免疫組織化學技術常見問題分析及改進措施

王小梅

免疫組織化學技術常見問題分析及改進措施

王小梅

目的 探討分析免疫組織化學技術中比較常見的問題，對這些問題進行解決。方法 根據2010年1月～2012年12月我院的80例患者進行分析，按照不同切片方式分成A、B兩組，對比兩組的切片質量，分析問題。 結果 A組使用傳統操作方式，共出現了15例問題切片，2例脫片、5例弱陽性、2例染色過強、6例非特異性染色；B組有40例切片合格。兩組切片成功率差異存在統計學意義（P＜0.05）。結論 免疫組織化學技術包含的環節多，存在的問題多，需要對其進行研究分析，尋找解決方案，對該技術進行完善。

免疫組織；化學技術；改進措施

免疫組織化學檢驗對切片的要求比較高。切片的制作比較復雜，有很多的環節，所以臨床中常常出現問題，一個環節的誤差將會對整個結果產生影響[1]。因此對醫務人員的技術要求比較高，要嚴格管控好每個細節，獲得最精確的結果。此次筆者根據自己的工作經驗進行了分析探討，總結常見問題，給出改進意見，現進行以下報道。

1　資料與方法

1.1一般資料

2010年1月～2012年12月我院選取了80例接受病理分析診斷的患者，按照不同切片方式分組為A、B兩組，兩組一般資料差異不具有統計學意義。

1.2方法

本次研究中A組（40例）依據傳統操作方法切片，（1）利用中性10.0%福爾馬林進行切片固定；（2）對行觀測的載玻片進行浸泡、沖洗、涂膠操作；（3）選取效果較好的組織塊，制作切片；（4）對切片進行染色；（5）選擇同切片最為敏感且無其他干擾影響的檢測系統；（6）利用性能優良的顯色劑實施顯色。

B組（40例）依據改進后的操作方法切片，在傳統操作的基礎上在染色后選擇最為恰當的修復液以及方法增加抗原修復步驟；并在檢測系統選定后進行預實驗，以確定適合實驗操作的各項指標最佳值。

1.3統計學方法

研究中兩組患者的切片數據使用統計學軟件SPSS 11.0進行分析，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

A組使用傳統操作方式，共出現了15例問題切片，2例脫片、5例弱陽性、2例染色過強、6例非特異性染色；B組有40例切片合格。兩組切片成功率差異存在統計學意義（P＜0.05）。

3　討論

3.1切片常見問題

檢測過程中遇到的一些常見問題：（1）脫片。這個是免疫組織化學檢測對于細節處理不當等導致的常見問題之一；（2）弱陽性。沒有對陰性對照染色而使得陽性標本顯弱陽性；（3）染色過強。抗體濃度過高或者孵育時間過長和溫度過高導致的染色過強；（4）非特異性染色。

3.2常見問題的改進

（1）防止脫片。在制作免疫組織化學切片的時候，因為，切片太厚、玻片不潔凈而會出現脫片，為了防止該情況，應該做好如下準備：①清潔玻片。先置于洗潔精水中浸泡然后沖洗，再放入防脫劑浸泡，最后烘干。②切片以2～3 μm最佳，固定組織要及時，讓其脫水充分，適當浸蠟，只要操作規范合理就能夠避免脫片發生[2-4]。（2）防止弱陽。弱陽是在反應良好和不反應之間的狀態，主要原因如下：①抗原修復方式引起的，石蠟是切片固定劑，抗原封閉抗原，所以要特殊處理，常用的是抗原熱修復或者酶消化法，有時也可以將兩種方法混合使用，后者是溶解蛋白進行修復，也是最早的方式。一般廠商對實驗試劑會進行適用范圍說明，在使用時要根據梯度測試來選擇濃度。②沖洗液殘留問題，切片上殘留的沖洗液會導致抗體加入后備稀釋。孵育時要讓切片水平放置，否則會導致抗體流失。（3）正確操作使染色適度。過度染色是沒有控制好抗體的濃度以及孵育的時間所導致的，現在的抗體都是高濃縮性抗體，其相應的孵育時間需要保證在1 h，溫度為4℃，這樣可避免不利反應出現，當溫度超過37℃，就會有促進抗體反應，所以一般我們免疫組織化學處理問題要控制在20～28℃[5-6]。（4）防止非特異性免疫。內源性酶和生物素要去除，血清的選取應該避免出血和壞死血清，選擇的抗體純度要達標，可適當采取針對性單抗體處理方式[7]。

[1]施麗娟. 發光免疫分析技術及在臨床檢驗中的應用[J]. 檢驗醫學與臨床，2012，9（4）：454-456.

[2]周小鴿，劉勇，主譯. 組織學技術的理論與實踐[M]. 6 版. 北京：北京大學醫學出版社，2010：72-77.

[3]梁英杰，凌啟波，張威. 臨床病理學技術[M]. 北京：人民衛生出版社，2011：12-13.

[4]趙寶忠，張立華，李恩鴻. 病理組織脫水劑及組織脫水工藝的再認識[J]. 臨床與實驗病理學雜志，2011，27（4）：438-439.

[5]胥穎，何娟，徐科偉，等. 櫻花全自動密閉式組織脫水機應用體會[J]. 實用醫院臨床雜志，2012，9（6）：180-181.

[6]羅添友，秦巍笈，唐源. Leica Peloris全自動脫水機在小組織快速處理技術中的應用體會[J]. 臨床與實驗病理學雜志，2014，30 （10）：1199-1200.

[7]郭海燕，王志生，王亦飛，等. 病理切片制作過程中常見問題及處理對策[J]. 中國繼續醫學教育，2015，7（9）：184.

[8]管桂杰，董祥梅，姚慧欣. 微小活檢組織在自動脫水機中運行方式的改進[J]. 中國醫療設備，2012，27（4）：102-103.

Analysis and Improvement Measures of the Common Problems in the Immunohistochemical Technique

WANG Xiaomei Department of Pathology, The Fourth Hospital of Daqing, Daqing Heilongjiang 163712, China

Objective To explore and analyze the common problems in the immunohistochemical technique, and to solve these problems. Methods 80 cases in our hospital were analyzed from January 2010 to December 2012, according to the different sections of the two groups were divided into groups, compared with the two groups of the quality of the section, the analysis of the problem. Results A group using the traditional operation method, a total of 15 cases of the problem, 2 cases took off, 5 cases of weak positive, 2 cases of dyeing too strong, 6 cases of non-specific staining; B group of 40 cases of biopsy. There was significant difference in the success rate of the two groups (P＜0.05). Conclusion The immune tissue chemistry technology contains many links, there are many problems, which need to be studied and analyzed, looking for solutions, to improve the technology.

Immune tissue, Chemical technology, Improvement measures

R446

A

1674-9308（2016）30-0050-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.30.030

大慶市第四醫院病理科，黑龍江 大慶 163712

3.3進行預實驗

觀察切片前要進行預實驗，獲得最佳的抗體修復方式、稀釋度、孵育時間，這樣可以提升檢驗的準確度。預實驗要按照試劑廠家的對照片來進行試驗，如果沒有對照片，則應該查閱文獻了解何種組織表達高。不進行預實驗很容易導致標本和藥劑的浪費[8]。

此次研究中我們對各個細節進行了管控，避免了問題的出現，現在實驗越來越多，技術也越來越成熟，但是免疫組織化學實驗對各步驟的精確度要求比較高，所以需要我們對每個環節都重視才能夠獲得比較好的效果，為臨床診斷提供精確的參考依據。免疫組織化學常見問題比較多，我們對其進行探討分析，希望能夠為臨床檢驗提供參考，提升診斷的準確度。