綿羊腸毒血癥的診斷與防治

2016-03-31 07:43:33張西云范玉霞李生慶胡國元李志寧李秀萍王亭亭劉懷新青海省畜牧獸醫科學院青海西寧810016

中國獸醫雜志 2016年1期

張西云，范玉霞，李生慶，胡國元，李志寧，李秀萍，王亭亭，黃　榮，劉懷新（青海省畜牧獸醫科學院，青海西寧810016）

綿羊腸毒血癥的診斷與防治

張西云，范玉霞，李生慶，胡國元，李志寧，李秀萍，王亭亭，黃榮，劉懷新
（青海省畜牧獸醫科學院，青海西寧810016）

青海省祁連縣默勒鎮外日溝鄉從2006年7月轉入夏季草場開始發生綿羊死亡，死亡的綿羊多為當年的羔羊和2歲以內的羊，從夏季草場轉入秋季草場放牧時（9月份）綿羊死亡數進入高峰期。從2007年開始，該鎮另外兩個村多隆、老日當村也相繼發生綿羊大量死亡，至今累計死亡3 358只，據當地牧民介紹每天每家至少死亡5～7只，有的牧戶家已死亡80余只，給他們帶來了巨大的經濟損失。發病羊群均已進行了藥物驅蟲工作，并正常接種過羊四聯疫苗（猝疽、羔羊痢疾、快疫、腸毒血癥）。

2008年8月，我們在發病地區采集了4份病死羊臟器及腸內容物，進行了病原診斷和菌苗研制，報告如下。

1　病原診斷

1.1臨床癥狀病程約1～3 d，多數病羊晚上入圈時看不出癥狀，早晨放牧時發現死于圈中，主要癥狀為食欲廢絕，跌倒后四肢劃動呈游泳狀，頭向一側仰，抽搐，很快死亡。

1.2剖檢變化死亡羊只除腎臟軟化外，心、肝、脾、肺等臟器均未見到明顯病理變化。少數羊只心包液增量呈淡黃色，心臟擴張，心肌松軟，肺臟充血、水腫，腎臟實質柔軟松馳，肝臟腫脹、質脆，淋巴結切面濕潤，小腸黏膜充血，死羊腹部膨脹。

1.3細菌分離和鑒定

1.3.1細菌分離取腸內容物，分別接種于厭氣肝湯和鮮血瓊脂平板，37℃培養24 h，涂片見到產氣莢膜梭菌，然后接種該培養物于鮮血瓊脂平板上，挑取溶血菌落，得到純培養物。

1.3.2細菌的特性：

1.3.2.1生長特性本菌在厭氣肝湯中3～4 h即開始產氣，24 h生長停止，并開始沉降，在鮮血瓊脂平板上厭氣培養，24 h開始生長，48 h可見圓形略隆起、灰白色半透明的菌落，菌落周圍有溶血環。

1.3.2.2毒素測定分自4只羊的四株菌對小鼠的最小致死量分別為400、400、1 600 MLD/mL及400 MLD/mL。

1.3.2.3細菌的型別分離到的4株細菌的毒素都能被D型產氣莢膜梭菌抗血清中和。

2　腸毒血癥菌苗的研制

2.1制苗用培養基牛肉胃酶消化液培養基：牛肉胃酶消化液10 000 mL（常規方法制造），蛋白胨50 g，示胨50 g，Na2HPO4·12H2O 100 g，糊精100 g，pH值8.5，10磅40分。

2.2菌苗制造方法

2.2.1菌液制備培養基經高壓后，涼至38℃左右時立即接種，種子量為1%，放37℃溫室培養24 h。

2.2.2毒價測定逐瓶吸取2 mL菌液，與等量的含0.25%胰酶（效價1∶250）的1%碳酸鈉液混合，置37℃作用40～60 min，4 000 r/min離心10 min、稀釋、測毒。

2.2.3菌苗制造在純檢合格的菌液中加1%甲醛溶液，置于37℃殺菌、脫毒，21 d，過濾后加入無菌的20%氫氧化鋁膠溶液，使菌苗中氫氧化鋁含量達7 mg/mL，分裝、檢驗、備用。

2.3菌苗效力：

2.3.1家兔效力檢驗0901、1001、1002及1101四批菌苗分別用體重1.5～2 kg的健康家兔，隨機分成4組（1002批2組），免疫組皮下注苗0.1、0.5、1 mL，每組4只，對照組2只，均為皮下注射。飼養至21 d，靜脈攻毒。

2.3.2綿羊效力檢驗0901、1002、1101及1201四批菌苗分別用體重30～40 kg的健康綿羊，隨機分為11組，每批菌苗按0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL分別免疫3組（1201批2組），每組4只，均為肌肉注射，免疫18 d后連同對照2只靜脈攻毒，觀察記錄死亡情況。

3　結果

3.1診斷根據流行病學、臨床癥狀，剖檢變化，細菌分離、毒素測定及中和試驗診斷為D型產氣莢膜梭菌引起的腸毒血癥。

3.2菌株產毒情況經過4年試驗，用牛肉消化培養基，其產毒素的能力最高可達4萬MLD/mL，少數為5 000 MLD/mL（制苗時廢棄），多數為2～1 萬MLD/mL。

表1　2009- 2012年菌株產毒情況

表2　2009- 2012年各批菌苗毒價情況

3.3效檢結果

3.3.1家兔效檢結果3批菌苗以0.1 mL免疫，3批均3/4保護，攻毒量1～2個家兔MLD，效果良好。4批菌苗以0.5 mL免疫，3批4/4保護，1批3/4保護，攻毒量1～3個家兔MLD，效果良好。3批菌苗以1 mL免疫，2批3/4保護，1批2/4保護，攻毒量1～5個家兔MLD，效果良好。

3.3.2綿羊效檢結果4批菌苗以0.5 mL免疫，2 批4/4保護，2批3/4保護，而且攻毒量均較大，多數攻6～8個綿羊MLD，效果良好。4批菌苗以1.0 mL免疫，3批4/4保護，1批3/4保護，攻毒量更大，多數攻8～10個綿羊MLD，效果更好。3批菌苗以2.0 mL免疫，全部4/4保護，攻毒量更大，多數攻12～15個綿羊MLD，效果很好。