蛋雞禽流感免疫程序的制定及推廣應用

楊　峰，方　英，徐春志，陳　紅，袁翠霞，彭　屹，白　璧（貴州省貴陽市動物疫病預防控制中心，貴州貴陽550081）

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蛋雞禽流感免疫程序的制定及推廣應用

楊峰，方英，徐春志，陳紅，袁翠霞，彭屹，白璧
（貴州省貴陽市動物疫病預防控制中心，貴州貴陽550081）

禽流感（Avian influenza，AI）是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒的禽流感病毒（AIV）所引起禽類烈性、傳染性疫病，雞感染AIV后機體高熱，采食和產蛋下降等，1878年意大利首次報道暴發禽流感至今已有120多年的歷史。該病的流行給世界養禽業造成極大危害和經濟損失，高致病性毒株感染時，易感禽發病率、死亡率均可達100%，并能直接感染人類，因此，本病目前已成為危害嚴重的人畜共患病。

為科學有效防控蛋雞群禽流感的發生，提高蛋雞生產性能，本試驗通過采用血清學方法對規模蛋雞養殖場進行了雞群母源抗體與免疫抗體消長規律的測定，從而制定了科學合理的免疫程序，并在蛋雞群中進行了推廣應用比較。

1　材料與方法

1.1樣本選擇貴州省4個規模蛋雞養殖場，按研究需要分別采集不同日齡蛋雞血清樣本共計555份（用于母源抗體消長動態測定140份、免疫抗體消長動態測定175份和免疫程序推廣應用前后比較240份），并隨機采集臨床健康蛋雞泄殖腔棉拭子120份。

1.2試劑禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原、陽性血清、陰性血清，購自青島易邦生物工程有限公司；1%紅細胞懸液，本試驗自行制備；禽流感病毒H5亞型RT-PCR檢測試劑盒，購自哈爾濱維科生物技術開發公司。

1.3母源抗體消長動態測定采用正向間接血凝抑制試驗（HI）對不同日齡（1、6、11、16、21、26、31日齡）雛雞血清樣本140份進行抗體檢測，從而測定蛋雞母源抗體消長動態。抗體效價≥5 log2判為陽性。

1.4免疫抗體消長動態測定采用HI對二次免疫后不同飼養階段（二次免疫后第27、58、86、123、141、170天）的175份蛋雞群血清樣本進行抗體檢測，從而測定免疫抗體消長動態。抗體效價≥5 log2判為陽性，根據農業部規定，群體免疫抗體陽性率達70%判為免疫合格。

1.5免疫程序制定根據母源抗體及免疫抗體消長動態測定結果，制定蛋雞禽流感科學免疫程序。

1.6免疫程序推廣應用效果比較將制定出的禽流感免疫程序于A、B、C、D 4個規模蛋雞養殖場推廣應用，采集推廣前后雞群血清樣本每場各30份，計240份，進行免疫抗體水平監測，從而比較免疫程序推廣前后疫苗免疫保護效果。并以RT-PCR方法對推廣前后雞群中病原核酸進行檢測，比較推廣前后雞群隱性感染狀況。

2　結果

2.1母源抗體消長動態測定結果以HI測定不同日齡雛雞血清樣本140份母源抗體效價，結果見表1。

表1　禽流感母源抗體消長動態測定

由表1可知，雛雞群禽流感母源抗體水平在1日齡至6日齡呈現輕微上揚趨勢；從6日齡以后，抗體水平隨著雛雞日齡增加而呈現下降趨勢；至16日齡時禽流感母源抗體幾何平均效價僅為3.4 log2，抗體陽性率降至20%，低于農業部抗體保護水平≥70%要求，至21日齡時相應降為2.1 log2和0 log2。因此，應于雛雞16～20日齡時進行禽流感疫苗首免。

2.2免疫抗體消長動態測定結果以HI測定蛋雞群多次免疫后不同日齡雞175份血清樣本抗體效價，結果見表2。

表2　蛋雞群多次免疫后抗體消長動態

由表2可知，二次免疫后，蛋雞群禽流感免疫抗體呈現逐步下降趨勢。從免疫后第27天至123天，群體免疫合格率達農業部要求；至第141天，免疫抗體逐步失去保護力，降至66.9%。因此，應于二次免疫后第123～141天加強免疫1次。

2.3免疫程序制定根據蛋雞母源抗體與免疫抗體消長動態測定結果，確定出蛋雞禽流感疫苗首免及多次免疫時間，從而制定出較為科學合理的蛋雞禽流感免疫程序，見表3。

表3　蛋雞禽流感免疫程序

2.4免疫程序推廣應用效果比較

2.4.1免疫保護率比較選取貴州省4個規模蛋雞養殖場（A、B、C、D場），將所制定蛋雞禽流感免疫程序于上述場中推廣應用，采集推廣前后雞群血清樣本每場各30份進行免疫抗體監測，從而比較免疫程序推廣前后疫苗免疫保護效果，結果見表4。

表4　推廣前后雞群禽流感免疫保護率監測

由表4可知，將所制定免疫程序推廣應用后，4個場中蛋雞群禽流感免疫保護率均有不同程度提高，總體免疫保護率提高了11個百分點，表明所制定蛋雞禽流感免疫程序可行，且效果較好。2.4.2隱性感染帶毒檢測隨機采集推廣前后4個規模蛋雞養殖場臨床健康雞群泄殖腔棉拭子120份，以H5亞型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒進行禽流感病毒核酸檢測。結果見表5。

表5　推廣前后雞群禽流感病毒隱性感染檢測

由表5可知，將所制定免疫程序推廣應用后，4個場中蛋雞群禽流感病毒隱性感染情況均有不同程度下降，總體病毒感染率下降了8個百分點，表明所制定蛋雞禽流感免疫程序可有效保護雞群感染禽流感病毒。

3　討論

免疫預防是控制禽流感發生的有效手段，首次免疫最佳時間的確定則是做好免疫工作的一個關鍵。雖然母源抗體能在短時間內對雛禽抵御病毒感染產生一定的保護力，但同時又會對疫苗接種的免疫應答進行干擾而降低免疫效果[1]。本試驗通過采用血清學方法對140份不同日齡雛雞血清樣本進行抗體檢測，探尋禽流感母源抗體在蛋雞群中消長動態，發現雛雞母源抗體至21日齡時降為最低保護值，確定了蛋雞禽流感疫苗最佳首免日齡為16～20日齡，這與其他研究報道一致[2]。同時，通過對175份二免后不同生長階段的蛋雞血清樣本進行抗體檢測，發現在二免后第123天群體免疫保護率開始下降，至第141天失去保護力，確定了補免日期，也為制定科學的蛋雞禽流感免疫程序提供了依據[3]。

本試驗制定了蛋雞禽流感免疫程序，并在4個規模蛋雞養殖場推廣應用。發現在推廣前后，4個場的蛋雞群禽流感免疫合格率均有不同程度提升，總體免疫合格率提高了11個百分點，表明所制定的免疫程序較符合蛋雞生產，且效果較好。另外，為檢驗免疫程序推廣對雞群帶毒影響情況，本研究隨機采集了推廣前后雞群泄殖腔棉拭子，以H5亞型禽流感病毒RT-PCR檢測試劑盒對禽流感病毒核酸進行了檢測。結果雞群總體禽流感隱性感染率降低了8個百分點，表明所制定的免疫程序能夠有效防控禽流感病毒隱性感染雞群。

盡管本研究所制定蛋雞禽流感免疫程序推廣應用效果較好，但僅針對于高致病性禽流感疫苗免疫進行了相關試驗。研究表明[4-5]，免疫方式、免疫時間、疫苗干擾等因素通常會影響雞群抗體水平。因此，更為高效、科學地防控蛋雞禽流感感染，在后續試驗中應從不同疫病接種時間、方式對禽流感疫苗的影響著手，逐步建立廣譜性強的蛋雞群疫病免疫程序。

參考文獻：

[1]付麗偉.關于禽流感母源抗體消長規律的初步研究[J].家禽科學，2013（2）：44-45.

[2]韓慶安，井水蘭，王金鳳，等.高致病性禽流感滅活疫苗免疫抗體消長規律研究[J].中國動物保健，2014（1）：29-31.

[3]劉海俠，邢軍，許孝宙，等.江蘇部分蛋雞群新城疫與H5亞型禽流感免疫抗體HI效價的測定[J].畜牧與獸醫，2013，45 （8）：115.

[4]祁君，艾尼阿木提，艾力江，等.不同禽流感疫苗和不同接種方式免疫家禽效果對比試驗[J].畜牧與獸醫，2012，44（12）：104-105.

[5]池建峰.影響禽流感免疫效果的因素分析[J].湖北畜牧獸醫，2012（5）：35-36.

通訊作者：方英，E-mail：fy6565@126.com

作者簡介：楊峰（1980-），男，獸醫師，碩士，從事動物防疫工作，E-mail：506031129@qq.com

收稿日期：2014-05-23

中圖分類號：S831

文獻標志碼：B

文章編號：0529- 6005（2016）01- 0064- 02