雞病毒性關節炎的研究進展

王興和

（內蒙古通遼市科爾沁區動物疫病預防控制中心內蒙古通遼028000）

雞病毒性關節炎的研究進展

王興和

（內蒙古通遼市科爾沁區動物疫病預防控制中心內蒙古通遼028000）

雞病毒性關節炎是由禽呼腸孤病毒引起的一種病毒性傳染病。在雞群中可通過垂直傳播和水平傳播這兩種途徑進行傳播。該病毒主要以侵害趾關節、跗關節和肌腱為特征，通常導致病雞呈現跛行、跗關節腫脹等臨床癥狀。剖檢病雞可見到腓腸肌腱出血、壞死或斷裂，脛骨干增厚等剖檢癥狀。可根據臨床癥狀、剖檢結果、結合實驗室檢查對該病進行確診。本文將從病原學、流行病學、診斷方法和預防等幾個方面進行綜述。

雞病毒性關節炎；禽呼腸孤病毒；研究進展

雞病毒性關節炎（Avian Virus Arthritis,AVA）主要是由禽呼腸孤病毒（Avian reovirus,ARV）引起雞的一種急性或慢性傳染病，肉用雞型多發，肉兼蛋型雞也有發生。該病毒主要侵害雞的趾關節、脛跖關節及其肌腱，引起關節滑膜炎或腱鞘炎等，因此該病也被稱為病毒性腱鞘炎。病雞呈現跛行、蹲坐、不愿走動，生長速度減慢或生長停止,當與其它病原混合感染時會加劇其它病原的感染,給家禽養殖業造成巨大的經濟損失[1]。

1　病原學

1.1病毒形態結構和理化特性

禽呼腸孤病毒是呼腸孤病毒科（Reoviridae）正呼腸孤病毒屬（Orthoreovi）的成員。該病毒是一種RNA病毒，沒有囊膜但有雙層的衣殼結構，通常人們檢測到的病毒粒子直徑在73～80 nm之間，其中75 nm較為多見，當其感染細胞后可以在胞漿內看到病毒呈晶格狀排列，在細胞內復制可形成包涵體。該病毒基因組可以分為三個大片段（L1、L2、L3）、三個中片段（M1、M2、M3）和四個小片段（S1、S2、S3、S4）三組總共10個節段，這些節段至少可以編碼11個原始的翻譯產物，它們屬于λ、σ、μ這三種類型[2]。其中ARV S組的S1基因含有3個重疊的開放閱讀框，能夠編碼非結構蛋白P10、P17和結構蛋白SigmaC[3]。

ARV對熱具有很強的抵抗力，60℃能夠存活8～10h、56℃能夠存活22～24h、37℃15～16周、22℃48～51周、4℃可以存活3年以上、-63℃可以保存10年以上[4]。氯化鎂能夠增強病毒對熱的穩定性，但濃度過大會使病毒失去活性，該病毒對乙醚不敏感，對低濃度的來蘇兒、甲醛有抵抗力，但對2%～3%的氫氧化鈉溶液和70%的酒精相對較敏感。

1.2病毒血清學和培養特性

禽呼腸孤病毒各毒株之間存在大量的交叉反應，因此有些群不能作為獨立的血清型，病毒通常以抗原亞型存在。國外對ARV雞源分離株的抗原關系方面有較多的研究，wood等[5]對來自日本、法國和美國的ARV的抗原相關性進行了統計，結果發現了11個血清型，各血清型毒株之間存在共同的群特異抗原，可進行大量的交叉反應。國內對ARV雞源分離株的抗原關系研究較少，梁英[6]通過血清學中和試驗測定了國內四株禽呼腸孤病毒株（YB、YH、CL、S1133）的血清學相關性，結果同樣發現各毒株之間都存在一定的抗原相關性。

ARV適合在雞胚內生長，可以通過絨毛尿囊膜和卵黃囊進行接種。初次分離將病毒接種到5～7日齡SPF雞胚的卵黃囊內，一般在接種后3～5 d雞胚死亡，胚體呈現淺紫紅色，內臟器官充血或出血。此外，該病毒可在原代雞胚細胞、肝、脾、腎和巨噬細胞中增殖，導致細胞出現細胞拉網、細胞融合等病變[7]。目前已被證實，ARV還可以在許多細胞系上增殖，如猴腎細胞（Vero）、乳地鼠腎細胞（BHK-21/13）、豬腎細胞（PK）和貓腎細胞（CRFK）等[8]。

2　流行病學

雞病毒性關節炎病毒在自然界分布廣泛，能夠從多種鳥類體內分離得到。但家雞和火雞是目前所知道的能被ARV引起關節炎的動物。病毒在雞群的傳播是依靠垂直傳播和水平傳播這兩種方式，其中水平傳播是該病傳播的主要途徑，主要是由直接或間接接觸引起的。該病傳播迅速，一年四季均可發生，一般呈散發或地方性流行。2011年趙圓圓等[9]應用ELISA方法對采自安徽省的205份雞血請進行ARV抗體檢測，結果發現肉雞陽性率為55.88%，蛋雞陽性率為92.23%。2014年靳繼惠等[10]應用ELISA標準試劑盒首次大批量地對全國19個省市的17 058份雞血清樣品進行了ARV抗體檢測，共檢出ARV抗體陽性血清15 680份，陽性率為92.83%。可見，我國多數雞群都存在ARV的感染。

病毒感染雞只后首先在呼吸道和消化道內進行復制進入血液，一段時間后出現毒血癥，隨后向各組織器官擴散，但以關節腱鞘和消化道內含毒量最高。該病毒在肉雞中傳播較為迅速，由于墊料等原因在籠養的蛋雞中傳播較慢。一日齡雛雞最易感，隨著日齡的增大易感性逐漸下降，16周齡以后易感性顯著降低[11]。青年肉雞感染呼腸孤病毒可引起關節炎，生長速度減慢，生產性能下降，但往往不會引起死亡。

3　診斷方法

3.1臨床診斷

雞病毒性關節炎的臨床癥狀與很多細菌引起疾病的癥狀相似，如大腸桿菌、沙門氏菌等都可引起關節腫脹和消化系統疾病。所以根據臨床癥狀，病理變化及趾部的腫脹情況只能做出粗略的診斷，如需確診需要依靠試驗室先進的診斷技術。

3.2實驗室診斷

3.2.1病原分離鑒定根據臨床癥狀，取含病毒較多的組織，進行剪碎，研磨，加入生理鹽水，離心后用取上清液，在雞胚的卵黃囊上培養。如果所取病料中病毒含量較高，雞胚將在接種后3～5 d內死亡，雞胚皮下充血，呈紫紅色。病原的分離鑒定方法準確可靠，通常可以作為確診的依據，但該方法操作較為繁瑣，需要花費大量的時間。

3.2.2瓊脂擴散試驗瓊脂擴散試驗是指可溶性抗原與相應抗體在含有電解質的半固體凝膠中進行自由擴散，當抗原與相應抗體比例合適時，在相遇處產生白色沉淀。瓊脂擴散試驗敏感性差，但操作簡單。陳士友等[12]應用此技術對南京某雞場雞群ARV抗體的分布進行了調查，結果發現，瓊脂擴散試驗不適宜檢測低濃度的抗體，但在檢測雞群群抗體水平時易于推廣應用。

3.2.3酶聯免疫吸附試驗（ELISA）酶聯免疫吸附試驗因具有快速、敏感、簡便和易于標準化等優點，所以目前廣泛應用于臨床診斷和血清學鑒定等方面。用ELISA方法對呼腸弧病毒抗體進行檢測時，多用于檢測群體呼腸弧病毒的抗體水平。伊春紅[13]應用純化的σB和σC蛋白作為包被抗原建立了ELISA檢測方法，能夠準確地檢測到抗體的產生及消長規律，可以用于ARV的臨床診斷和免疫監測。謝志勤等[14]用克隆的雜交瘤細胞株制備ARV的單克隆抗體，并用此抗體作為包被抗體，成功建立了雙抗夾心ELISA檢測方法，檢測敏感性達到5× 10-5ug/uL的病毒量并證明與其它病毒沒有交叉反應。可見應用ELISA檢測方法能夠實現對ARV快速、敏感、特異性的檢測。

3.2.4免疫熒光技術目前免疫熒光技術被廣泛應用于免疫學、獸醫學和生物學等領域，它是利用抗原與抗體相結合的原理，通過熒光素對抗原或抗體進行特殊標記形成熒光標記物，再用制成的熒光標記物作為分子探針對被測物內的相應抗原或抗體進行檢測、定性及定位。1990年肖成蕊等使用此方法對人工感染ARV的雞進行了一系列檢測，最終發現脾臟和肝臟是使用本方法進行檢測的首選器官，檢出率高達100%。謝志勤等[15]利用自制的特異性抗ARV結構蛋白σ3的熒光標記IgG抗體檢測接種疑似ARV感染的病料，檢出的陽性樣品與病毒分離結果一致。研究表明，應用免疫熒光檢測技術可以對ARV感染的臨床樣品進行準確地檢測。

3.2.5熒光定量 RT-PCR診斷方法 熒光定量RT-PCR方法由于靈敏度高、重復性好、已被大量應用于疾病的早期診斷。曹琛福等[16]根據ARV S1基因設計引物和探針，建立了雞病性關節炎實時熒光RT-PCR檢測方法，檢測到核酸最低濃度為0.1023 pg/uL，要比普通的RT-PCR檢測靈敏度高2個數量級。李天芝等[17]也根據ARV S1基因保守序列設計引物，建立了ARV SYBR Green I熒光定量RT-PCR檢測方法，為快速檢測ARV提供了一種新的方法。研究表明，可廣泛應用實時熒光RT-PCR方法對ARV進行快速、敏感地檢測。

3.2.6其他檢測方法針對雞病毒性關節炎疾病的診斷還有很多其他的檢測方法如：基于納米材料電化學免疫傳感器檢測技術、基于熒光顯色的環介導等溫擴增技術、地高辛探針技術等，都能夠實現對雞病毒性關節炎的快速診斷。

4　預防

禽呼腸弧病毒在世界范圍內分布廣泛，且耐受性強，在日常的光照、溫度下能夠存活較長的時間，并對一些常用的消毒劑具有一定的抵抗力，如1%來蘇兒、過氧乙酸等，但用70%乙醇、0.5%碘液可殺滅本病毒。由于該病毒即可垂直傳播又可水平傳播，使得控制該病毒在雞群中的傳播變得十分困難。雞場最好采取全進全出的飼養模式，嚴禁從該病多發地區引進種雞和購買種蛋。對該病毒感染的雞場應該進行徹底的清理和消毒，將感染此病毒的雞進行隔離，將其排泄物無害化處理。

目前疫苗免疫對預防雞病毒性關節炎效果顯著，1日齡左右的雛雞對呼腸弧病毒最易感染，而且抵抗力較弱，至2周齡時仔雞開始建立自己相關的抵抗力，所以應該早期對雞進行免疫接種。我國現在已經研制成ND、IBD和雞病毒性關節炎三聯苗，接種10 d后產生免疫力，保護率可達90%～100%[18]。經過臨床實驗發現馬立克疫苗可以對呼腸孤病毒疫苗產生干擾作用，這兩種疫苗應間隔使用。由于ARV可以垂直傳播，所以一定要對開產母雞做好免疫接種。

結語:目前雞群中呼腸孤病毒感染較為普遍，被感染的雞只會出現多種不同的臨床癥狀。通過肉眼和初步的臨床診斷無法做出確診，必須結合相應的實驗室診斷技術。目前對感染的雞只尚無有效的治療方法和有效的治療藥物，但可以通過加強飼養管理，改善飼養條件,加強免疫防制來預防呼腸孤病毒對雞群的感染。■（編輯：趙曉松）

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Research Progress of Avian Viral Arthritis in Chicken

Wang Xinghe
(Inner Mongolia Tongliao City Horqin District Animal Disease Prevention and Control Center,TongLiao,Inner Mongolia,028000)

Chicken viral arthritis is a viral infectious disease caused by avian reovirus.In the flocks can be spread through the vertical and horizontal spread of these two channels.The virus is mainly characterized by invasion of the toe joint,tarsal joint and tendon,which usually leads to clinical symptoms such as limping and swelling of tarsal joint.Autopsy of chickens can be seen in gastrocnemius tendon hemorrhage,necrosis or fracture,tibial shaft thickening and other autopsy symptoms.Can be based on clinical symptoms,autopsy results, combined with laboratory tests to confirm the disease.This article will be from the etiology,epidemiology,diagnostic methods and prevention of several aspects of the review.

Avian Virus Arthritis;Avian Reovirus;Research Progress

10.3969/j.issn.1008-4754.2016.11.048