微小RNA-133a在缺血性心衰患者中的表達及其臨床意義

周海英 茹倩影 朱世倫

(上海交通大學醫學院附屬同仁醫院老年科，上海市 200050，E-mail：zhouhning@126.com)

微小RNA-133a在缺血性心衰患者中的表達及其臨床意義

周海英 茹倩影 朱世倫

(上海交通大學醫學院附屬同仁醫院老年科，上海市 200050，E-mail：zhouhning@126.com)

目的 探討微小RNA(miRNA)-133a在缺血性心衰(IHF)患者血漿中的表達水平及其臨床意義。方法 選擇IHF患者60例為IHF組，20例健康自愿者為對照組。兩組均行超聲心動圖檢測舒張壓、收縮壓、左心室舒張末期容積(LVEDV)、左房內徑(LAD)、左心室射血分數(LVEF)等指標，并檢測外周血miRNA-133a、末端B型腦鈉肽原(NT-proBNP)、超敏C反應蛋白(hs-CRP)水平。比較兩組上述指標差異，并分析IHF患者血漿miRNA-133a水平與其他指標的相關性。結果 IHF組患者血漿miRNA-133a水平及LVEF、LAD均明顯低于對照組(P<0.05)，舒張壓、收縮壓和LVEDV、NT-proBNP、hs-CRP水平均高于對照組(P<0.05)；IHF患者的miRNA-133a與舒張壓、收縮壓、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈負相關，與LVEF和LAD呈正相關(P<0.05)。結論 IHF患者血漿miRNA-133a表達上調，miRNA-133a可能參與IHF患者的心室重構，miRNA-133a有望作為IHF診斷及風險評估的新的生物標志物。

缺血性心衰；微小RNA-133a；心室重構

心血管疾病是人類死亡的主要原因之一，近年來雖然急性心肌梗死導致的死亡率已經明顯降低，但有研究發現缺血性心衰(ischemic heart failure，IHF)導致的死亡率逐年遞增[1-2]。微小RNA(micro RMA，miRNA)是一大類內源性的、單股非編碼的小分子RNA，大小約22個核苷酸，通過與靶mRNA的3′端非翻譯區(3′UTR)完全或不完全互補結合來抑制或降解靶向mRNA，從而達到轉錄后調節的作用。在人類基因組上，超過3%的基因被用來編碼miRNA，且人類基因組上有超過30%的基因受miRNA調節[3-5]。miRNA-133最初于心肌和骨骼肌中被發現，具有促進心肌細胞增殖、控制心肌電傳導、抑制心肌肥大、調控心臟自動節律性等功能，故其表達與心肌肥大、心率失常及心衰等心血管疾病的發生發展密切相關[6-7]。在乳腺癌中，miR-133過表達對血管生成有抑制作用[8]。在IHF中，細胞存活是否受miR-133的調控需要進一步闡明，本研究旨在探討miRNA-133在IHF患者血漿中的表達水平及在病理生理機制中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年3月至2015年3月在我院心內科住院治療的IHF患者60例作為IHF組，正常健康者20例作為對照組。IHF的診斷標準：有勞力性呼吸困難、咳嗽、端坐呼吸、夜間陣發性呼吸困難，心臟擴大、肺底可聞及濕啰音，頸靜脈充盈，肝臟腫大，體位性水腫，心臟彩色多普勒超聲射血分數<50%。兩組均排除3個月內發生心肌梗死者，以及存在風濕性心臟病、擴張型心肌病、肥厚性心肌病、嚴重肝腎功能不全、高血壓者，入院后檢測發現血壓異常升高者。IHF組行經皮冠狀動脈介入術(percutaneous coronary intervention，PCI)共18例(30%)。兩組在性別、年齡、吸煙史、是否合并有糖尿病等方面，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 兩組臨床資料比較

1.2 主要實驗材料和儀器 RNA提取試劑盒TRI Reagent BD和超敏C-反應蛋白(high-sensitivvity C-reactive protein，hs-CRP)酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(BD Biosciences公司)，RT反轉錄試劑盒、熒光定量PCR試劑盒(日本Takara公司)；7500 Fast Real-time PCR儀(美國ABI公司)；羅氏C8000全自動生化分析儀(包括羅氏電化學發光試劑盒和比色試劑盒)。

1.3 超聲心動圖檢查 使用Philips iE33彩色多普勒超聲診斷儀對IHF組和對照組進行超聲心動圖檢查，IHF組患者均為治療前進行超聲心動圖檢查。

記錄左心室舒張末期容積(left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)、左心室射血分數(left ventricular ejection fraction，LVEF)、左房內徑(left atrial diameter，LAD)、收縮壓及舒張壓等指標。

1.4 檢測指標

1.4.1 樣本收集：兩組患者空腹8 h以上后，采取肘靜脈血2 ml。IHF組患者均為治療前進行指標的檢測。

1.4.2 熒光Rt-PCR測定血漿miRNA-133a的表達：取全血樣本，4℃下3 000 g離心10 min，取血漿于1.5 ml EP管中12 000 g離心10 min，取上清，用TRI Reagent BD試劑盒提取總RNA，再采用RT反轉錄試劑盒反轉錄成cDNA，操作均嚴格按試劑盒說明書進行。用熒光定量Real-Time PCR法檢測血漿miRNA-133a的表達量，相對表達量用2-△△Ct法進行計算。

1.4.3 ELISA檢測N末端腦鈉肽原(N-terminal pro B-type natriuretic peptide，NT-proBNP)及hs-CRP： 取全血樣本，4℃下3 000 g離心10 min，取血漿于1.5 ml EP管中12 000 g離心10 min，取上清用于檢測，分別采用羅氏電化學發光試劑盒及hs-CRP ELISA試劑盒分別檢測患者血漿NT-proBNP和hs-CRP水平檢測，操作均嚴格按試劑盒說明書進行。

1.5 統計學分析 采用 SPSS 19.0軟件進行統計學分析，計量資料以(x±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson或Spearman分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者miRNA-133a水平比較 IHF組患者血漿miRNA-133a的相對表達量為1.33±1.42，明顯低于對照組的3.88±2.12(t=2.934，P=0.016)。

2.2 兩組超聲心動圖檢測結果比較 IHF組舒張壓、收縮壓和LVEDV均高于對照組；LVEF和LAD低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組超聲心動圖檢查結果比較(x±s)

注：1 mm Hg=0.133 kPa。

2.4 兩組患者NT-proBNP和hs-CRP的比較 與對照組相比，IHF組患者血漿NT-proBNP和hs-CRP水平明顯升高(P<0.05)，見表3。

2.5 IHF患者miRNA-133a表達水平與其他指標之間的相關性分析 IHF患者血漿中miRNA-133a水平與性別、年齡、吸煙史、是否患有糖尿病無關(P>0.05)；miR-133a的表達與是否行PCI、舒張壓、收縮壓、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈負相關，與LVEF和LAD水平呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 IHF患者miRNA-133a水平與各指標的相關性分析

注：*為采用Pearson分析。

3 討 論

心力衰竭又稱“心肌衰竭”，往往由各種疾病引起心肌收縮能力減弱，心臟不能搏出同靜脈回流及身體組織代謝所需相稱的血液供應，從而使心臟的血液輸出量減少，不足以滿足機體的需要，并由此產生一系列癥狀和體征。其中心肌凋亡和缺血是造成心衰的兩個重要原因[9-10]。近年來miRNA在心血管疾病診療中的作用逐漸受到人們的重視。在異丙腎上腺素誘導的心肌肥大患者中，miRNA-133a表達明顯減少，而miRNA-133a表達上調會有效抑制心肌肥大的發生[11]。miRNA-133a表達對心肌肥大、心肌重塑和心肌纖維化有明顯的抑制作用[12]。

本研究結果顯示，IHF組患者血漿miRNA-133a表達水平明顯低于對照組(P<0.05)，提示IHF患者血漿中miR-133a表達水平下調；此外，IHF組舒張壓、收縮壓和LVEDV均高于對照組，而LVEF和LAD低于對照組，且NT-proBNP和hs-CRP表達較對照組明顯升高(P<0.05)，提示IHF患者LVEF降低，NT-proBNP和hs-CRP表達升高。NT-proBNP和hs-CRP是人體內非常重要的內分泌激素和細胞因子，生理條件下可通過補體系統識別并清除病理物質，但過高的NT-proBNP和hs-CRP可通過影響內皮細胞的功能從而增加心血管疾病的發生。有研究表明，心衰患者NT-proBNP和hs-CRP明顯升高，疾病的嚴重程度與NT-proBNP和hs-CRP呈正相關，并且依據NT-proBNP和hs-CRP對心衰患者心室重構進行初步評估[13]。研究表明LVEF越低，心室收縮壓越高，心室收縮功能受損越嚴重，心室重構越明顯[14]。相關性分析結果顯示，IHF患者的miRNA-133a與舒張壓、收縮壓、LVEDV、hs-CRP和NT-proBNP呈負相關，與LVEF和LAD呈正相關(P<0.05)，因此，miR-133a可能參與心室重構[14]。結合國內外研究，我們推測miRNA-133a可能與IHF患者冠狀動脈損傷及參與心肌缺血有關。

綜上所述，IHF患者血漿miRNA-133a表達水平下調，miRNA-133a可能作為IHF診斷及進行風險評估的新的標記物。同時miRNA-133a可能參與心室重構，有望為臨床上治療心衰等心血管疾病提供新的治療靶點和治療思路。由于本研究樣本量有限，仍需進一步研究以明確miRNA-133a是否參與了患者的心室重構。

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Expression and clinical significance of microRNA-133a in patients with ischemic heart failure

ZHOUHai-ying,RUQian-ying,ZHUShi-lun

(DepartmentofGeriatric,AffiliatedTongrenHospitalofShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine,Shanghai200050,China)

Objective To explore the expression level and clinical significance of plasma microRNA(miRNA)-133a in patients with ischemic heart failure(IHF).Methods A total of 60 patients with IHF were enrolled as IHF group and 20 health volunteers as control group.The diastolic blood pressure,systolic blood pressure,left ventricular end-diastolic volume(LVEDV),left atrial diameter(LAD) and left ventricular ejection fraction(LVEF) were measured in both groups by echocardiogram.And the peripheral blood levels of miRNA-133a,N-terminal pro B-type natriuretic peptide(NT-proBNP) and high-sensitivity C-reactive protein(hs-CRP) were detected in both groups.The indices above were compared between two groups.And the correlation of miRNA-133a level with other indices was analyzed in the patients with IFH.Results The plasma miRNA-133a level,LVEF and LAD were significantly lower but diastolic blood pressure,systolic blood pressure,LVEDV,the levels of NT-proBNP and hs-CRP were higher in the IFH group compared to those in the control group(P<0.05).miRNA-133a negatively correlated with diastolic blood pressure,systolic blood pressure,LVEDV,hs-CRP and NT-proBNP,and positively correlated with LVEF and LAD among the patients with IHF(P<0.05).Conclusion The patients with IHF highly express miRNA-133a.miRNA-133a may participate in the left ventricular remodeling in the patients with IHF,and it is expected as a new biomarkers for the diagnosis and risk assessment of IHF. 【Key words】 Ischemic heart failure,MicroRNA-133a,Ventricular remodeling

周海英(1977～)，女，本科，主治醫師，研究方向：老年心腦血管方向。

朱世倫(1965～)，女，本科，副主任醫師，研究方向：老年醫學，E-mail：liuqsysucc@163.com。

R 54

A

0253-4304(2016)02-0214-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.02.19

2015-10-13

2016-01-10)