乙肝血清學標志物與HBV-DNA含量檢測的臨床意義

丁雪晴, 徐紅珍, 劉俊慧

(江蘇省泰州市第二人民醫院 檢驗科, 江蘇 泰州, 225500)

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乙肝血清學標志物與HBV-DNA含量檢測的臨床意義

丁雪晴, 徐紅珍, 劉俊慧

(江蘇省泰州市第二人民醫院 檢驗科, 江蘇 泰州, 225500)

關鍵詞:乙肝病毒; 乙肝血清學標志物; 酶聯免疫吸附法; 時間分辨熒光免疫分析; HBV-DNA含量

乙肝血清學標志物檢測已從酶聯免疫吸附法定性試驗發展到時間分辨熒光免疫分析定量分析，為臨床判斷患者的病情、傳染性和療效提供重要的依據。本研究采用酶聯免疫吸附法(ELISA)、時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)、熒光定量法PCR(FQ-PCR)分別檢測492例乙肝患者血清學標志物與HBV- DNA含量，探討三者的關系和臨床意義，現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

采集本院感染科2014年5月—2015年4月收治的492例乙肝患者的靜脈血樣本，其中男316例，女176例。于當日分離血清，-70℃保存，并于1周內檢測。

1.2研究方法

1.2.1HBVm檢測方法：采用酶聯免疫吸附法( ELISA)和時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)檢測HBVm，包括乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗體(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗體(HBeAb)、乙肝病毒核心抗體(HBcAb)。TRFIA乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的檢測范圍0.030～150 IU/mL，乙肝病毒e抗原(HBeAg)檢測范圍0.02～120 PEIU/mL。

1.2.2HBV-DNA檢測：HBV-DNA采用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)濃縮提純裂解法。循環參數：37℃5 min，94℃ 1 min，95℃ 5 s，60℃ 30 s，共42個循環。熒光信號收集在反應體系溫度60℃，由儀器軟件自動分析出結果。線性范圍為1×(102～108)copies/mL，小于102copies/mL為陰性。

1.2.3儀器和試劑：上海新波EFFICUTA 全自動時間分辨儀及其配套試劑，上海新波ANYTEST全自動熒光儀。ELISA法診斷試劑盒購自北京萬泰生。Rotor-Gene Q熒光PCR儀；凱杰生物工程(深圳)有限公司 HBV DNAv3核酸擴增檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)及標準品，試劑批號：20141202。

1.3分組方法

分別采用酶聯免疫吸附法(ELISA)和時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)對492例血清進行HBVm的檢測，為表述方便，設定乙肝病毒五項血清學標志物第1～5項的排列順序為[2]: ① 乙肝表面抗原(HBsAg); ② 乙肝表面抗體(抗-HBs); ③ 乙肝e抗原(HBeAg); ④ 乙肝e抗體(抗-HBe); ⑤ 乙肝核心抗體(抗-HBe)。本次檢測共有7種乙肝病毒五項血清學標志物組合模式，分別是①③⑤，①④⑤，②④⑤，①⑤，①②④⑤，①②③⑤，①。依據HVB-DNA載量將患者分為5個級別：小于102copies/mL，102～103copies/mL，104～105copies/mL，106～107copies/mL，108copies/mL。

2結果

ELISA和TRFIA共檢出HBVm的7種不同模式。兩種方法檢測①③⑤，①④⑤，①⑤，②④⑤，①的結果比較無顯著差異(P>0.05)，檢測①②④⑤，①③④⑤的結果比較有顯著差異(P<0.05)。見表1。TRFIA 7種不同的血清HBVm模式HBV-DNA檢測的陽性率具有顯著差異，其中①④⑤，①⑤，②④⑤，①這4種模式與①③⑤比較有顯著差異(P<0.05)，①②④⑤，①③④⑤這2種模式與①③⑤比較無顯著差異。見表2。

對時間分辨熒光免疫分析(TRFIA)檢測HBsAg和HBeAg為反應性的142例患者進行了HBsAg和HBeAg含量與HBV-DNA載量之間的關系分析。隨著HBsAg、HBeAg含量的增高，HBV-DNA載量也增高，說明二者存在一定的相關性。但同數量級HBV-DNA載量HBsAg、HBeAg含量個體差異較大，表現為異常高于或低于相同數量級標本的平均水平。見表3。

與TRFIA法比較, *P<0.05。

與①③⑤模式比較, *P<0.05。

3討論

乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的疾病，血清學標志物乙肝兩對半的檢測為臨床醫師提供了可靠的依據[1]。ELISA法對乙肝兩對半血清標志物定性測定是傳統的方法，其只能提供“陰”、“陽”性的定性結果，并不能給臨床診斷和治療提供更多的信息。TRFIA是一種能定量檢測HBV標志物的檢測方法，它的靈敏度高于ELISA法，且具有較寬的線性范圍[2]。通過對492例血清樣本采用兩種方法對比研究發現，兩種方法檢測①③⑤，①④⑤，①⑤，②④⑤，①時無顯著差異(P>0.05)，檢測①②④⑤，①③④⑤時差異有統計學意義(P<0.05)。TRFIA法高于ELISA法。①②④⑤的模式可能是新的亞型再感染，或病毒發生變異后。表達量低也有可能是①④⑤向②④⑤的轉變過程，①③④⑤模式可能是新的亞型感染病毒發生變異后表達；或者急性HBV感染趨向恢復慢性攜帶者，①③⑤模式向①④⑤模式的轉換過程，ELISA法不能檢出低濃度的HbeAg、HBeAb。ELISA法靈敏度低，存在前滯現象，易受環境、操作等多種因素的影響。TRFIA法能較為準確地反映其血清中HBV抗原抗體的含量。并且能檢出低水平復制的標本，避免漏檢，可以診斷出隱源性肝炎[3-4]。

患者血清中 HBV-DNA的存在是HBV 感染最為直接、靈敏和特異的指標，是判定體內HBV感染、復制及傳染性強弱的金標準。本研究中，患者為①③⑤模式時HBV-DNA的陽性率為80.3%，明顯高于其他組合模式，說明e抗原是乙肝病毒在體內復制的標志，e抗原含量的增高也提示乙肝病毒復制的活躍程度，患者為①③⑤模式時具有較強的傳染性[5-6]。作者發現這一數據較以往的研究報道低，可能是由于患者經抗病毒藥物治療后，體內HBV被抑制，而體內之前產生的HBeAg未被完全降解；亦可能患者體內的HBV-DNA載量已經很低，超出本研究的檢測范圍。①④⑤模式時HBV-DNA的陽性率為55.4%，這與張代春[7]報道的54%相符，HBeAb的出現不能說明無傳染性，病毒復制終止。作者注意到有患者的HBV-DNA的載量較高，說明患者的傳染性還很強。以HBeAg轉換為HBeAb作為判斷病毒復制、有無傳染性的標準不可靠。②④⑤模式時HBV-DNA的陽性率為18.7%，這組模式中HBV-DNA陽性的患者多為慢性乙肝患者、肝硬化、原發性肝癌患者，HBV-DNA的載量多為102～103，說明患者仍有低水平的病毒復制，應引起醫生和患者的重視。①②④⑤和①③④⑤這兩種模式HBV-DNA陽性率分別為70%和80%，雖然這兩種模式只占乙肝的少數，但HBV-DNA陽性率高，且HBV-DNA的載量也較高。可能是病毒發生變異，多種亞型并存。ELISA法因試劑方法的局限性，對這兩種模式檢出率低，需做TRFIA法定量檢測，評價HBV- DNA病毒載量。

探討HBV-DNA載量與HBsAg、HBeAg含量的關系。作者發現隨著HBsAg、HBeAg含量的增高，HBV-DNA載量也增高，說明二者存在一定的相關性。但同數量級HBV-DNA載量HBsAg、HBeAg含量個體差異較大，表現為異常高于或低于相同數量級標本的平均水平，與岳峰等[8]報道相符。作者跟蹤檢測①③⑤和①③④⑤這兩種模式患者各1例，①③⑤患者的HBV-DNA載量從106降到102，HBsAg含量從177 IU/mL降至3.06 IU/mL，HBeAg含量從171 IU/mL降至7.17 IU/mL。①③④⑤患者的HBV-DNA載量從106降到102，HBsAg、HBeAg含量未出現明顯下降。HBV-DNA載量與HBsAg、HBeAg含量之間的關系仍需進一步探討。

參考文獻

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[3]肖清華, 陳華卿, 程進明. α-2b干擾素聯合胸腺肽治療HBeAg陽性慢性乙型肝炎的療效[J]. 黑龍江醫藥科學, 2016, 39(1): 145-146.

[4]李佳楠, 代麗娟, 韓有文. 健脾疏肝湯對慢性乙型肝炎患者血清 MMP-2和TIMP-2的影響[J]. 黑龍江醫藥科學, 2015, 38(1): 111-112.

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[6]張權, 鄒艷. 三種藥物治療拉米夫定耐藥慢性乙肝患者的療效觀察[J]. 黑龍江醫藥科學, 2015, 38(3): 132-133.

[7]張代春. 乙型肝炎病毒血清學標志物與乙肝DNA相關性探討[J]. 臨床和試驗醫學雜志, 2008, 7(11): 82-83.

[8]岳峰, 劉婕, 沈敦. 熒光定量PCR檢測HBVDNA與血清HBV標志物的關系[J]. 中國誤診學雜志, 2002, 11(2): 1628-1630.

收稿日期:2016-03-20

中圖分類號:R 512.6

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)11-209-03

DOI:10.7619/jcmp.201611079