口腔黏膜癌前病變細(xì)胞和患者血清中p53、p16及PCNA的表達(dá)及意義

劉圓月 侯菊花

(益陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，湖南 益陽(yáng) 413000)

口腔癌大部分由口腔黏膜癌前病變發(fā)展而來(lái)，因?yàn)榭谇火つ?nèi)側(cè)容易發(fā)生白色潰瘍或水泡，多是由于壓力、睡眠不好、飲食習(xí)慣改變等引起，一般2 w內(nèi)會(huì)痊愈;如超過2 w未痊愈，必須作檢查。該部位有60%可能發(fā)生上皮性細(xì)胞癌〔1〕。如何及時(shí)準(zhǔn)確診斷口腔黏膜癌前病變?yōu)槿藗冄芯康闹攸c(diǎn)〔2〕。本研究主要探討口腔黏膜癌前病變細(xì)胞和患者血清中p53、p16及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)及其意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 選擇2008年3月至2012年4月我院口腔科手術(shù)切除及活檢標(biāo)本65例，其中口腔扁平苔蘚21例，口腔白斑22例，慢性盤狀紅斑狼瘡22例。所有標(biāo)本均病理診斷明確，所有患者手術(shù)前均未行放療及化療治療。

1.2 試劑 鼠抗人p53蛋白單克隆抗體:上海信然生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);兔抗人p16蛋白多克隆抗體:上海信然生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);鼠抗人PCNA單克隆抗體:上海又科生物科技公司生產(chǎn)。

1.3 方法 口腔黏膜標(biāo)本連續(xù)切片，給予常規(guī)脫蠟水化，微波枸櫞酸鹽緩沖液抗原修復(fù)，用免疫組化LSAB法，1∶50稀釋鼠抗人p53蛋白單克隆抗體，1∶40稀釋兔抗人p16蛋白多克隆抗體，1∶80稀釋鼠抗人PCNA單克隆抗體。免疫組化技術(shù)用AEC顯色，蘇木素復(fù)染，甘油明膠封片。以PBS代替一抗做陰性對(duì)照，并設(shè)立正常陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判斷:陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%;陰性，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞＜10%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，所有計(jì)量資料均采用x±s表示，計(jì)數(shù)資料用百分率表示。

2 結(jié)果

2.1 免疫形態(tài)特征 p53蛋白在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)陽(yáng)性，染色呈棕紅色顆粒，局灶性或彌散性分布;在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)陰性。各種陽(yáng)性細(xì)胞著色程度也不同，有的顆粒粗大、顏色較深，有的顆粒細(xì)小、染色較淺。p16蛋白在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)陽(yáng)性，染色為棕紅色顆粒，呈彌散性分布;極少數(shù)p16蛋白在細(xì)胞核內(nèi)呈陽(yáng)性，呈散在分布。PCNA在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)陽(yáng)性，局灶性或彌散性分布，呈棕紅色顆粒;各種陽(yáng)性細(xì)胞著色程度也不同，有的顆粒粗大、顏色較深，有的顆粒細(xì)小、染色較淺。

2.2 p53、p16及PCNA在口腔不同病變組織中的表達(dá) p53、p16及PCNA在口腔不同病變組織中的表達(dá)見表1。p53蛋白在慢性盤狀紅斑狼瘡/口腔白斑中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于口腔扁平苔蘚(P＜0.05);p53蛋白在口腔白斑表達(dá)的陽(yáng)性率與慢性盤狀紅斑狼瘡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);p16蛋白在口腔扁平苔蘚中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于口腔白斑/慢性盤狀紅斑狼瘡(P＜0.05);p16蛋白在口腔白斑表達(dá)的陽(yáng)性率與慢性盤狀紅斑狼瘡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);PCNA在慢性盤狀紅斑狼瘡/口腔白斑中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于口腔扁平苔蘚(P＜0.05);PCNA在口腔白斑表達(dá)的陽(yáng)性率與慢性盤狀紅斑狼瘡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 p53、p16及PCNA在口腔不同病變組織中的表達(dá)〔n(%)〕

3 討論

口腔黏膜上發(fā)生的某些疾病容易癌變而成為口腔癌，醫(yī)學(xué)上稱之為口腔黏膜癌前病變，其變癌前并不是癌，是指那些臨床及組織學(xué)有改變并具有癌變傾向的病變〔3〕。目前公認(rèn)的口腔黏膜癌前病變有白斑、紅斑、黏膜下纖維變性、黏膜良性淋巴組織增生癥、上皮不典型增生以及交界痣等〔4〕。口腔黏膜扁平苔蘚和慢性非特異性潰瘍等也有可能癌變。其中白斑、口腔黏膜扁平苔蘚和慢性非特異性潰瘍，為中老年人的多發(fā)病。凡發(fā)現(xiàn)上述病變，應(yīng)及時(shí)就診。

p53基因是腫瘤抑制基因之一，其表達(dá)產(chǎn)物對(duì)腫瘤的發(fā)生具有抑制作用，但是p53基因發(fā)生突變后的表達(dá)產(chǎn)物則喪失了抑癌功能，反而可以促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。p16基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新型抑癌基因，其位于9p21，可以編碼由148個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，負(fù)性調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)。PCNA是DNA聚合酶的輔酶，其與DNA的復(fù)制和細(xì)胞分裂增殖具有相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)，約75%的癌細(xì)胞株有p16基因的缺失和突變，而p53僅有50%的缺失和突變率，其編碼產(chǎn)物p16蛋白與p53不同，直接作用于細(xì)胞周期的抑癌基因〔5〕。

本研究結(jié)果說明p53、p16及PCNA與口腔黏膜癌前病變具有一定的相關(guān)性。p53蛋白在口腔白斑與慢性盤狀紅斑狼瘡中表達(dá)陽(yáng)性率較高，提示口腔白斑與慢性盤狀紅斑狼瘡存在向惡性轉(zhuǎn)化、發(fā)展為惡性病變的危險(xiǎn)〔6〕。p16蛋白能夠和依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶(CDK)4結(jié)合，抑制CDK4/周期蛋白D復(fù)合物的催化活性，從而抑制細(xì)胞增生和惡性轉(zhuǎn)化，因此認(rèn)為p16基因是一種重要的抑癌基因，本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)〔7〕。PCNA是DNA多聚酶的輔助蛋白，與細(xì)胞DNA合成具有相關(guān)性，其在靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞中表達(dá)為陰性，在增殖細(xì)胞的組織中表達(dá)為陽(yáng)性，因此PCNA的檢測(cè)可反映局部細(xì)胞的增生狀態(tài)〔8〕。

綜上所述，p53基因突變使p53蛋白過度表達(dá)、p16蛋白表達(dá)缺失和PCNA的過度表達(dá)與口腔黏膜癌前病變的發(fā)生和發(fā)展具有相關(guān)性，為口腔黏膜癌前病變的診斷提供了理論依據(jù)。

1 林 梅.口腔癌前病變的臨床檢查和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估〔J〕.中華口腔醫(yī)學(xué)研究雜志，2008;2(5):427-30.

2 龐玲娟，陳小華，李汝瑤，等.口腔黏膜白斑臨床病理觀察〔J〕.廣州醫(yī)藥，2007;38(2):19-22.

3 李曙霞.口腔癌前病變癌變機(jī)理-上皮結(jié)締組織相互作用在口腔黏膜癌變中的作用〔J〕.現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志，2005;19(5):525-7.

4 徐 江，彭心宇，潘曉琳.口腔黏膜白斑癌變的研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010;5(10):975-7.

5 葛姝云，婁佳寧，周曾同.實(shí)驗(yàn)性口腔白斑癌變過程中端粒酶活性變化的研究〔J〕.臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2009;25(1):19-20.

6 鐘良軍，袁 芳，張 薇.口腔黏膜癌前病變及口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌p53、p16蛋白和PCNA的表達(dá)〔J〕.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002;25(1):12-4.

7 李海如，鄭健，袁蘇娟.口腔黏膜鱗癌和癌前病變p53、ras基因突變的檢測(cè)及p53、p21蛋白的表達(dá)〔J〕.口腔頜面外科雜志，2000;10(2):131-3.

8 許彥枝，王 丹，遲永利.口腔黏膜扁平苔蘚組織中PCNA的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.天津醫(yī)藥，2009;37(8):652-54.