(chǔ)上，還要注重病蟲害的防治。對苗圃地全面噴施0.5%~1%的波爾多液進行消毒。若發(fā)現(xiàn)病蟲要及時請林業(yè)科技人員指導(dǎo)，進行除治。

——摘自湖北林業(yè)網(wǎng)

中圖分類號：TS209

文獻標識碼：A

文章編號：1674-9944(2015)04-0330-07

作者簡介：李澤正(1981—)，男，四川綿陽人，碩士，主要從事環(huán)境評價與規(guī)劃研究。

收稿日期：2015-02-26