海蘭褐蛋雞感染雞傷寒沙門菌的診斷*

司振書，殷國政，路建彪，李玉保

（聊城大學農學院，山東 聊城 252000）

海蘭褐蛋雞感染雞傷寒沙門菌的診斷*

司振書，殷國政，路建彪，李玉保

（聊城大學農學院，山東 聊城 252000）

某蛋雞養殖場90日齡海蘭褐蛋雞疑似沙門菌感染，為確定病原，對該雞群隨機采血，通過平板凝集試驗進行雞白痢-雞傷寒沙門菌的血清學診斷，同時，無菌采取病雞肝臟進行了細菌分離培養、生化鑒定及藥敏試驗。結果，血清陽性率達54.5%，分離菌在麥康凱瓊脂上形成無色、透明、有光澤的圓形菌落，能發酵甘露醇、甘露糖、蕈糖、果糖、麥芽糖，不能發酵乳糖、棉子糖、蔗糖，鳥氨酸脫羧試驗陰性，符合雞傷寒沙門菌的生化特性。分離菌對頭孢吡肟、頭孢噻肟、氟苯尼考及丁胺卡那敏感，而對環丙沙星、氧氟沙星及強力霉素等耐藥。表明該雞群受到了雞傷寒沙門菌的感染，采取了綜合防治措施，病情得到有效控制。

海蘭褐；蛋雞；雞傷寒沙門菌；分離鑒定

雞傷寒沙門菌(Salmonella gallinarum)又稱雞沙門菌，為腸桿菌科沙門菌屬D血清群的成員，雞和火雞都可感染，引起產蛋前各種日齡雞的敗血性傷寒癥，也可引發成年母雞的卵巢炎[1]。禽傷寒發生于各種日齡的雞，但多發于生長期，特別是3月齡到產蛋期的母雞，雛雞如果不是經卵感染，很少發病[2]。病原菌在病雞糞便和分泌物中大量存在，主要經消化道或眼結膜感染。2016年2月，陽谷縣某養雞場養殖海蘭褐蛋雞9500羽，90日齡出現消瘦，精神萎頓、雞冠蒼白等癥狀，病雞排黃綠色或灰白色稀糞。發病嚴重的陸續衰竭死亡，死亡率達7.8%。剖檢主要病變為：肝臟腫大，質脆，呈青銅色，有大量彌漫性出血點，有的肝臟破裂，剖開從腹腔流出大量血色腹水，脾臟淤血性腫大。對該雞群進行了血清學和病原學診斷，經鑒定分離到1株雞傷寒沙門菌，并對該菌進行了藥敏試驗，采取了對發病雞隔離、淘汰、敏感藥物治療、消毒、加強飼養管理等綜合措施，發病情況逐漸好轉，至150日齡雞群產蛋率達50%。

1 材料與方法

1.1 材料與設備 普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、伊紅美藍瓊脂平板培養基由聊城大學預防獸醫實驗室制備。雞白痢-雞傷寒多價染色平板凝集試驗抗原 (批號2014003)，雞白痢-雞傷寒多價染色平板凝集試驗陽性血清(批號2014001)，購于北京中海生物科技有限公司；各種細菌微量生化管及藥敏紙片，購于杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2 病料的采取 隨機選取22只雞，分別翅靜脈采血1～1.5ml，2000prm離心10min，析出血清，用于血清學診斷。無菌采取發病雞肝臟進行細菌的分離。

1.3 凝集試驗 將雞白痢-雞傷寒多價染色平板凝集試驗抗原搖勻，用移液器吸取抗原30μl于潔凈的載玻片，吸取待檢血清30μl滴于抗原液上，不斷傾斜搖動玻片，使抗原與血清充分混合，3min內觀察結果，同時做陰性和陽性血清對照。如出現較大顆粒凝集塊，液體透明為陽性，若不出現凝集塊，則為陰性。

1.4 細菌的分離培養 無菌取病雞肝臟劃線接種于麥康凱瓊脂，37℃恒溫培養24h，觀察結果，挑取單個菌落用麥康凱瓊脂進行純培養。將純化的單個菌落分別接種于普通瓊脂平板及伊紅美藍瓊脂平板，37℃培養24h，觀察生長情況。

1.5 細菌的形態觀察 將分離到的細菌純培養物進行革蘭氏染色，鏡檢。

1.6 細菌的鑒定 將分離純化的細菌分別接種于乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇、賴氨酸、鳥氨酸、枸櫞酸鹽、棉子糖等適宜的生化鑒定管，置37℃恒溫箱培養，按使用說明書觀察判定結果。

1.7 藥敏試驗 挑取分離純化的細菌菌落，用滅菌生理鹽水稀釋混勻，校正濃度為0.5麥氏標準，用無菌棉棒蘸取少量菌液，均勻涂抹于營養瓊脂表面，然后用無菌鑷子取不同藥敏紙片緊貼其上，各紙片應均勻分散開，置37℃恒溫箱培養18～24h，觀察并測量抑菌圈直徑，判斷標準按2010版CLSI M100-S20執行。選取敏感藥物進行治療。

2 結果

2.1 凝集試驗檢測結果 經檢測，22份血清有12份為陽性，10份為陰性，陽性率達54.5%。

2.2 細菌的分離培養結果 分離菌在麥康凱瓊脂平板上，形成光滑、濕潤、隆起、圓形的無色透明菌落；在普通瓊脂上形成光滑、濕潤、灰白色、透明的菌落，多數菌落呈圓形，邊緣整齊；在伊紅美藍瓊脂上呈表面光滑、圓形、微凸、邊緣整齊、淡藍色的小菌落。

2.3 細菌形態染色特點 分離菌呈桿形，革蘭氏染色陰性，兩端鈍圓，多單個存在。

2.4 分離菌的生化試驗結果 分離菌的生化鑒定結果為：蕈糖+，蔗糖-，賴氨酸脫羧酶+，乳糖-，尿素酶-，靛基質試驗-，七葉苷-，丙二酸鹽-，鳥氨酸脫羧酶-，山梨醇+，OF+，水楊素-，枸櫞酸鹽-，肌醇-，精氨酸-，棉子糖-，β半乳糖+，甘露醇+，側金盞花醇-，赤蘚醇-，甘露糖+、麥芽糖+，果糖+，衛矛醇-。

2.5 藥敏試驗結果 分離到的雞傷寒沙門菌的敏感藥及抑菌圈直徑分別為：頭孢吡肟31mm，頭孢噻肟28mm，氟苯尼考26mm，丁胺卡那25mm，而對環丙沙星、妥布霉素、強力霉素、阿奇霉素、恩諾沙星等耐藥。

3 討論

李鳳玲等[3]對南京規?；半u場進行了雞白痢、雞傷寒的血清學調查，海蘭蛋雞的陽性率為12.6%，而該雞群雞白痢、雞傷寒血清陽性率高達54.5%，是前者的4.33倍，說明該雞群帶菌、感染較為嚴重。

雞傷寒沙門菌與雞白痢沙門菌在生化特性上有些差異，可通過鳥氨酸脫羧試驗進行鑒別，前者不能脫羧，而后者相反[4]。另外，雞傷寒沙門菌能發酵麥芽糖，而雞白痢沙門菌則不能[1]。本研究分離到的菌株鳥氨酸脫羧酶試驗陰性，能發酵麥芽糖，這點與武志強[5]報道的廣東分離株一致，但也有不同，主要是本分離菌不能發酵衛矛醇，而后者衛矛醇陽性。劉素英等[6]從陜西分離鑒定的13株雞傷寒沙門菌均不能發酵衛矛醇，與本分離菌相同。說明雞傷寒沙門菌不同地域、不同來源、不同年代的菌株對衛矛醇的反應可能不一致。綜合分離菌的形態染色、培養特性及生化特點判斷，該菌為雞傷寒沙門菌。

分離到的雞傷寒沙門菌，對氟苯尼考、頭孢吡肟、頭孢噻肟、丁胺卡那等敏感，對環丙沙星、妥布霉素、強力霉素、阿奇霉素、恩諾沙星等耐藥，獸醫臨床應重視該菌的感染及流行情況，合理使用抗菌藥物。吳白等對15株禽源沙門菌進行了藥敏試驗，分離株來源雞場長期使用喹諾酮類和氨基糖苷類藥物，結果表明分離株對喹諾酮類和氨基糖苷類等藥物耐藥率較高，而對沒用過的頭孢曲松鈉、丁胺卡那霉素等耐藥率則很低或均敏感，說明耐藥菌株的出現與藥物的使用有一定的相關性[7]。

立即對發病雞進行隔離治療，對發病嚴重的雞只淘汰、深埋。對雞舍地面、用具進行全面徹底消毒，及時清理糞便并發酵處理。根據藥敏試驗結果，頭孢噻肟、頭孢吡肟在體外敏感性強，但考慮到沙門菌對一些頭孢類藥物在體外與體內反應可能不一致，所以選用氟苯尼考粉劑拌料進行治療，5d后，發病情況逐漸好轉，有效控制了雞只的死亡。

[1]中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所組編.獸醫微生物學 [M].第2版.北京：中國農業出版社，2013： 159-166.

[2]李書光,王玉茂,管宇,等.一株高致病性雞傷寒沙門菌的分離及鑒定[J].中國家禽,2013,35(16):47-49.

[3]李鳳玲，呂宗德.南京市規?；半u場雞白痢血清流行病學調查 [J].畜牧與獸醫,2015,47(11):107-108.

[4]辛朝安，主編.禽病學[M].第2版.北京：中國農業出版社,2003:148-153.

[5]武志強.粵北地區雞沙門氏菌分離株的生化反應特性[J].中國預防獸醫學報,2009,31(5):406-408.

[6]劉素英，王晶鈺，董睿，等.雞傷寒沙門菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].動物醫學進展,2011,32(9):37-41.

[7]吳白,楊林,吳婷婷,等.15株禽源沙門菌的分離鑒定與耐藥性試驗[J].中國獸醫雜志,2014,50(6):27-29.

S858.31

B

1673-1085（2016）09-0007-03

2016-08-09

山東省高等學校青年骨干教師國內訪問學者項目；山東省農業良種工程重點課題(25114426)；聊城大學博士啟動基金(318051310)。

司振書（1971-）女，副教授，博士，研究方向為預防獸醫。E-mail:dckszs@163.com。