喉鱗癌組織中脆性組氨酸三聯體基因和增殖蛋白的關系

劉　瑤　崔　穎　劉衛芳

(遼寧醫學院附屬第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科,遼寧　錦州　121001)

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喉鱗癌組織中脆性組氨酸三聯體基因和增殖蛋白的關系

劉瑤崔穎劉衛芳

(遼寧醫學院附屬第一醫院耳鼻咽喉頭頸外科,遼寧錦州121001)

〔摘要〕目的檢測喉鱗癌中脆性組氨酸三聯體基因(FHIT)、增殖細胞核抗原(PCNA)和Ki67增殖蛋白(Ki67)的表達特征，探討FHIT對增殖的作用。方法67例喉鱗癌患者的臨床資料和術后蠟塊組織作為觀察組，喉黏膜不典型增生的術后組織53例作為對照組，收集上述距腫物邊緣>2 cm非腫瘤性喉黏膜組織53例作為正常對照組。應用免疫組化二步法檢測三組FHIT、PCNA和Ki67的表達。結果三組FHIT、PCNA和Ki67的陽性率差別顯著(P<0.000 1)。觀察組中FHIT、PCNA和Ki67的陽性率均與腫瘤最大徑、分化程度、是否伴有脈管內瘤栓相關。PCNA和Ki67的表達與淋巴結轉移相關。線性相關分析顯示觀察組中FHIT和PCNA、FHIT和Ki67的表達均具有負相關性。結論喉鱗癌術后組織中FHIT低表達，PCNA和Ki67高表達對促進腫瘤形成和進展有一定作用，FHIT在調節腫瘤性進展過程中可能與對腫瘤細胞增殖的調節有關。

〔關鍵詞〕喉鱗癌；脆性組氨酸三聯體基因(FHIT)；增殖細胞核抗原(PCNA)；Ki67；免疫組化

喉鱗癌在六、七十歲的老年人中發病率最高，男性較為多見，主要發生于聲門上區和聲門區〔1〕。病變的形成因素較多，如吸煙、酒精的作用等，在這些因素的誘導下，機體的基因和蛋白表達失調，對誘發腫瘤起重要作用。正常細胞在腫瘤性病變過程中形成明顯的失控性增生和分化成熟障礙，使細胞的繁殖能力增強，實驗中標記細胞增殖的蛋白主要是Ki67增殖蛋白(Ki67)和增殖細胞核抗原(PCNA)，二者表達升高，提示細胞處于活躍狀態，腫瘤的進展迅速〔2,3〕。脆性組氨酸三聯體基因(FHIT)是1996年發現的基因，其編碼的蛋白質具有多種生物學功能，尤其對細胞生長信號的阻斷作用更為明顯，有效抑制腫瘤的繁殖及生長〔4,5〕。本實驗探討喉鱗癌術后組織中FHIT、PCNA和Ki67的表達特征及其相關性。

1資料與方法

1.1臨床資料2012年1月至2014年12月我院診斷為喉鱗癌的67例患者的臨床資料和術后蠟塊組織作為觀察組，男42例，女25例；年齡52~89歲，平均(69.2±6.8)歲。納入均經病理醫師確診，并按WHO的標準進行分型。喉黏膜不典型增生的術后組織53例作為對照組，男27例，女26例；年齡46~86歲，平均(67.2±6.6)歲。觀察組距腫物邊緣>2 cm非腫瘤性喉黏膜組織53例作為正常對照組，男32例，女21例；年齡53~85歲，平均(68.7±6.4)歲。三組常規資料差異無顯著性。

1.2免疫組化檢測FHIT、PCNA和Ki67的表達FHIT、PCNA和Ki67抗體均應用0.1 ml的濃縮液。依不同比例進行稀釋后行預實驗，由病理醫師選擇最理想的濃度用于正式實驗。正式實驗中FHIT、PCNA和Ki67的檢測采用免疫組化二步法，完全按說明書進行操作，做好質控工作。

1.3FHIT、PCNA和Ki67結果的判斷FHIT陽性部位定位于細胞質(對于散在少數細胞核和細胞膜著色的上皮細胞不計為陽性)，PCNA和Ki67的陽性部位定位于細胞核。三種蛋白均以染成中-強等強度的棕黃色為陽性細胞。觀察組中選擇上皮細胞集中的癌巢區域進行計數，對照組和正常對照組選擇上皮細胞區域進行計數，選擇5個400倍視野，計數陽性細胞的百分率，取平均值。以<10%為陰性，以≥10%為陽性。

1.4統計學方法采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗及線性相關分析。

2結果

2.1三組中FHIT、PCNA和Ki67表達陽性率的比較三組中FHIT、PCNA和Ki67的陽性率差別顯著(P<0.000 1)。見表1。

2.2觀察組中FHIT、PCNA和Ki67在不同臨床特征中比較的分析觀察組中FHIT、PCNA和Ki67的陽性率均與腫瘤最大徑、分化程度、是否伴有脈管內瘤栓相關。PCNA和Ki67的表達與淋巴結轉移相關。見表2。

2.3觀察組中FHIT、PCNA和Ki67相關性觀察組中FHIT和PCNA(r=-0.47,P=0.042 1)、FHIT和Ki67的表達均具有負相關性(r=-0.52,P=0.024 1)。

表1　三組中FHIT、PCNA和Ki67陽性率比較〔n(%)〕

表2　觀察組中FHIT、PCNA和Ki67陽性表達在

3討論

鱗癌是發生在喉部最多見的腫瘤，病變形成過程中伴有鱗狀細胞的分化，常見各種各樣的“角化珠”形成的角化現象，并且侵襲性生長是鱗癌的首要特征。侵襲表現為穿透基底膜，通常伴有較多的間質反應。而血管淋巴管及神經周圍侵襲是惡性腫瘤的附加特征〔1〕。高分化鱗癌與正常的鱗狀上皮類似，中分化鱗癌具有獨特的核多形性和核分裂象，包括非正常核分裂，角化不常見。低分化鱗癌是以不成熟的細胞為主，有大量的正常或不正常的核分裂，角化極少。在腫瘤侵襲及分化過程中，多種蛋白表達失調參與其中〔6〕。FHIT是1996年利用外顯子捕獲法發現的抑癌基因，由10個外顯子組成〔7,8〕。FHIT通過對ApnA進行水解，阻止細胞生長信號的傳導途徑，引起細胞凋亡，進而抑制腫瘤生長〔9,10〕。也有觀點認為FHIT可以與Ap3A等結合成FHIT底物復合物，其可能是一種信號物質，可能比水解酶的作用更重要〔11〕。Campiglio等〔12〕通過對29例原發性乳腺癌中檢測FHIT的表達，認為FHIT低表達是乳腺癌發生和進展的重要因素。Koda等〔13〕通過對膽囊癌中FHIT的表達進行檢測，發現FHIT低表達是促進腫瘤形成的重要因素，而且FHIT的表達與重組人MutL同系物(MLH)1具有相關性，而對P53沒有明顯的調節作用。PCNA是一種細胞周期蛋白，是DNA多聚酶的輔助蛋白，為DNA合成中不可缺少的因子〔14,15〕。PCNA定位于增殖細胞的細胞核中，呈顆粒型或彌漫型，在許多有絲分裂細胞內可見PCNA著色顆粒，而非有絲分裂的細胞中存在較少〔16〕。Ki67是存在于增殖細胞核中的一種非蛋白性核蛋白，與細胞增殖有密切的關系〔17〕。

本實驗結果提示FHIT、PCNA和Ki67異常表達在黏膜癌變中有重要促進作用，FHIT低表達、PCNA和Ki67高表達可以促進腫瘤的生長，引起腫瘤的體積增大，侵襲能力增強。FHIT、PCNA和Ki67三者異常表達與腫瘤的形成過程中腫瘤由原始向成熟發育過程有關。FHIT低表達、PCNA和Ki67高表達可以促進腫瘤對血管淋巴管的侵襲進程，使腫瘤具有明顯的遷移潛能。PCNA和Ki67二者不僅對增殖有重要的標記作用，還對腫瘤經淋巴道遷移有重要促進作用。由于以上因素是腫瘤形成及進展過程中的重要因素，因此三者的異常表達提示腫瘤處于進展期，可能有不良的預后。FHIT低表達時可以促進以PCNA和Ki67為主的增殖作用。當FHIT低表達時，使其對細胞增殖的抑制作用減弱，細胞生長旺盛，細胞增殖明顯〔18,19〕。

綜上，喉鱗癌術后組織中FHIT低表達，PCNA和Ki67高表達對促進腫瘤的形成及進展有一定作用，FHIT在調節腫瘤性進展過程中可能與對腫瘤細胞增殖的調節有關。

4參考文獻

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〔2014-12-17修回〕

(編輯苑云杰)

〔中圖分類號〕R739

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1118-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.044

通訊作者：崔穎(1972-)，女，博士，主任醫師，主要從事干細胞研究。

第一作者：劉瑤(1983-)，女，碩士，住院醫師，主要從事耳鼻咽喉科學研究。