甲狀腺乳頭狀癌組織中血管內皮生長因子-C和PTEN蛋白的表達及其與臨床病理參數的關系

陳政華

(濱州醫學院煙臺附屬醫院甲狀腺乳腺外科，山東　煙臺　264100)

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甲狀腺乳頭狀癌組織中血管內皮生長因子-C和PTEN蛋白的表達及其與臨床病理參數的關系

陳政華

(濱州醫學院煙臺附屬醫院甲狀腺乳腺外科，山東煙臺264100)

〔摘要〕目的探討淋巴管生成因子血管內皮生長因子(VEGF)-C和PTEN蛋白在甲狀腺乳頭狀癌(PTC)的表達及其與患者病理參數之間的相關性。方法采用免疫組織化學SP法檢測VEGF-C與PTEN蛋白在PTC組織75例及75例甲狀腺瘤患者組織中的表達情況；分析VEGF-C和PTEN蛋白之間的相關性及其與患者病理參數之間的關系。結果實驗組VEGF-C蛋白陽性表達水平顯著高于對照組，PTEN蛋白陽性表達水平顯著低于對照組(P<0.05)；PTC中VEGF-C、PTEN蛋白表達在TNM分期、淋巴結轉移間差異具有統計學意義(P<0.05)，VEGF-C、PTEN蛋白兩者在PTC中的表達呈負相關(r=-0.260，P<0.05)。結論PTC患者VEGF-C及PTEN蛋白的表達與淋巴轉移存在密切相關，檢測PTC患者VEGF-C及PTEN蛋白的表達可作為判斷PTC轉移和預后的參考指標。

〔關鍵詞〕甲狀腺乳頭狀癌；血管內皮因子-C；PTEN蛋白

甲狀腺癌(TC)為機體常見惡性腫瘤之一，約占全身惡性腫瘤的1%〔1〕，其中，甲狀腺乳頭狀癌(PTC)在TC中所占比例高達80%〔2〕。研究報道〔2〕，PCT中有30%~80%患者可發生淋巴轉移，預后效果一般較差。對PTC患者發生淋巴轉移的機制尚不完全清楚，且缺乏評價PTC患者發生淋巴轉移、復發及其預后的特異性指標。研究顯示〔3〕，作為血管內皮生長因子(VEGF)家族最新發現的成員，VEGF-C可特異性作用于機體淋巴管內皮細胞，不僅能夠誘導腫瘤周邊組織發生淋巴管增生，且在促進腫瘤生長和轉移中具有舉足輕重的作用〔4〕。PTEN是一種與腫瘤發生、發展存在密切關系的抑癌基因，研究發現〔5〕，PTEN參與多種腫瘤的發生、發展及轉移浸潤。本研究旨在探討VEGF-C和PTEN的表達情況與PTC臨床病理特征的關系。

1對象與方法

1.1研究對象選取2010年6月至2015年1月我院行手術治療確診為原發腫瘤的150例患者，所有切除標本術后均經病理確診，患者臨床資料完整，均未合并甲狀腺其他疾病，均為初次手術且未經過任何治療，排除合并心、肝、腎功能不全及其他惡性腫瘤患者。PTC患者切除標本75例作為觀察組，其中男25例，女50例；年齡28~74〔平均(42.83±7.38)〕歲，淋巴轉移患者42例，未發生轉移患者33例，TNM分期：T1/T2 期患者38例，T3 /T4期37例。選取甲狀腺瘤患者切除標本75例作為對照組，男28例，女47例；年齡26~71〔平均(43.23±8.37)〕歲。兩組患者年齡、性別比較，均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法采用免疫組織化學SP法檢測患者癌旁組織與PTC組織中VEGF-C和PTEN表達情況，DAB顯色試劑盒和SP法試劑盒購于北京國貿生物技術公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購于北京栗康生物公司，濃縮型兔抗人PTEN蛋白多克隆抗體(1∶800)購自北京科達生物技術公司。使用中性10%甲醛對150例標本進行固定，石蠟包埋，制取4 μm厚度標準切片后，采用免疫組化法進行染色。用陽性乳腺癌切片為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)取代一抗為陰性對照，所有實驗操作均嚴格按照實驗說明書進行。

1.3結果判定標準染色組織細胞出現棕色顆粒表示陽性表達。VEGF-C蛋白陽性表達主要于細胞胞質。由3名病理醫師采用雙盲方法對150例例切片進行閱片。每張切片至少選取10個不同視野于高倍鏡下(×400)觀察，以此來判斷組織細胞著色率與染色強度〔6〕。采用半定量十三點評分法對結果進行判定；陽性細胞百分比0分為無陽性細胞；陽性細胞百分比≤10%計為1分；10%<陽性細胞百分比≤50%計為2分；50%<陽性細胞百分比≤80%計為3分；染色強度按陰性、弱、中等、強染色分別計為0~3分。著色強度：未著色計為0分，淺棕色計為1分，棕色計為2分，深棕色計為3分。兩個指標乘積為最終評價結果：0~1分為陰性表達，2~3分為陽性表達。

1.4統計學方法采用SPSS19.0軟件進行χ2檢驗和Spearman檢驗。

2結果

2.1兩組患者VEGF-C與PTEN蛋白的表達情況實驗組VEGF-C及PTEN蛋白的陽性表達率分別為58.14%(43/75)和33.33%(25/75)，兩組比較差異顯著(P<0.05)。

2.2PTC臨床病理特征與VEGF-C和PTEN蛋白表達水平之間的關系不同TNM分期、淋巴結轉移患者間VEGF-C、PTEN蛋白表達水平比較差異顯著(P<0.05)，不同年齡、性別間的EGF-C、PTEN蛋白表達水平間比較無統計學意義(P>0.05)。相關性分析顯示PTC患者中VEGF-C與PTEN蛋白的表達水平呈負相關(r=-0.301，P<0.05)。

3討論

PTC是臨床上常見的頭頸部惡性腫瘤，好發于年輕女性，且發病率有逐年上升的趨勢。淋巴道是PTC轉移的主要方式，臨床上常常有以頸部淋巴結轉移灶為首發癥狀的PTC患者，且淋巴道轉移是導致術后復發的主要原因。VEGF-C在腫瘤組織中表達水平較高，與惡性腫瘤的發生、發展及淋巴道轉移均存在密切關系。研究報道，VEGF-C可激活淋巴內皮細胞上的VEGFR-3并與之結合，引起局部病灶組織淋巴管生成與增生，腫瘤細胞可通過基底膜不完整的新生淋巴管進入淋巴系統，發生淋巴轉移；同時，VEGF-C能夠促進腫瘤細胞分泌相應的細胞因子，改變局部組織微環境，使腫瘤細胞在淋巴系統中更易生存，促進腫瘤細胞經淋巴道轉移〔7〕。此外，VEGF-C 也可激活血管內皮細胞的VEGF受體-2(VEGFR-2)并與其結合，促使血管新生TC組織中VEGF-C的表達，且在淋巴結轉移腫瘤組織中VEGF-C表達水平更高〔8〕。本研究說明VEGF-C在CT的轉移中扮演者重要的角色，與既往研究結果一致〔8〕。

PTEN是繼P53后人類腫瘤中突變與缺失率最高的抑癌基因，研究表明〔9〕，PTEN突變和缺失源存在于大多數腫瘤中，其主要通過磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信號通路發揮作用。PI3K/AKT信號通路能夠參與調節機體細胞增殖、分化與凋亡等過程，其可被非受體酪氨酸激酶或受體酪氨酸激酶活化，活化AKT進一步激活下游因子，發揮調節血管生成、細胞增殖及凋亡的作用。PTEN可拮抗PI3K/AKT通路，可以調控細胞周期、滅活多種凋亡效應分子、促進血管生成、遷移相關程序、激活端粒酶活性等途徑促進腫瘤細胞生長和侵襲〔9〕。此外，PTEN具有下調VEGF表達抑制血管生長的作用。當PTEN蛋白表達缺失或降低時會失去對PI3K/AKT的下調作用，促進VEGF-C合成，誘導血管內皮細胞增生、腫瘤微淋巴管及血管形成，引起腫瘤細胞的侵襲與轉移〔10〕。本研究提示PTEN低表達與CT的發生發展具有良好的相關性，PTEN有可能成為甲狀腺癌惡性程度的潛在標志物，可作為臨床觀察 PTC發展的重要檢測指標。

4參考文獻

1李傳樂，張濱.血管內皮生長因子-C和血管內皮生長因子受體-3在侵襲性甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義〔J〕.國際免疫學雜志，2012；35(2)：157-9.

2易文君，鐘德玝，鄒瓊燕，等.BRAF及其細胞外信號調節激酶1/2信號通路蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及意義〔J〕.中南大學學報(醫學版)，2012；37(9)：889-94.

3Feng W，Jia S.Rapamycin inhibits the invasive ability of thyroid cancer cells by down-regulating the expression of VEGF-C in vitro〔J〕.Cell Biochem Funct，2012；30(6)：487-91.

4趙亞萍，王鑫.甲狀腺乳頭狀癌的超聲圖像特征與病理分析〔J〕.醫學影像學雜志，2012；22(2)：274-5.

5杜培準，李宇，周巖冰，等.甲狀腺乳頭狀癌組織與癌旁組織中長鏈非編碼RNA表達譜分析〔J〕.中華實驗外科雜志，2014；31(11)：2548-50.

6甘世新，任晉軍，米玉錄，等.血管內皮生長因子C和PTEN在口腔鱗狀細胞癌中的表達及與頸淋巴結轉移的關系〔J〕.山西醫藥雜志(下半月版)，2012；41(14)：679-80.

7于波洋，馬步云，周潔宏，等.甲狀腺乳頭狀癌合并橋本氏甲狀腺炎的BRAF基因表達及侵襲性〔J〕.現代生物醫學進展，2015；15(15)：2833-5，2828.

8劉柳，沈美萍，馬曄.血管內皮生長因子-C 在分化型甲狀腺癌的表達及意義〔J〕.南京醫科大學學報：自然科學版，2012；32(5)：686.

9Padma S，Sundaram PS，Arun BR.Unusual presentation of Warthin variant of Papillary thyroid carcinoma with lymph nodal metastases in a patient of Graves′ disease〔J〕.J Cancer Res Ther，2015；11(3)：652.

10Liu B，Wu X，Liu B，etal.MiR-26a enhances metastasis potential of lung cancer cells via AKT pathway by targeting PTEN〔J〕.Biochim Biophys Acta，2012；1822(11)：1692-704.

〔2015-10-19修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號〕R73

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1124-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.047

第一作者：陳政華(1975-)，男，主治醫師，主要從事甲狀腺乳腺疾病方向的研究。