清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導潰瘍性結腸炎大鼠Toll樣受體表達的影響

高春利

(蘭州市第一人民醫院消化科，甘肅　蘭州　730050)

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清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導潰瘍性結腸炎大鼠Toll樣受體表達的影響

高春利

(蘭州市第一人民醫院消化科，甘肅蘭州730050)

〔摘要〕目的探討清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導潰瘍性結腸炎大鼠Toll樣受體(TLRs)表達的影響。方法選取大鼠60只，根據隨機數字表法分為對照組、模型組、清腸栓組，每組20只，然后對大鼠進行模型建造，造模時對照組給予蒸餾水，其余組均給予5%的葡聚糖硫酸鈉。模型建立后清腸栓組給予清腸栓灌腸，比較大鼠疾病活動指數(DAI)、結腸指數以及TLR1、TLR2、TLR3以及TLR4表達。結果模型組DAI評分顯著高于對照組，清腸栓組顯著低于模型組(P<0.05)；清腸栓組結腸指數顯著低于模型組(P<0.05)，與對照組比較無統計學意義(P>0.05)；模型組TLR2和TLR4表達顯著高于對照組，清腸栓組TLR2和TLR4表達顯著低于模型組(P<0.05)，各組TLR1和TLR3比較無統計學意義(P>0.05)。結論清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導潰瘍性結腸炎療效顯著，能顯著降低大鼠TLR2和TLR4表達水平。

〔關鍵詞〕清腸栓；潰瘍性結腸炎；Toll樣受體

潰瘍性結腸炎黏的發病機制尚不清楚，可能與環境、免疫以及腸道菌群等多種因素有關〔1〕。Toll樣受體(TLRs)與免疫功能存在較大關系，是一種跨膜和模式識別受體，能夠識別跨膜相關病原體。清腸栓是臨床上治療潰瘍性結腸炎的重要藥物，可以局部應用來起到抗感染作用。但是清腸栓對TLRs表達具有何種影響受到較大關注〔2〕。本研究旨在分析清腸栓對葡聚糖硫酸鈉誘導潰瘍性結腸炎大鼠TLRs表達的影響。

1資料與方法

1.1一般資料選取大鼠60只，均由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，均由SPF級動物房進行飼養。根據隨機數字表法分為對照組、模型組、清腸栓組，其中對照組20只，鼠齡均為7 w，均為雄性，體質量為189~210 g，平均(200.4±1.5)g，模型組20只，鼠齡均為7 w，均雄性，體質量為190~210 g，平均為(200.3±1.6)g，清腸栓組20只，鼠齡均為7 w，均為雄性，體質量為190~210 g，平均(200.2±1.4)g，三組周齡、性別以及體質量均無顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法所有大鼠均進行適應性喂養1 w，然后對照組給予蒸餾水，模型組和清腸栓組給予5%葡聚糖硫酸鈉溶液進行潰瘍性結腸炎造模。造模7 d后，清腸栓組每月給予清腸栓(由上海中醫藥大學附屬龍華醫藥提供)140 mg/kg，模型組給予等量的生理鹽水灌腸，對照組不給予處理。禁食12 h后進行灌腸，應用頭皮針從肛門輕輕插入約8 cm，將灌腸液推入，然后提起尾巴倒立約15 min后放到籠中進行常規喂養。

1.3檢測方法疾病活動指數(DAI)從造模開始記錄皮毛、體質量、精神、飲食、大便及隱血情況來評價疾病活動情況，評分越高表示疾病活動程度越強〔3〕；灌腸14 d后稱重，然后應用戊巴比妥鈉進行腹腔麻醉，將腹部剝開使腸腔暴露，將結腸截取出來，然后應用生理鹽水沖洗2次，濾紙吸干，稱結腸的濕重。結腸指數〔4〕表示結腸濕重與體質量的比值。應用Western 印跡法檢測結腸組織的中TLR1、TLR2、TLR3及TLR4表達。

1.4統計學方法應用SPSS17.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗。

2結果

2.1各組DAI評分比較模型組DAI評分〔(3.92±0.52)分〕顯著高于對照組〔(0.98±0.04)分〕，清腸栓組DAI評分〔(2.53±0.05)分〕顯著低于模型組，清腸栓組DAI評分顯著高于對照組(P<0.05)。

2.2各組結腸指數比較清腸栓組結腸指數(0.51±0.03)顯著低于模型組(0.65±0.71)(P<0.05)，與對照組(0.45±0.01)比較無統計學意義(P>0.05)。

2.3各組TLRs比較模型組TLR2和TLR4表達顯著高于對照組，清腸栓組顯著低于模型組(P<0.05)，各組TLR1和TLR3比較無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　各組TLR1、TLR2、TLR3和TLR4

與模型組比較：1)P<0.05

3討論

免疫異常是引起潰瘍性結腸炎的重要原因〔5〕。許多研究顯示，TLRs/核轉錄因子(NF)-κB是導致潰瘍性結腸炎的重要信號通路，可以使TLRs表達被啟動，進而引起炎癥反應。TLRs類型較多，且不同類型的TLR具有不同的功能作用〔6〕。研究顯示，TLR4可以用來識別內毒素，TLR2可以識別肽聚糖，TLR3則可以識別雙鏈的RNA。其中TLR1可以于單核細胞、T淋巴細胞、自然殺傷(NK)細胞及B淋巴細胞等多種細胞中表達，TLR2和TLR4只表達于髓源性細胞中，TLR3只能特異性地于樹突細胞上表達〔7〕。有研究證實，TLR4可以識別革蘭陰性桿菌的細胞壁成分，并且被激活，于多種信號的作用下引起NF-κB被激活，進而使細胞內的信號傳遞得以完成，使相應的效應細胞分泌細胞因子，進而導致腸道免疫功能被破壞〔8〕。

清腸栓是一種中藥復方，主要藥物組成有：青黛、馬齒莧、參三七等，其中青黛具備清熱解毒、涼血消癰的作用，參三七具有去腐生肌和止血化瘀的作用，馬齒莧則具有涼血、清熱解毒的作用〔9〕。現代研究顯示，青黛可以降低血管的通透性，對機體免疫能力具有調節作用，還具備較強殺菌和抗病毒作用。參三七主要成分有黃酮類和皂苷類，可以調節免疫功能、抗腫瘤、調節平滑肌運動以及抗病毒等作用。三藥配合能發貨清熱解毒利濕、活血祛瘀、促進創傷愈合的作用，進而起到止痛、止血以及止瀉的作用〔10，11〕。

4參考文獻

1嚴妍,王易.中藥對感染、自身免疫性疾病中Toll樣受體表達影響的實驗研究進展〔J〕.現代免疫學,2014；34(1):73-6.

2周婷婷,仝巧云.柳氮磺胺吡啶對潰瘍性結腸炎大鼠結腸Toll樣受體4表達的影響〔J〕.廣東醫學,2014；52(22):3474-6.

3張露,唐國都.Toll樣受體9與消化系統疾病的相關研究進展〔J〕.醫學綜述，2014；20(22):4036-8.

4Wang Z,Dong B,Feng Z,etal.A study on immunomodulatory mechanism of polysaccharopeptide mediated by TLR4 signaling pathway〔J〕.BMC Immunol,2015；16(1):34.

5魏妮,郭長存,沙素梅,等.利用表達譜基因芯片篩選潰瘍性結腸炎差異表達基因〔J〕.現代生物醫學進展,2015；15(1):53-7.

6Ohira H,Abe K,Takahashi A,etal.Autoimmune hepatitis:recent advances in the pathogenesis and new diagnostic guidelines in Japan〔J〕.Intern Med,2015；54(11):1323-8.

7翟金海,陳蘭,邢益陽,等.中醫藥治療潰瘍性結腸炎的機制研究現狀〔J〕.中國中西醫結合消化雜志,2013；21(10):555-7.

8Lee JJ,Wang PW,Yang IH,etal.High-fat diet induces toll-like receptor 4-dependent macrophage/microglial cell activation and retinal impairment〔J〕.Invest Ophthalmol Vis Sci,2015；56(5):3041-50.

9張燕翔,魯兵,張恒文,等.四君子湯抗大鼠潰瘍性結腸炎及對結腸組織GABA受體表達的影響〔J〕.世界華人消化雜志,2014；22(34):5258-65.

10王立娟,劉旭,唐志鵬,等.清腸栓對DSS誘導結腸炎小鼠脾CD4~+T細胞CD44、CD62L表達的影響〔J〕.上海中醫藥雜志,2014；48(5):104-8.

11曹麗靜,郝微微,溫紅珠,等.清腸栓對潰瘍性結腸炎大鼠Toll樣受體表達的影響〔J〕.中國中西醫結合消化雜志,2015；23(4):225-30.

〔2015-10-27修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類號〕R57

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1066-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.019

第一作者：高春利(1974-)，女，副主任醫師，主要從事消化內科及消化內鏡方面的研究。