奶牛I型和Ⅱ型酮病的調查研究

牛　聰，姚　遠，高　陽，錢偉東，張洪友，夏　成，徐　闖（黑龍江八一農墾大學動物科技學院，黑龍江大慶163319）

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奶牛I型和Ⅱ型酮病的調查研究

牛聰，姚遠，高陽，錢偉東，張洪友，夏成，徐闖
（黑龍江八一農墾大學動物科技學院，黑龍江大慶163319）

酮病是由于動物體內碳水化合物以及脂肪代謝紊亂而引發能量負平衡的一種代謝性疾病，該病通常以精神沉郁，食欲減退，消化機能紊亂，體重減輕，產奶量下降，個別牛出現神經癥狀，奶牛呼出氣體以及乳汁帶有丙酮氣味等為主要臨床癥狀。以低血糖、高血酮和高游離脂肪酸為主要血液生化特點[1]。以往將奶牛酮病根據是否具有典型的酮病臨床特征將該病分為臨床和亞臨床型酮病[2]。然而，Holtenius[3]等人根據發病時間及體況的特殊型，同時結合血糖含量，將奶牛酮病分成I型酮病與Ⅱ型酮病。Ⅱ型酮病奶牛的發病特征為高酮體、高胰島素、高游離脂肪酸（Non-esterified fatty acids，NEFA）和血糖（Glccose，Glc）含量較高或者正常[4]。Ⅱ型酮病的發病原因可能與飼喂過度導致血糖和胰島素的水平升高有關[5]。

目前，盡管國內外已有Ⅱ型酮病的研究報道，但因缺乏有效的、實用的檢測和診斷方法，以致Ⅱ型酮病的流行病學狀況仍不清楚。因此，在集約化奶牛場開展Ⅱ型酮病的流行病學調查研

1　材料與方法

1.1試驗動物及分組在黑龍江省兩不同區域的集約化牛場中，隨機選取分娩后0～28 d的泌乳奶牛92頭作為試驗動物，其中39頭奶牛來自牛場A，53頭奶牛來自牛場B。根據相關血液生化指標，將其血漿BHBA＞1.2 mmol/L，Glc＜2.5 mmol/L，且NEFA＞0.5 mmol/L，被認為I型酮病（I）；血漿BHBA＞1.2 mmol/L，Glc＞2.5 mmol/L，且NEFA＞0.5 mmol/L，被認為Ⅱ型酮病（II）；而血漿BHBA＜0.6 mmol/L，Glc＞3.75 mmol/L，且NEFA＜0.5 mmol/L，被作為健康對照奶牛（C）。

1.2樣品采集清晨空腹狀態下采集試驗奶牛尾靜脈血液10 mL和乳汁5 mL。血液樣品經肝素抗凝后，一滴血用于怡成血酮儀檢測酮體水平，其余血液樣品室溫條件下，3 000 r/min離心10 min，吸取血漿分裝于EP管內，-80℃保存待測。并記錄試驗奶牛的體況分數、年齡、胎次和泌乳量等臨床資料。酮粉法檢測乳汁，記錄酮體陽性情況。

1.3檢測項目與方法利用血酮儀（購自北京怡成生物電子技術有限公司），對現場采集的血液樣品進行檢測。

采用氧化酶法檢測Glc，酶速率法檢測BHBA，酶比色法測定檢測NEFA，以上所有檢測指標均使用相應的商品化試劑盒進行檢測（購自北京九強公司）。

酮粉法[6]：檢測乳汁內酮體含量，觀察其顏色反應，酮粉變成紅紫色即為酮病陽性。

1.4統計分析應用SPSS軟件（SPSS公司，芝加哥，IL，美國），對奶牛酮病的發病率，3組試驗牛的年齡、胎次、體況、泌乳天數、泌乳量以及血液中BHBA、Glc和NEFA含量因素方差分析（Oneway ANOVA），當P＜0.05時判定為差異顯著，當P＜0.01時判定為差異極顯著，。

2　結果

2.1酮病的發生狀況由表1可見，兩個牛場Ⅰ型和Ⅱ型酮病的發病率接近。其中A牛場酮病總發病率為17.95%，Ⅰ型酮病為10.26%，Ⅱ型酮病為7.69%；而B牛場的酮病總發病率為64.15%，Ⅰ型酮病為28.30%，Ⅱ型酮病為35.84%，B牛場的酮病發病率極顯著（P＜0.01），高于A牛場。

表1　奶牛酮病的發病率

2.2酮病奶牛的臨床資料狀況由表2可見，A牛場：Ⅰ型、Ⅱ型酮病奶牛年齡、胎次與C組（健康對照組）相比，差異不顯著；Ⅱ型酮病體況極顯著高于Ⅰ型酮病與健康組（P＜0.01），Ⅰ型酮病奶牛體況不顯著低于健康組（P＞0.05）；Ⅰ型酮病的泌乳量極顯著低于健康組（P＜0.01），Ⅱ型酮病的泌乳量顯著低于健康組（P＜0.05），Ⅰ型酮病與Ⅱ型酮病之間無顯著性差異。B牛場：Ⅰ型、Ⅱ型酮病奶牛與健康組相比，兩組奶牛在年齡、胎次上均無顯著性差異；Ⅱ型酮病奶牛體況極顯著高于Ⅰ型酮病組與健康組（P＜0.01）；Ⅰ型酮病奶牛與Ⅱ型酮病奶牛的泌乳量顯著低于健康組（P＜0.05）。

表2　試驗奶牛的臨床資料

2.3酮病奶牛的能量代謝狀況由表3可見，血漿BHBA的結果顯示，A牛場與B牛場結果相近，均呈現Ⅰ型酮病的BHBA濃度極顯著（P＜0.01）高于Ⅱ型酮病，Ⅰ型組與Ⅱ型組極顯著高于C組。血漿Glc的結果顯示，A牛場與B牛場相似，均呈現Ⅰ型酮病血糖含量顯著低于Ⅱ型酮病組與健康組（P＜0.01），Ⅱ型酮病奶牛的血糖含量與健康奶牛相比無顯著性差異（P＞0.05）。血漿NEFA的結果顯示，A場與B場的結果相近，均呈現Ⅰ型酮病的NEFA含量顯著高于C組，Ⅱ型酮病的NEFA含量極顯著高于C組（P＜0.01），Ⅰ型組與Ⅱ型組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表3　試驗奶牛能量代謝的狀況

3　討論

3.1奶牛Ⅱ型酮病的發病情況近年的研究顯示，酮病在我國的發病率為15%～30%[7]，而在國外酮病最高可達70%。然而，對于Ⅱ型酮病的發病狀況國內鮮有報道。本研究對于兩個高產的集約化牛場酮病發病率的調查研究發現，A場酮病發病率為17.95%，其中Ⅰ型酮病發病率10.26%，Ⅱ型酮病發病率為7.69%；而B牛場酮病率發病率則高達64.15%，其中Ⅰ型酮病為28.30%，Ⅱ型酮病為35.84%。上述結果顯示，兩個牛場Ⅱ型酮病的發病率高于Ⅰ型酮病。而當奶牛發生Ⅱ型酮病時，無明顯的臨床癥狀，因此對不同類型酮病奶牛采取不同的監測和防治方法，能夠更加有效的防治奶牛酮病。

3.2奶牛Ⅱ型酮病的發病特點從酮病奶牛的年齡、胎次的調查結果發現，酮病易發于1～4胎奶牛，患有Ⅰ型與Ⅱ型酮病的奶牛年齡和胎次無顯著性差異。奶牛體況是能夠直觀、迅速評價奶牛體內脂肪含量的宏觀目標，體況能夠間接的衡量奶牛機體的營養狀態。以5分制作為奶牛體況的評分標準，最先由美國Vermont大學的Wildman Jones E E及Wiseonsin大學的Rodenburg J共同提出，該項評分標準廣泛應用于北美一些國家。奶牛過肥過瘦對機體均能產生不利的影響。研究證明，奶牛較為理想的體況為2.4～4，然而，奶牛過度肥胖會使泌乳量明顯降低，體況在4以上的奶牛的泌乳量明顯低于體況為3.1～3.9的奶牛，奶牛過于消瘦同樣也不利于圍產期泌乳能量的供應[8]。本試驗調查研究發現，患Ⅱ型酮病的奶牛體況較好，Ⅱ型酮病奶牛的體況明顯高于Ⅰ型酮病與健康組，Ⅱ型酮病易發于體況較好的奶牛。

3.3奶牛Ⅱ型酮病的能量代謝狀況奶牛分娩后，由于采食高峰晚于泌乳高峰，因此，泌乳早期的奶牛最易發生能量負平衡狀態[9]。本研究對試驗奶牛血漿BHBA、Glc、NEFA的研究發現，奶牛發生酮病后，機體的BHBA含量顯著增加。酮病奶牛存在的高血糖現象，與低血糖酮病的發病機理不同，認為Ⅱ型酮病奶牛血糖維持較高濃度可能與機體存在胰島素抵抗有關[10]。熊桂林[11]在對圍產期奶牛血清的研究指出，機體脂解作用加強，能夠引起機體氧化與抗氧化系統失衡，機體呈現氧化應激狀態。Azevedo-Martins A K的研究報道證實，機體NEFA增加，體內抗氧化酶活性降低，機體處于氧化應激狀態[12]。Schonfeld P的研究發現，NEFA的β-氧化不僅能夠產生ATP，還能生成大量的ROS和RNS，促進機體進一步氧化[13]。本試驗對酮病奶牛血漿中NEFA濃度高低的研究發現，Ⅱ型酮病奶牛血漿中NEFA顯著高于Ⅰ型酮病與健康奶牛。從兩個牛場奶牛的泌乳天數來看，Ⅱ型酮病發生在泌乳后6～10 d，早于Ⅰ型酮病的泌乳后17～18 d。

本試驗調查了奶牛發生酮病后奶牛泌乳量的變化，結果發現，兩個牛場Ⅰ型和Ⅱ型酮病奶牛的泌乳量均下降。因此，及時發現奶牛酮病，盡早采取有效的防治措施，將會更大的降低牛場的經濟損失。

綜上所述，Ⅱ型酮病的發病率較高，與Ⅰ型酮病的發病率相似。因此，現場應重視Ⅰ型和Ⅱ型酮病的檢測和鑒別診斷，為了更好的防治奶牛酮病提供科學的依據。Ⅰ型酮病奶牛體況較差，呈現低血糖癥；Ⅱ型酮病奶牛體況較好，血糖維持正常或較高水平，二者能量代謝調節存在差異，仍需進一步探究。

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[10] Holtenius P，Holtenius K.New aspects of ketone bodies in energy metabolism of dairy cows：a review[J].Journal of Veterinary Medicine Series A，1996，43（1-10）：579-587.

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[12] Azevedo-Martins A K，Cuir R . Fatty acids decrease catalase activity in human leukaemia cell lines[J] . Cell Biochemistry and Function，2008，26（1）：87-94.

[13] Schonfeld P，Wojtczak L.Fatty acids as modulators of the cellular production of reactive oxygen species[J].Free Radical Biology and Medicine，2008，45（3）：231-241.

通訊作者：張洪友，E-mail：zhy478@163.com究，對豐富和發展奶牛酮病理論和知識，提供相應的預防與治療措施具有重要的理論和現實意義。

作者簡介：牛聰（1989-），男，碩士生，研究方向為臨床獸醫學，E-mail：1247509823@qq.com

基金項目：國家自然科學基金（31072181）；國家科技支撐計劃課題（2012BAD12B03-2）

收稿日期：2014-06-01

中圖分類號：S858.23

文獻標志碼：B

文章編號：0529- 6005（2016）01- 0057- 03