馬鈴薯莖尖脫毒技術簡介

吳廣成（梅河口市園藝特產工作站）

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馬鈴薯莖尖脫毒技術簡介

吳廣成
（梅河口市園藝特產工作站）

10.16627/j.cnki.cn22-1215/s.2016.03.010

1　脫毒材料的篩選

所選植株必須是表現典型的本品種特性的植株，包括株型﹑葉型﹑花色等植物學性狀及成熟期等農藝性狀；植株生長健壯，無明顯的病毒性﹑真菌性﹑細菌性病害癥狀；單株產量和大薯率高；適時早收。

2　脫毒材料的表面消毒

塊莖通過自然休眠或用1％硫脲+5毫克/升赤霉素浸種5分鐘，以打破休眠。休眠后的塊莖用濕潤砂覆埋，待薯塊頂芽長到3～4厘米時，取芽作為外植體用于莖尖脫毒。切取2～3厘米的壯芽，去掉所有葉片，用自來水充分洗凈，并連續沖洗5～10分鐘。然后用0.1％的升汞溶液表面滅菌10分鐘，用無菌水徹底沖洗3～5次，置于封口的無菌瓶中備用（注意：無菌條件下操作）。一次消毒的芽不能太多，以免消毒后材料放置時間太長，莖尖發生褐變，影響成活率；或將通過休眠的塊莖，用自來水洗凈后，用75％的酒精浸泡3～5秒鐘，經自來水沖洗后用0.1％的升汞溶液滅菌10分鐘，在無菌條件下沖洗5次，最后將塊莖切成2厘米見方的小方塊，每塊帶一個芽眼，培養于三角瓶內（采用固體培養基）使之產生無菌苗，用于莖尖脫毒。

3　脫毒材料的熱處理

于10倍解剖鏡下，用尖頭手術刀，切取1～1.5毫米左右的莖尖，將取下的莖尖接種在不含任何激素的馬鈴薯快繁培養基上，于25℃每天光照16小時的培養室培養。待莖尖長至1厘米時轉入光照培養箱培養，以每天16小時光照，36℃的高溫處理6～8周。

4　莖尖剝離

在超凈工作臺上，在40倍解剖鏡下，用解剖刀小心除去莖尖周圍的小葉片和葉原基，暴露出頂端圓滑的生長點，用解剖針細心切取所需的莖尖分生組織，最后只保留帶一個葉原基的生長點，大小為0.1～0.2毫米。切取的莖尖分生組織隨即接種到馬鈴薯莖尖培養基上，以切面接觸瓊脂，封嚴瓶口置于培養室進行離體培養。容器以15厘米×2厘米的試管為宜，每管盛10毫升培養基接種一個莖尖，同時給試管壁編號并做工作日記，注明接種的品種﹑試管數﹑日期等。

5　脫毒苗病毒檢測

經過莖尖剝離試管培養后產生的新植株，只有經檢測無任何病毒的脫毒苗才能保留，進一步在試管內大量擴繁，獲得無毒試管苗群體，應用于微型薯生產。