種雞場主要疫病凈化程序

文│楊林 張淼潔 付雯 劉祥 刁新育（中國動物疫病預防控制中心）

種雞場主要疫病凈化程序

文│楊林 張淼潔 付雯 劉祥 刁新育*（中國動物疫病預防控制中心）

本文按病種講述各疫病凈化工作中所需要經歷的三個階段，即本底調查階段、免疫控制（或監測凈化）階段和凈化維持監測階段。有條件的養殖場可根據本場本底調查情況，自主選擇進入免疫控制階段或維持監測階段。

一、禽流感、新城疫

1.本底調查階段。

（1）調查目的。掌握本場禽流感、新城疫的感染情況，了解雞群健康狀態、免疫水平，評估凈化成本和人力物力投入，制定適合于本場實際情況的凈化方案。

（2）調查內容。全面考察雞場實際情況，包括基礎設施條件、生產管理水平、防疫管理水平及獸醫技術力量等，觀察雞群健康狀況，了解本場禽流感、新城疫的流行歷史和現狀、免疫程序、免疫效果等，針對實際情況提出改進措施。同時通過對種雞場的雞群按照一定比例采樣檢測，掌握禽流感、新城疫帶毒和免疫抗體水平情況。

2.免疫控制階段。本階段，種雞場應根據疫病的本底調查結果和凈化疫病特點，采取以免疫、監測、分群、淘汰、強化管理相結合的綜合防控措施，使禽流感和新城疫的臨床發病得到有效控制，逐步實現免疫無疫狀態，為下一步非免疫無疫凈化奠定基礎。

（1）控制目標。對有禽流感、新城疫臨床疑似病例的雞群和死亡雞進行病原學監測，淘汰感染雞，及時清除病原。通過強化免疫和免疫抗體監測，維持較高的免疫抗體水平，降低雞群易感性，將臨床發病控制在最低水平，逐步實現免疫無疫。

（2）控制措施。種雞場應優先選用本場或區域優勢毒株相對應的優質疫苗，制定禽流感、新城疫免疫程序和抗體監測計劃，在保障養殖管理科學有效、生物安全措施得力和環境可靠的同時，根據抗體監測效果及周邊疫情動態適時調整免疫程序，在做好種雞群免疫的基礎上，重點做好雛雞、育成雞的免疫。

（3）監測內容及比例。本階段的監測重點是后備雞轉群和開產前（或留種前）的免疫抗體監測和病死雞的病原監測，確保種雞群及個體良好的免疫保護屏障、跟蹤雞群病原感染情況，具體監測情況見表1。

（4）監測結果處理。對免疫抗體不合格的種雞群加強免疫一次，3～4周后重新采血檢測，按照雞場制定的淘汰計劃，淘汰加強免疫后抗體不合格的種雞群。

表1 禽流感、新城疫免疫控制階段監測情況表

對病死雞進行病原學監測，對病原學監測陽性和發現的禽流感或新城疫臨床疑似病例，報告當地動物疫病預防控制機構，及時采集病料送省級疫控機構診斷，如確診發生禽流感或新城疫，養殖場應配合獸醫部門按照國家有關規定處理。

（5）控制效果評價。當種雞群歷經兩次及兩次以上普檢和隔離淘汰，種雞群抽檢群體免疫抗體合格率達到90%以上（其中HI平均滴度≥27，群體HI免疫抗體合格率達到80%以上）；連續兩年未發現禽流感、新城疫病原學陽性且未出現禽流感、新城疫臨床病例，即認為達到禽流感、新城疫的免疫無疫狀態，可按照程序申請凈化評估。

有條件的養殖場，可探索哨兵動物監測預警機制，禽舍可設置非免疫育成雞，跟蹤觀察，定期監測。

3.檢測方法。

（1）禽流感。一是血清學檢測。執行標準：GB/T 18936-2003。方法：血凝抑制試驗（HI）。

二是病原學檢測。執行標準：（GB/T19438.2-2004、GB/T19440-2004）以及農業部行業標準（NY/ T772-2004）。方法：采用病毒分離或禽流感病毒RT-PCR試驗對于所有亞型的AIV進行檢測。必要時對病毒進行分型鑒定。

（2）新城疫。一是血清學檢測。執行標準：GB/T 16550-2008。方法：血凝抑制試驗（HI）。

二是病原學檢測。執行標準：GB/T 16550-2008。方法：采用病毒分離或新城疫病毒熒光RT-PCR試驗檢測。通過基因測序區分野毒和疫苗毒。

表2 祖代和父母代雞場禽白血病監測凈化階段監測情況表

二、禽白血病

1.本底調查階段。

（1）調查目的。了解本場禽白血病的感染情況，了解雞群健康狀態和疫病帶毒情況，評估凈化成本和人力物力投入，制定適合于本場實際情況的凈化方案。

（2）調查內容。全面考察雞場實際情況，包括基礎設施條件、生產管理水平、防疫管理水平及獸醫技術力量等，觀察雞群健康狀況，了解本場及引種來源種雞場的白血病流行歷史和現狀，引種來源種雞場對白血病定期檢測的資料。同時通過對種雞場的雞群按照一定比例采樣檢測，掌握禽白血病帶毒情況。

2.監測凈化階段。本階段，種雞場應根據本底調查結果和禽白血病特點，采取以監測、分群、淘汰、強化管理相結合的綜合防控措施，將禽白血病的感染控制在最低水平甚至無疫狀態，逐步清除帶毒雞，實現種群凈化，達到凈化狀態。

（1）階段目標。病原學抽檢，原種場全部為陰性，祖代場、父母代場陽性率低于1%；血清學抽檢，A-B、J抗體及蛋清p27抗原檢測，原種場全部為陰性，祖代場、父母代場陽性率低于1%；連續二年以上無臨床病例。

（2）監測內容及比例。一是原種雞場。

種雞群。對同一批次的種雞群，按以下順序開展凈化工作。依次完成多個世代的監測凈化，直至建立陰性種雞群。

步驟一：孵化室雛雞檢測。收集陰性種雞的種蛋，同一只種雞來源的種蛋放在一起，分群孵化。采集全部1日齡雛雞的胎糞，檢測p27抗原。有一只雛雞為陽性，則同一種雞來源的雛雞均判為陽性，不作種用。陰性雛雞分成小群飼養（20～50只）。對選留的雛雞，以母雞為單位，同一母雞的雛雞放于一個籠中隔離飼養。每個籠間不可直接接觸，包括避免直接氣流的對流。飼養期間要采取避免水平傳播的各種措施。接種疫苗時避免共用注射器。

步驟二：后備種雞篩選檢測。采集5～6周齡雞血漿，分離培養ALV。選出陰性雞，隔離飼養，作為后備種雞。

步驟三：種雞開產初期檢測凈化。選擇每只種雞開產最初的2～3枚蛋，取蛋清的混合樣品，用ELISA方法檢測蛋清中的p27抗原，淘汰抗原陽性雞。其余雞采集血漿接種DF-1細胞分離病毒，用ELISA方法檢測p27抗原，淘汰陽性雞。

步驟四：40～45周齡留種前檢測凈化。取每只雞的2～3枚蛋對蛋清做p27抗原檢測，淘汰陽性雞。其余雞采集血漿接種DF-1細胞分離病毒，用ELISA方法檢測p27抗原，淘汰陽性雞。

步驟五：對建立的陰性種雞群每6個月抽檢血清樣品200份，監測A-B亞群抗體和J亞群抗體。

步驟六：種蛋的選留和孵化。在經步驟四留種前檢測淘汰陽性雞后，每只母雞僅選用1只檢測陰性公雞的精液授精。按規定時間留足種蛋，每只母雞的種蛋均標號。在出殼前，將每只母雞的種蛋置于同一標母雞號的專用紙袋中，置于出雛箱中出雛。

步驟七：第二世代雞的檢測和淘汰。經上述步驟一到步驟五檢測淘汰后種雞的出殼的雛雞，作為凈化后第二世代雞。繼續按步驟一到步驟五的程序，實施第二世代的檢測和凈化。第三世代后可按此程序繼續循環進行。

步驟八：連續進行多個世代種雞的ALV檢測與凈化，直至p27抗原、A-B亞群抗體和J亞群抗體達到凈化標準。

公雞。一是對種雞群配套的公雞，按以下順序開展凈化工作。

步驟一：孵化室1日齡雛雞檢測，同母雞（先收集胎糞一次，再鑒別雌雄）。

步驟二：第一次挑選公雞時，采集血漿進行病毒分離檢測。在開始供精之前，至少經過病毒分離檢測一次，淘汰陽性雞。

步驟三：在生產階段采血漿進行病毒分離檢測一次。采集精液后，檢測精液p27抗原及接種DF1細胞分離病毒，淘汰陽性雞。

二是祖代、父母代雞場。對于祖代和父母代雞場的種雞群和公雞，按照要求開展凈化，監測情況見表2。

（3）監測結果處理。對帶毒雞應及時淘汰，加強同群雞的監測，直至建立本場陰性種雞群。

（4）監測效果評價。原種雞場，連續3個世代未分離到外源性禽白血病，祖代場、父母代場病原陽性率低于1%；抽檢A-B、J抗體，原種場全部為陰性，祖代場、父母代場陽性率低于1%；連續兩年以上無臨床病例，即認為達到禽白血病凈化狀態，可按照程序申請凈化評估。

3.凈化維持階段。種雞場達到禽白血病凈化狀態或通過評估后，可開展維持性監測。原種雞場，從逐只雞分離病毒，改為在開產后按一定比例（如5%～10%）檢測血清抗體和蛋清p27抗原，如無陽性，可逐年減少檢測比例；祖代和父母代雞場從無白血病雞場引種連續2年，可按5%～10%比例進行維持性監測。

4.檢測方法。

（1）血清學檢測。方法：A-B、J抗體ELISA檢測。

（2）病原學檢測。方法：蛋清p27抗原ELISA檢測、病毒分離鑒定。

三、雞白痢

1.本底調查階段。

（1）調查目的。掌握本場雞白痢的感染情況，了解雞群健康狀態和疫病帶毒情況，評估凈化成本和人力物力投入，制定適合于本場實際情況的凈化方案。

（2）調查內容。全面考察雞場實際情況，包括基礎設施條件、生產管理水平、防疫管理水平及獸醫技術力量等，觀察雞群健康狀況，了解本場雞白痢流行歷史和現狀、免疫程序、免疫效果等，針對實際情況提出改進措施。同時通過對種雞場的雞群按照一定比例采樣檢測，掌握雞白痢感染情況。

2.監測凈化階段。本階段，種雞場應根據疫病的本底調查結果和凈化疫病特點，采取以監測、分群、淘汰、強化管理相結合的綜合防控措施，將雞白痢的臨床發病控制在最低水平甚至無疫狀態，逐步清除感染雞，實現種群凈化，達到雞白痢凈化狀態。

（1）階段目標。血清學抽檢，原種場全部為陰性，祖代種雞場陽性率低于0.2%，父母代種雞場陽性率低于0.5%，種公雞全部為陰性；連續兩年以上無臨床病例。

（2）監測內容及比例。本階段的監測重點是后備雞轉群和開產前的感染抗體監測、死胚或弱雛的細菌分離監測，具體監測情況見表3。

監測期間，如發現種群雞白痢陽性異常升高，應及時分析管理因素及技術因素，加大監測密度，評估生物安全措施有效性，評估感染風險。

（3）監測結果處理。對發現的感染雞應及時淘汰、撲殺，加強同舍雞群監測。

（4）監測效果評價。曾祖代及以上連續3代血清學檢測全部為陰性，祖代種雞場雞白痢血清學陽性率低于0.2%，父母代種雞場陽性率低于0.5%；種公雞的雞白痢血清學全部為陰性，連續兩年以上無臨床病例，即認為達到雞白痢凈化狀態，可按照程序申請凈化評估。

3.凈化維持階段。種雞場達到雞白痢凈化狀態或通過評估后，可開展維持性監測。曾祖代及以上連續3代血清學檢測全部為陰性，可按5%～10%比例進行監測。祖代和父母代雞場從無白痢雞場引種連續2年，可按5%～10%比例進行監測。

4.檢測方法。

（1）血清學檢測。執行標準：可參照NY/T 536-2002。方法：采用平板凝集試驗檢測血清或全血。

（2）病原學檢測。執行標準：可參照NY/T 536-2002。方法：采用病原分離方法分離和鑒定雞白痢。

四、凈化效果維持措施

1.加強管理。嚴格執行衛生防疫制度，全面做好清潔和消毒；嚴格執行生物安全管理措施，實行人員進出控制隔離制度；規范飼養管理行為。

2.規范免疫。根據本地區和本場疫病流行情況，依據《中華人民共和國動物防疫法》及有關法律法規的要求，制定免疫程序，并按程序執行。通過凈化評估的企業，根據自身情況可逐步退出免疫，實施非免疫無疫管理。如凈化維持期間監測發現隱性感染或臨床發病，應及時調整免疫程序，必要時全群免疫，加大監測和淘汰力度，實行全進全出，嚴格生物安全操作，維持凈化效果。

3.開展持續監測。凈化雞群建立后，定期開展監測，以維持凈化雞群的健康狀態。

4.保障措施。養殖企業是疫病凈化的實施主體和實際受益者，應遵守凈化管理的相關規定，保障疫病凈化的人力、物力、財力的投入，結合本場實際，開展動物疫病凈化。種雞場應做好疫病凈化必要的軟硬件設計改造，保障凈化期間采樣、檢測、陽性雞群淘汰清群、無害化處理等措施順利實施。種雞場應健全生物安全防護設施設備、加強飼養管理、嚴格消毒、規范無害化處理，按期向凈化評估單位提交疫病凈化實施材料，及時向凈化評估單位報告影響凈化維持體系的重大變更及疫病凈化中的重大問題等。

表3 雞白痢監測凈化階段監測情況表