MiRNA-155在肝細胞癌組織中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系

鄭嶸炅,張麗娟

(新疆醫科大學第一附屬醫院感染性疾病中心,新疆 烏魯木齊 830054)

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MiRNA-155在肝細胞癌組織中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系

鄭嶸炅,張麗娟

(新疆醫科大學第一附屬醫院感染性疾病中心,新疆 烏魯木齊 830054)

目的：觀察微小RNA-155(miRNA-155)在肝細胞癌(hepatocellular cancer，HCC)組織中的表達及其與臨床病理特征和預后的關系。方法：應用實時定量反轉錄PCR檢測77例HCC患者癌組織和癌旁組織中miRNA-155表達情況，并分析不同病理特征HCC患者間miRNA-155表達差異。Kaplan-Meier生存曲線分析miRNA-155和患者預后的關系。結果：miRNA-155在HCC癌組織中表達量顯著高于癌旁組織(P<0.01)；高miRNA-155表達和HCC患者TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.05)密切相關。Kaplan-Meier生存分析顯示，miRNA-15高表達的HCC患者平均生存期(16.07±1.52)個月，miRNA-155低表達患者為(28.25±1.38)個月，差異有統計學意義(P<0.05)。結論：miRNA-155在HCC患者中存在過表達，且與患者預后存在一定關系。

肝細胞癌；微小核糖核酸；臨床病理特征；預后

肝細胞癌(hepatocellular cancer，HCC)是最常見惡性腫瘤之一，位居全球惡性腫瘤發病率第6位和死亡率第2位[1-2]。中國是肝癌新發病例最多的國家，數據顯示，全國肝癌的發病率居第3位，死亡率僅次于肺癌[3]。HCC發生和發展涉及原位癌基因激活和/或抑癌基因失活，是一種病理機制復雜的多階段、多步驟過程。目前臨床診斷和評估肝臟炎癥、慢性纖維化和癌變程度需結合抗原、抗體等血清標志物以及甲胎蛋白(AFP)等實驗室相關指標，因此尋找特異性生物標記物是 HCC 早期診斷的研究熱點[4-5]。微小RNAs(miRNAs)是一類長度為 19～25個核糖核苷酸的非編碼單鏈小分子 RNA，參與機體多種生物學信號通路調節，與細胞周期活動、腫瘤的進入和轉移有關[6]。隨著對miRNAs的深入研究，發現其異常表達與HCC的發生發展密切相關，對腫瘤進展和生存預后判斷具有潛在價值[7-8]。報道[9-10]稱miRNA-155在一系列實體腫瘤中存在過表達，具有腫瘤診斷和預后判斷的作用。但也有研究[8]表明，miRNA-155在黑色素瘤中表達降低，并能靶向抑制SKI蛋白的抑癌作用。目前為止，針對miRNA-155與HCC相關性的報道相對較少。本研究運用實時定量PCR技術檢測HCC患者癌組織中miRNA-155的表達水平，并初步探討其在肝癌預后中的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集2012年4月至2014年7月新疆醫科大學第一附屬醫院收治的77例HCC患者的臨床病理資料、手術切除癌組織和癌旁組織標本。患者入組標準：①既往乙型肝炎病毒(HBV)感染、肝硬化后進展為HCC;②符合NCCN臨床實踐指南：肝膽腫瘤[11]中肝癌根治手術指征；③術后病理組織確診為HCC；④術后隨訪資料完整。排除標準：①合并丙型肝炎病毒(HCV)感染，或其他病毒性肝炎導致的HCC患者；②合并其他器官、系統惡性腫瘤患者。77例患者中男性59例，女性18例；年齡41～65歲，平均(53.21±7.05)歲；腫瘤TNM分期：Ⅰ期24例，Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期26例。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 分別收集患者癌組織標本和距離癌組織邊緣>5 cm的癌旁組織標本，充分研磨后，每50 mg標本中加入1 mL裂解液，無水乙醇和氯仿處理后離心去雜質，-80℃保存備檢。

1.2.2 細胞總RNA提取 按照RecoverALLTM總核酸提取成套盒(購自美國Ambion公司)說明書提取總RNA，并用Nano Drop ND-1000分光光度計測定RNA的含量和純度。

1.2.3 逆轉錄和實施定量PCR 應用逆轉錄試劑盒(購自大連Takara公司)將總RNA 逆轉錄為cDNA。以cDNA為模板，根據實時PCR引物設計原則及miR-155序列設計miR-155實時 PCR引物。選擇U6作為miR-155的內參基因(見表1)，定量PCR反應條件按照試劑盒說明書嚴格進行。每個樣品均設置3個平行反應復孔，miR-155表達量用實時定量 PCR的CT均值來表示，相對定量用 2-ΔΔCt來計算。

表1 實時定量PCR使用引物列表

1.3 觀察指標

對比HCC患者癌組織和癌旁組織中miRNA-155表達水平差異，并根據病理資料對HCC患者進行分類，探討miRNA-155表達與病理特征之間的關系。收集患者術后隨訪資料，分析不同miRNA-155表達水平的HCC患者術后生存情況。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 癌組織和癌旁組織miRNA-155表達

HCC患者癌組織中miRNA-155平均表達水平為5.70(3.40,11.06)，癌旁組織miRNA-155平均表達水平為1.14(0.75, 2.21)，miRNA-155在HCC癌組織中表達水平顯著高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2 miRNA-155表達與臨床病理關系

以miRNA-155中位數作為臨界值，將77例HCC患者分為低表達組(n=39)和高表達組(n=38)，結果顯示，miRNA-155表達水平與TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯(P<0.05)密切相關，而與性別、腫瘤分化程度、腫瘤最大徑、腫瘤數目和術前AFP水平無明顯關系(P>0.05)。見表2。

表2 miRNA-155表達與HCC患者臨床病理特征的關系[n(%)]

病理特征例數高表達組(n=38)低表達組(n=39)t/χ2值P值性別 男5930(78.95)29(74.36) 女188(21.05)10(65.64)TMN分期 I～II5120(52.63)29(74.36) III～IV2618(47.36)10(25.64)腫瘤分化 低分化3114(36.84)17(43.59) 高、中分化4624(63.16)22(56.41)腫瘤最大徑 ≤5cm3717(44.74)20(51.28) >5cm4021(55.26)19(48.72)腫瘤數目 單發4220(52.63)22(56.41) 多發3518(47.37)17(43.59)微血管侵犯 無5621(55.26)32(82.05) 有2117(44.74)7(17.95)術前AFP/(μg/L) ≤4004924(63.16)25(64.10) >4002814(36.84)14(73.68)0.226>0.053.926<0.050.364>0.050.330>0.050.110>0.054.037<0.050.007>0.05

2.3 miRNA-155表達水平和患者生存預后的關系

隨訪時間至2015年9月，Kaplan-Meier生存分析顯示miRNA-155高表達患者平均生存時間為(16.07±1.52)個月，顯著短于miRNA-155低表達組(28.25±1.38)個月，差異有統計學意義(P<0.01)，可見miRNA-155高表達患者的預后較差(圖1)。

3 討論

miRNA是一種非編碼RNA，成熟的miRNA通過核酸序列互補識別特定目標mNRA,當miRNA和編碼蛋白的mRNA3′-UTR完全配對時，能誘導靶mRNA的降解；而當miRNA和靶mRNA3′-UTR不能完全配對時，在轉錄過程抑制基因的翻譯，從而抑制蛋白質合成并調控基因表達[12]。miRNA-155位于人染色體21q21非編碼轉錄本B細胞整合簇(BIC)第3個外顯子內，其表達水平受BIC的轉錄水平和miRNA加工等調控[13]。miRNA-155作為一種多功能miRNA，參與調控造血細胞和免疫細胞的發育分化。繼Acunzo等[14]表明miRNA-155在慢性淋巴細胞白血病中表達異常之后，越來越多的試驗表明miRNA-155在胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌等實體惡性腫瘤中呈現高表達。本研究顯示，HCC患者癌組織中miRNA-155表達水平較癌旁組織顯著上調，表達水平和TMN分期(P<0.05)、微血管侵犯密(P<0.05)密切相關。同時，Kaplan-Meier生存分析顯示，miRNA-155高表達患者預后較差，韓中博等[15]通過COX多因素模型分析也指出miRNA-155是影響患者肝癌移植術后生存的獨立因素，但miRNA-155是否能作為HCC潛在的腫瘤標志物仍需進一步研究證明。

miRNA-155通過降低caspase-3的活性來抑制腫瘤細胞的凋亡，同時其異常表達也能造成腫瘤蛋白表達減少，抑制細胞周期[16]。miRNA-155還可能參與介導炎癥反應相關的基因調節過程[17]，而炎癥反應在腫瘤發生、發展、惡化、浸潤和轉移中同樣扮演重要角色。傅春江等[18]也發現在腫瘤微環境的刺激下，肝腫瘤細胞的生物學行為和腫瘤細胞內miRNA表達譜均發生了變化，以miRNA-155改變最為顯著。本研究中HCC患者有既往HBV感染、肝硬化病史，后續研究可以探討miRNA-155在疾病進展不同階段的表達情況。

綜上所述，miRNA-155在肝細胞癌組織中存在過表達，且與患者預后存在一定關系，是一種潛在的肝癌診斷、治療和預后判斷的分子標志物。

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(學術編輯：劉鳳君)

Expression of miRNA-155 in hepatocellular cancerous tissues and its relationship with clinical pathological characteristics and prognosis

ZHENG Rong-jiong,ZHANG Li-juan

(CenterforInfectiousDiseases,TheFirstAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumchi830054,Xinjiang,China)

Objective：To observe the expression of micro-RNA-155 (miRNA-155) in tissues of hepatocellular cancer (HCC) and its relationship with clinical pathological characteristics and prognosis.Methods：Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the expression of miRNA-155 in the cancerous tissues and para-cancerous tissues of 77 patients with HCC,and the difference of miRNA-155 expression in HCC patients with different pathological characteristics was analyzed. Kaplan-Meier survival curve was used to analyze the correlation between miRNA-155 and patients’ prognosis.Results：miRNA-155 expression was evidently higher in cancerous tissues than that in para-cancerous tissues of HCC(P<0.01).High expression of miRNA-155 was in close association with TMN staging (P<0.05) and microvascular invasion (P<0.05) in patients with HCC.Kaplan-Meier survival curve analysis showed that the average survival time was (16.07±1.52) months in HCC patients with high expression of miRNA-155 and (28.25±1.38) months in those with low expression of miRNA-155,and there was significant difference (P<0.05).Conclusion：MiRNA-155 over-expresses in patients with HCC and it has certain relationship with patients’ prognosis.

Hepatocellular cancer;Micro ribonucleic acid;Clinical pathological characteristics;Prognosis

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.06.032

2016-07-12

鄭嶸炅(1981-)，女，碩士，主治醫師。E-mail: zhengrongjiong@163.com

時間：2017-1-3 22∶01

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20170103.2201.064.html

1005-3697(2016)06-0891-03

R735.7

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