五加芪粉長期毒性試驗研究

卞愧，高艷艷，周德剛

(國家獸用藥品工程技術研究中心/洛陽惠中獸藥有限公司，河南洛陽471003)

五加芪粉長期毒性試驗研究

卞愧，高艷艷，周德剛

(國家獸用藥品工程技術研究中心/洛陽惠中獸藥有限公司，河南洛陽471003)

為考察五加芪粉對動物的安全性，采用大鼠進行長期毒性試驗。設五加芪粉高、中、低(8.4、2.1、0.84 g/kg/d)劑量組及空白對照組，給藥量分別相當于雞每日臨床用量的100倍、25倍、10倍；給藥第14日、第28日及停藥第14日，各組抽取10只(雌雄各半)大鼠，取尾靜脈血進行血液學檢測和血液生化指標測定，對心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢等臟器進行組織病理學檢查。結果顯示：各劑量組大鼠的體重、臟器與體重比值和血液學指標、血液生化指標與空白對照組均無顯著性差異(P>0.05)，心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢等臟器組織病理學檢查均未見明顯病理變化。研究表明五加芪粉臨床應用安全。

五加芪粉；長期毒性；大鼠

五加芪粉由洛陽惠中獸藥有限公司聯合其他幾家公司研制，是農業部2015年9月批準的三類新獸藥，現已在市場上銷售使用。五加芪粉由黃芪、刺五加組成，經提取、純化、濃縮、噴霧干燥等工藝加工制成，具有補中益氣、扶正祛邪的功效，用于提高禽的機體免疫力，配合疫苗使用提高疫苗免疫效果。本研究在前期急性毒性試驗的基礎上，參照《中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則》的相關規定[1]，對其長期用藥的安全性進行評價。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 五加芪粉：批號20120203，規格50 g：165 g生藥，由洛陽惠中獸藥有限公司提供。臨用前用純化水配成0.84、0.21、0.084 g/mL的溶液。

1.1.2 實驗動物 4周齡Wistar大鼠120只，清潔級，雌雄各半，體重180～220 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCKX(京)2012-0001。

1.1.3 主要儀器與試劑 PUS-2018G型半自動生化分析儀，南京普朗新技術有限公司；XF9080A動物自動血液細胞分析儀，南京普朗醫用設備有限公司；DT-1000天孚牌電子天平，常熟市金羊砝碼儀器有限公司；JA2003電子天平：上海上平儀器有限公司。

谷丙轉氨酶(ALT)測試盒(批號20120413)、谷草轉氨酶(AST)測試盒(批號20120413)、尿素氮(BUN)測試盒(批號20120415)、血清(漿)、尿肌酐(Cr)測試盒(批號20120409)、總蛋白(TP)測試盒(批號20120412)、白蛋白(ALB)測試盒(批號20120412)、葡萄糖(GLU)測試盒(批號20120416)和甘油三酯(TG)測試盒(批號20120412)，均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 選用健康大鼠120只，隨機分為4個組，每組30只，雌雄各半，分籠飼養，每籠5只，用雙染色法進行編號標記[2-4]。由實驗室前期對五加芪粉急性毒性試驗研究結果可知,以最大給藥量(即24 g/kg體重)給藥后，小鼠未見任何異常與死亡，依據獸藥研究技術指導原則匯編(2006-2011年)中《獸藥30天和90天喂養試驗指導原則》以及不同種類動物間用藥劑量換算公式[5](即大鼠是雞用藥量的1.4倍，且靶動物雞臨床擬推薦劑量為每1 L水0.2 g)設計給藥劑量，即五加芪粉低劑量組0.84 g/kg/d、中劑量組2.1 g/kg/d、高劑量組8.4 g/kg/d和空白對照組，給藥各組分別以雞每日臨床10倍、25倍、100倍劑量的五加芪粉給大鼠灌胃，按10 mL/kg體重的用量，每天上午灌胃給藥1次，空白對照組灌服同體積的純化水。具體試驗分組和給藥劑量見表1。

表1 試驗分組和給藥劑量

1.2.2 觀察指標[6-8]

1.2.2.1 一般觀察 試驗期間逐日觀察并記錄大鼠的精神狀態、行為表現、采食情況、糞便形態。

1.2.2.2 體重影響 每周逐只稱重1次，并根據體重變化調整灌胃量，連續給藥28 d，觀察至給藥結束后14 d。

1.2.2.3 血液學檢查及血液生化指標測定 給藥第14日、第28日及停藥第14日，各組抽取10只(雌雄各半)大鼠，取尾靜脈血進行血液學檢測和血液生化指標測定，血液學檢查指標包括白細胞數(WBC)、紅細胞數(RBC)、血細胞比容(HCT)、血紅蛋白含量(HGB)、血小板總數(PLT)；血液生化檢查指標包括谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血葡萄糖(GLU)和甘油三酯(TG)。

1.2.2.4 剖檢情況 給藥第28日及停藥第14日，將采血后的10只大鼠處死，進行系統解剖，肉眼觀察其組織器官，同時取其心、肝、腎、肺、脾等臟器進行稱重，計算臟/體比值。

1.2.2.5 病理學檢查 其余大鼠停藥繼續喂養，于第14日處死，隨機取高劑量組和空白對照組大鼠各10只，并取其心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢作組織病理學檢查。

2 結果與分析

2.1 一般觀察 整個試驗過程中，四組大鼠精神狀態、行為表現、采食情況均正常，糞便呈棕黑色顆粒狀。恢復期亦未出現明顯的異常。

2.2 對體重的影響 給藥期間及給藥后，各劑量組大鼠與空白對照組相比，每周體重無明顯差異(P>0.05)，結果見表2。

表2 五加芪粉對大鼠體重的影響

注：“*”表示與空白對照組相比，差異顯著(0.01

2.3 對血液學指標的影響 給藥期間及給藥后，各劑量組大鼠血液學指標均在正常范圍，與空白對照組相比無顯著差異(P>0.05)，結果見表3。

表3 各組大鼠血液學指標

2.4 對血液生化學指標的影響 給藥期間及給藥后，各劑量組大鼠血液生化指標均在正常范圍，與空白對照組相比無顯著差異(P>0.05)，結果見表4。

表4 各組大鼠血液生化指標

2.5 對大鼠內臟器官及臟/體比值的影響 五加芪粉連續灌胃第28日及停藥第14日解剖觀察，各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器均無肉眼可見的病理變化。各組大鼠心、肝、脾、肺、腎與體重比值在正常范圍，與空白對照組相比，無明顯差異(P>0.05)，結果見表5。

表5 五加芪粉對大鼠臟/體比的影響

2.6 組織病理學檢查 H.E染色后鏡檢觀察，高劑量組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢與空白對照組相比，均未見異常的病理變化。

3 討論與小結

五加芪粉以8.4、2.1、0.84 g/kg 3個劑量，28 d連續給大鼠灌胃給藥，試驗觀察期間，各組動物的精神狀態、行為表現、采食、糞便均正常。各給藥組動物的增重、血液學指標、血液生化指標與空白對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。解剖后，各組動物的心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器均無肉眼可見的病理變化，心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器與體重比值與空白對照組相比，無明顯差異(P>0.05)；H.E染色后鏡檢觀察，高劑量組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、胃腸、睪丸、卵巢與空白對照組相比，均未見異常的病理變化。宋艷春等[9]對Wistar大鼠靜脈、腹腔注射刺五加注射液(總黃酮含量：5 mg/mL)16.0、40.0 mL/kg，連續28 d，研究表明大鼠在給藥期間、給藥結束時及恢復期間在飲食、飲水、活動、毛發、呼吸、排泄等方面與空白對照組比較均無顯著性差異；體重增長率、各主要器官臟器系數、血細胞和血液生化指標均無顯著影響；病理組織學檢查亦未見毒性病理改變，此結論與本文研究結果一致。劉陽等[10]對Wistar大鼠灌服黃芪煎劑(180、90、45 g/kg)，連續90 d，研究表明，對大鼠的一般狀況，血、尿常規，主要臟器質量及其系數均無影響；心、肝、脾、肺、腎臟無病理變化，此研究結果亦與本文研究結果一致。張麗等[11]對Wistar大鼠灌服復方黃芪膠囊(5、3、1 g/kg)，連續12周，研究表明大鼠在給藥期間，各組動物的活動、毛色、攝食、糞便及體重增長與空白對照組比較無顯著性差異；常規血液學、血液生化指標、心電圖及心率均無顯著性差異；心、肝、脾、肺、腎臟、腸、腎上腺等臟器未見病理形態變化。

五加芪粉以8.4 g/kg(以雞臨床日用量的100倍)，連續給藥28 d并未對大鼠產生毒副作用，停藥14 d內未見由蓄積毒性引起的后遺效應。因此，五加芪粉臨床應用安全。

[1] 國家食品藥品監督管理局. 中藥、天然藥物長期毒性研究技術指導原則[Z].

[2] 農業部獸藥審評中心.獸藥研究技術指導原則匯編(2006-2011年)[M].北京：化學工業出版社，2012：3.

[3] 李儀奎.中藥新藥的長期毒性試驗(一)[J].中藥新藥與臨床藥理,1994,5(2): 50-54.

[4] 李儀奎.中藥新藥的長期毒性試驗(二)[J].中藥新藥與臨床藥理,1994,5(3): 52-55.

[5] 趙偉，孫國志.不同種實驗動物間用藥量換算[J].畜牧獸醫科技信息,2010,5(32)：52-53.

[6] 沈建忠.動物毒理學[M].北京：中國農業出版社，2002：99-102.

[7] 袁伯俊，廖明陽，李波.藥物毒理學實驗方法與技術[M].北京：化學工業出版社，2007:212-231.

[8] 陳奇.中藥藥理方法學[M]. 北京：人民衛生出版社，1993:119-120.

[9] 宋艷春，劉湘梅，李秀娟，等.刺五加注射液對大鼠長期毒性試驗的研究[J].藥物評價研究，2003，1(33)：1-4.

[10]劉陽，張云鵬，孫影，等.中藥黃芪長期毒性試驗研究[J].現代中西醫結合雜志，2009，18(29)：3545-3549.

[11]張麗，李靈芝，龔海英.復方黃芪膠囊長期毒性試驗研究[J].武警醫學院學報，2005，14(2)：108-110.

(編輯：侯向輝)

Experimental Study on Long-Term Toxicity of Wujiaqi Powder

BIAN Kui，GAO Yan-Yan，ZHOU De-gang

(LuoyangHuizhongAnimalMedicineCoLtd，NationalResearchCenterforVeterinaryMedicine，Luoyang，Henan471003，China)

In order to observe the applied reliability of Wujiaqipowder, the long-term toxicity experiment was conducted in rats. Three treatment groups(8.4，2.1，0.84 g/kg/d)of Wujiaqi powder and blank control group were divided up，the dose amount was equivalent to 10，25，100 times of clinical chicken dosage．10 male and female rats in each group were randomly extracted after administration for 14 d，28 d and at 14 d after drug discontinuance．The tail venous blood was collected for determining the hematology and blood biochemical major indicators．The heart，liver，spleen，lung，kidney，gastrointestinal，testicle and ovary were performed the histopathological examination．The results showed that the major indicators of body weight，viscera and weight ratio，hematology and blood biochemical in each dose group had no statistically significant differences with the control group(P>0.05)，no obvious histopathological changes were found in the heart，liver，spleen，lung，kidney，gastrointestinal，testicle and ovary．The research inferred that Wujiaqipowder is safe in clinical application．

Wujiaqipowder; long-term toxicity;rats

卞愧，碩士，從事新獸藥研發工作。E-mail：kuibianok@163.com

2016-05-31

A

1002-1280 (2016) 07-0041-05

S853.76