恒溫實時熒光法快速檢測簡單異尖線蟲方法的建立

張 森,鄧 艷,黃燕瓊,何淑華,戴 金,趙尚志,石 磊,柏建山,*

(1.華南理工大學食品科學與工程學院,廣東廣州 510640;2.廣州機場出入境檢驗檢疫局國家水產品檢測重點實驗室,廣東廣州 510470;3.暨南大學食品安全與營養研究院,廣東廣州 510632)

恒溫實時熒光法快速檢測簡單異尖線蟲方法的建立

張 森1,2,鄧 艷2,黃燕瓊2,何淑華2,戴 金2,趙尚志2,石 磊3,柏建山2,*

(1.華南理工大學食品科學與工程學院,廣東廣州 510640;2.廣州機場出入境檢驗檢疫局國家水產品檢測重點實驗室,廣東廣州 510470;3.暨南大學食品安全與營養研究院,廣東廣州 510632)

為了快速鑒定簡單異尖線蟲,本研究建立了一套檢測簡單異尖線蟲DNA的恒溫實時熒光環介導等溫擴增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根據LAMP方法原理,針對簡單異尖線蟲ITS2區域設計引物特異性識別靶標基因。進行了特異性、靈敏度、重復性和實際樣品的測試,并與傳統的PCR方法進行比較。結果表明,該方法能夠特異性擴增簡單異尖線蟲DNA,對含有簡單異尖線蟲ITS2目的基因片段的質粒DNA檢測限為1 fg/μL,靈敏度比傳統的PCR方法高100倍,重復性良好,對實際樣品進行檢測,與傳統的PCR測序方法結果相符。本研究建立的恒溫實時熒光快速檢測方法適用于特異性檢測簡單異尖線蟲。

恒溫實時熒光法,簡單異尖線蟲,快速檢測

異尖線蟲病是人感染異尖線蟲的第三期幼蟲引起的疾病,主要是由于食入生的或未熟的海魚,如壽司、生魚片等[1]。感染的異尖線蟲可以鉆入消化道,或移行到其它組織,從而引起人的急腹癥癥狀:如劇烈腹痛、惡心、嘔吐、腹瀉等[1-4],還能導致人的過敏反應[5-7]。……