rh-bFGF對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

邵宏超，葛嫣然，劉巖，蘇杰，田華

(華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院，河北唐山 063000)

?

rh-bFGF對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制

邵宏超，葛嫣然，劉巖，蘇杰，田華

(華北理工大學(xué)附屬醫(yī)院，河北唐山 063000)

摘要：目的探討重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(rh-bFGF)對(duì)兔視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷(RIRI)的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法選取54只雄性體健大耳白兔，隨機(jī)分為模型組(n=24)、rh-bFGF組(n=24)、假手術(shù)組(n=6)。模型組及rh-bFGF組采用前房加壓灌注法制作RIRI模型，在缺血再灌注剛開始時(shí)分別于玻璃體腔內(nèi)注入10 μL的生理鹽水和rh-bFGF溶液(濃度為0.2 g/L)，造模后1、6、24、72 h各處死動(dòng)物6只并摘取眼球；假手術(shù)組僅予前房穿刺，無其他操作，于前兩組造模后1 h處死。分別采用羥胺法、TBA法測定各組視網(wǎng)膜組織超氧化物歧二酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。結(jié)果模型組、rh-bFGF組與假手術(shù)組比較，1、6、24 h各時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，rh-bFGF組造模后相同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜組織SOD活性均明顯高于模型組，MDA含量明顯低于模型組，P均<0.05。結(jié)論rh-bFGF對(duì)兔RIRI有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增加視網(wǎng)膜組織SOD活性、減少M(fèi)DA含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞：視網(wǎng)膜；缺血再灌注；重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子；超氧化物歧化酶；丙二醛

以視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷(RIRI)為病理生理過程的一類疾病是臨床診療過程中常見的視功能損傷性疾病，嚴(yán)重者可導(dǎo)致視功能不可逆性損傷[1]。缺血再灌注損傷的機(jī)制是多方面的，包括氧自由基及自由基類產(chǎn)物增加、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)的介入等[2,3]。研究表明，重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(rh-bFGF)能對(duì)抗缺氧、低血糖、興奮性氨基酸、自由基和一氧化氮的損傷，對(duì)缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用，但對(duì)其作用機(jī)制的研究報(bào)道較少[4]。2015年4月，我們觀察了rh-bFGF對(duì)RIRI兔視網(wǎng)膜組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影響，進(jìn)一步討論rh-bFGF對(duì)RIRI保護(hù)作用的可能機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料雄性體健大耳白兔54只(本院動(dòng)物中心購入)，體質(zhì)量(2.5±0.2)kg，外眼及眼底正常，飼養(yǎng)于相同生長環(huán)境。rh-bFGF由上海西塘生物科技有限公司提供，SOD和MDA測定試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供。

1.2造模與干預(yù)將54只大耳白兔隨機(jī)分為模型組(n=24)、rh-bFGF組(n=24)、假手術(shù)組(n=6)。模型組、rh-bFGF組均制備RIRI模型。造模前兩組分別于兔眼玻璃體內(nèi)注射10 μL的生理鹽水和rh-bFGF(濃度為0.2 g/L)溶液，每次注入前均用微量注射器抽出等量房水。RIRI模型建立采取前房加壓灌注法：以1 g/L的烏拉坦5 mg/kg注射兔耳緣靜脈給予麻醉，麻醉滿意后固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，均選取左眼造模，復(fù)方托品酰胺滴眼液散開瞳孔，準(zhǔn)備一端連有5號(hào)頭皮針、另一端連接生理鹽的水輸液瓶，將頭皮針沿角鞏膜緣處穿刺入前房，將輸液瓶高度緩慢升高使其產(chǎn)生16.7 kPa壓力[5]。觀察可見球結(jié)膜、虹膜顏色變蒼白，視網(wǎng)膜明顯水腫且蒼白。60 min后緩慢降低輸液瓶高度至動(dòng)物眼水平，此時(shí)球結(jié)膜、虹膜顏色恢復(fù)正常，視網(wǎng)膜血供恢復(fù)橘紅色，提示RIRI造模成功[6]。假手術(shù)組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予左眼前房穿刺，無其他操作。

1.3視網(wǎng)膜組織SOD活性、MDA含量檢測假手術(shù)組處死動(dòng)物并摘除眼球。模型組和rh-bFGF組于造模成功后1、6、24、72 h各處死動(dòng)物6只并摘除眼球。三組均置于冰生理鹽水中，剪開角鞏膜緣，棄去眼前節(jié)及玻璃體，外翻眼球壁，解剖顯微鏡下剝離視網(wǎng)膜，分析天平稱濕重，用雙蒸水配成40 g/L濕重，勻漿，3 500 r/min低溫離心10 min，取上層清液。采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，硫代巴比妥酸法測定MDA含量。操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書。每次測量時(shí)均用新鮮配制液并測定標(biāo)準(zhǔn)管。

2結(jié)果

各組不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜組織SOD活性和MDA含量比較見表1。

表1　各組不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜組織SOD活性、MDA含量比較

注：與假手術(shù)組比較，○P<0.05；與rh-bFGF組比較，*P<0.05；與同組1 h比較，△P<0.05；與同組6 h比較，▲P<0.05；與同組24 h比較，☆P<0.05。

3討論

青光眼、視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈栓塞等疾病均可導(dǎo)致RIRI發(fā)生[7]。在視網(wǎng)膜缺血再灌注時(shí)，細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化增強(qiáng)產(chǎn)生大量自由基，使細(xì)胞膜多價(jià)不飽和脂肪酸減少，膜的通透性增加，同時(shí)自由基也可引起線粒體膜的磷脂過氧化，使線粒體膜的液態(tài)及流動(dòng)性發(fā)生改變，從而引起線粒體功能障礙。自由基引起的脂質(zhì)過氧化作用可以導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)及膜蛋白及某些酶的鉸鏈和聚合，導(dǎo)致膜的基本特性等發(fā)生改變。過量的氧自由基在細(xì)胞核內(nèi)還可引起DNA結(jié)構(gòu)的改變，從而影響基因編碼的重新修復(fù)，導(dǎo)致染色體畸變和細(xì)胞損傷，進(jìn)一步增加細(xì)胞凋亡而加重視網(wǎng)膜損傷[8]。增強(qiáng)抗氧化酶系統(tǒng)活性、減少氧自由基含量，可減輕炎癥性反應(yīng)、降低組織缺血再灌注損傷程度。SOD為機(jī)體清除超氧陰離子自由基的重要酶之一[9]，能降低自由基對(duì)生物體的損害程度，還能促進(jìn)組織細(xì)胞的修復(fù)，增強(qiáng)機(jī)體免受氧自由基損害的能力。MDA為脂類過氧化反應(yīng)的一種最終產(chǎn)物，其含量可作為衡量脂質(zhì)過氧化速率和強(qiáng)度的指標(biāo)，可間接評(píng)估機(jī)體受氧自由基損害的嚴(yán)重程度，是脂類過氧化反應(yīng)的標(biāo)志[10]。因此SOD和MDA可反映視網(wǎng)膜抗自由基氧化能力及脂質(zhì)過氧化的過程。

rh-bFGF是一種重要的神經(jīng)營養(yǎng)因子，結(jié)合相應(yīng)受體后可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，促進(jìn)毛細(xì)血管的增生，形成膠原纖維；可使血管細(xì)胞快速分裂增殖，進(jìn)而改善組織局部的微循環(huán)和組織的營養(yǎng)代謝狀況[11]。本研究模型組早期SOD活性及MDA含量即出現(xiàn)異常，再灌注后1 h視網(wǎng)膜組織SOD含量輕度降低，在隨后的再灌注過程中SOD活性升高，再灌注后6 h達(dá)到高峰，再灌注6 h至72 h時(shí)段，SOD活性逐漸降低；模型組再灌注后1 h視網(wǎng)膜組織MDA含量明顯升高，在隨后的再灌注過程中MDA含量則逐步降低。rh-bFGF組除再灌注后1 h視網(wǎng)膜組織SOD活性輕度升高外，其余各個(gè)時(shí)間點(diǎn)SOD活性及MDA含量變化趨勢(shì)與模型組大致相同，且各時(shí)點(diǎn)SOD活性均明顯高于模型組，MDA含量明顯低于RIRI組。本研究結(jié)果顯示，rh-bFGF組視網(wǎng)膜組織中SOD活性顯著升高，MDA顯著降低含量，rh-bFGF能顯著提高超氧化物歧化酶的活性，降低脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，表明rh-bFGF可通過抗氧化作用減輕視網(wǎng)膜損傷。本研究為rh-bFGF用于臨床治療RIRI疾病提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Wang XD, Kashii S, Zhao L, et al. Vitam in B6 protects primate retinal neurons from ischemic injury[J]. Bra in Res, 2002,940(1-2):36-43.

[2] 楊丹,余德立,余資江.視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的機(jī)制及藥物治療進(jìn)展[J].局解手術(shù)學(xué)雜志,2012,21(5):561-563.

[3] 陳放,徐珊,呂偉紅,等.糖尿病大鼠視網(wǎng)膜氧化應(yīng)激損傷及葛根素的干預(yù)作用[J].眼科新進(jìn)展,2012,32(1):15-19.

[4] 曾環(huán)想,張宏波,黃凱,等.堿性成纖維細(xì)胞生長因子的藥學(xué)研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2010,19(11):949-952.

[5] Foulds WS, Johnson NF. Rabbit electroretinogram during recovery from induced ischaemia[J]. Trans Ophthalmol Soc U K, 1974,94(2):383-393.

[6] 劉朋朋,張琦.外源性H2S預(yù)處理對(duì)大鼠RIRI細(xì)胞凋亡的影響[J].國際眼科雜志,2012,12(1):33-35.

[7] 成月英,苑磊,李曉東,等.銀杏復(fù)方湯劑對(duì)家兔腎臟缺血再灌注損傷模型腎組織的保護(hù)作用及機(jī)制[J].山東醫(yī)藥,2014,54(33):30-31.

[8] 宋慶磊,霍鳴.評(píng)價(jià)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷指標(biāo)的研究進(jìn)展[J].國際眼科雜志,2014,34(9):1293-1296.

[9] 范玲玲,侯明星,都義日,等.烏司他丁對(duì)腸缺血-再灌注損傷大鼠血清SOD活性及MDA水平的影響[J].山東醫(yī)藥,2014,514(10):39-40.

[10] 叢明,羅俊生,郭聞師,等.原花青素對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠腦組織含水量、MDA含量、SOD活性的影響及意義[J].山東醫(yī)藥,2011,51(30)：22-23.

[11] 劉索新,鞠學(xué)紅.神經(jīng)營養(yǎng)因子對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的影響[J].解剖科學(xué)進(jìn)展,2013,19(5):454-457.

(收稿日期：2015-10-10)

中圖分類號(hào)：R774.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-266X(2016)04-0034-02

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.04.011

通信作者：葛嫣然(E-mail： xinyigeyanran@163.com)

基金項(xiàng)目：唐山市科技計(jì)劃項(xiàng)目(12140209A-45)。