乳腺癌組織中扭曲基因和雌激素受體的表達及臨床意義

何　清　張緯建　李　晶

(福建醫科大學附屬第一醫院放療科，福建　福州　350005)

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乳腺癌組織中扭曲基因和雌激素受體的表達及臨床意義

何清張緯建李晶1

(福建醫科大學附屬第一醫院放療科，福建福州350005)

〔摘要〕目的研究乳腺癌組織中扭曲基因(TWIST)和雌激素受體(ERα)的表達及其臨床意義。方法隨機選取2009年1月至2010年9月在該院接受手術治療的35例乳腺癌患者的癌組織與癌旁組織標本進行研究，采用免疫組織化學法檢測乳腺癌組織及癌旁組織中的TWIST與ERα表達情況，分析兩者對乳腺癌患者1年及5年復發率及生存率的影響，采用Cox多因素統計學方法分析乳腺癌患者生存預后的影響因素。結果TWIST在乳腺癌組織中的陽性表達率顯著高于癌旁組織，ERα在乳腺癌組織中的陽性表達率顯著低于癌旁組織(P<0.05)。TWIST(+)ERα(-)的5年復發率顯著高于其他各組，5年生存率顯著低于其他各組(P<0.05)。低分化、有淋巴結轉移的乳腺癌患者TWIST陽性及ERα陰性的比例明顯高于中高分化及無淋巴結轉移者(P<0.05)。Cox多因素分析顯示，病理分級為低分化、有淋巴結轉移以及TWIST(+)ERα(-)均為乳腺癌患者預后生存的影響因素。結論TWIST的高表達及ERα的低表達對乳腺癌患者的預后生存具有不利影響，臨床監測二者的表達情況，可評估患者的預后。

〔關鍵詞〕乳腺癌組織；TWIST；ERα

近年來，乳腺癌發病率不斷升高，相關報道指出〔1，2〕，扭曲基因(TWIST)和雌激素受體(ERα)在乳腺癌的發生侵襲以及轉移等活動中起到關鍵作用,本文旨在深入研究兩者在乳腺癌發生、發展過程中所起到的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料隨機選取2009年1月至2010年9月在我院接受手術治療的35例女性乳腺癌患者，年齡36～69歲，平均(48.2±2.6)歲。納入標準：(1)患者在術前未接受過放化療治療；(2)術后病理學確診為乳腺癌；(3)單側乳腺癌。排除標準：(1)其他種類的癌癥病史；(2)雙側乳腺癌。手術切除患者癌組織與癌旁組織(與癌組織距離≥3 cm)，所有標本蠟塊均存于液氮內。

1.2研究方法對實驗標本實施常規脫蠟和水化，制成切片，使用3%的過氧水在室溫下孵育約10 min，利用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，5 min/次。使用10%的山羊血清進行封閉，在室溫下孵育約10 min，清除血清并滴加一抗(產自美國Billegend公司)，在4℃下過夜。給予PBS沖洗，滴入生物素標記二抗(產自美國Billegend公司)，在37℃下孵育約10 min，給予PBS沖洗，滴入由堿性磷酸酶標記后的鏈霉卵白素，在37℃下孵育約20 min，給予PBS沖洗。再滴入配制好的DAB顯色液，6 min顯色后使用蒸餾水沖洗，由蘇木精復染，最后樹脂封片。

1.3效果評價〔3，4〕顯微鏡下取每張切片的5個視野進行評價，TWIST染色結果通過染色強度和陽性細胞在腫瘤細胞總數中所占的比例進行評分。染色強度：無色計0分；淡黃色計1分；棕黃色計2分，黃褐色計3分。陽性細胞比例：≤10%計0分，11%~25%計1分，26%~50%計2分，51%~100%計3分。將上述兩項評分結果相乘，乘積為0～3分計陰性，4分計以上計陽性。ERα的染色結果以細胞核中發現棕色顆粒記為陽性。

1.4觀察指標觀察并比較TWIST與ERα在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達情況，患者隨訪5年，記錄來院復診患者的病情變化，分析TWIST與ERα表達對乳腺癌患者近遠期復發率及生存率的影響。收集患者病理資料(包括年齡、TNM分期、腫瘤直徑、病理分級以及淋巴結轉移)，分析其與TWIST及ERα表達的關系，利用 Cox法對乳腺癌患者生存預后的影響因素進行分析。

1.5統計學方法 使用SPSS15.0分析軟件進行χ2檢驗和Cox分析。

2結果

2.1TWIST與ERα在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達情況比較TWIST在乳腺癌組織中的陽性表達率為77.14%(22例)，顯著高于癌旁組織的8.57%(3例)；ERα在乳腺癌組織中的陽性表達率為31.43%(11例)，顯著低于癌旁組織的74.29%(26例)(均P<0.05)。

2.2TWIST與ERα的表達對乳腺癌患者近遠期復發率及生存率的比較由于 TWIST(-)ERα(-)例數過少，無代表性，因此未列入比較。TWIST(+)ERα(-)的5年復發率顯著高于其他各組，5年生存率顯著低于其他各組(P<0.05)。各組1年復發率及生存率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3患者病理資料與TWIST及ERα表達的關系分析低分化、有淋巴結轉移的乳腺癌患者TWIST(+)ERα(-)的比例明顯高于中高分化及無淋巴結轉移者(χ2=3.902，5.844,9.135,12.696；P=0.048，0.016，0.003，0.000)。不同年齡、TNM分期的乳腺癌患者TWIST與ERα的表達比例比較，無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.4Cox法對乳腺癌患者生存預后的影響因素分析病理分級為低分化、有淋巴結轉移以及TWIST(+)ERα(-)均為乳腺癌患者預后生存的影響因素。見表3。

表1　TWIST與ERα的表達對乳腺癌患者近遠期復發率及

與TWIST(+)ERα(+)比較:1)P<0.05；與 TWIST(-)ERα(+)比較:2)P<0.05

表2　患者病理資料與TWIST及ERα表達的

與中高分化比較:1)P<0.05；與無淋巴結轉移比較:2)P<0.05

表3　Cox法對乳腺癌患者生存預后的影響因素分析

3討論

近年來女性乳腺疾病發病率不斷攀升，乳腺癌發病年齡也呈年輕化趨勢，對女性日常生活造成影響，對其生命健康造成威脅〔5〕。乳腺癌具有極易發生轉移的典型生物學特性，研究表明〔6〕，乳腺癌在發生、發展以及轉移這一系列活動中，受到多種因素影響，其過程十分復雜，其中包含健康狀態乳腺上皮細胞受到誘導而轉化為間充質細胞，之后失控增殖形成原位癌，繼而原位癌出現脫離以及外侵現象，導致乳腺癌細胞發生定向轉移，最終在靶器官上進行黏附并增殖。TWIST為堿性螺旋-環-螺旋類型轉錄因子，其在腫瘤進展中發揮重要作用。TWIST具有促使細胞移動和組織重組功能，對胚胎發育起到關鍵作用，其能夠誘導產生多種間充質標志物，幫助完成上皮和間質之間的轉化，進而促進上皮來源的癌細胞發生轉化成為間充質細胞。TWIST過度表達會導致上皮細胞中的E-cadherin表達發生缺失或者喪失，引起間質標志物出現表達上升現象，提升細胞遷徙力〔7〕。同時，TWIST還會與E-cadherin中的啟動子相結合，阻止其進行轉錄，導致癌細胞發生轉移。此外，TWIST過度表達還會導致腫瘤細胞凋亡受到抑制，促使腫瘤進一步惡化。因此，TWIST表達狀況可直接反映乳腺癌進展情況，如其過度表達，則可預測出乳腺癌極可能已發生侵襲轉移。

ERα屬于類固醇類型激素受體，為激素調節的轉錄因子中十分重要的組成部分。在對雌激素具有依賴性質的乳腺癌細胞內，雌激素會對癌細胞自身的分泌功能產生刺激作用，提升對其生長有刺激作用的因子水平，降低對其生長有抑制作用的因子水平，進一步通過調節作用影響ERα等雌激素受體的水平。因此，雌激素和ERα等雌激素受體之間發生生物化學反應可能直接關系到乳腺癌的產生及發展。

本研究表明TWIST與ERα在乳腺癌組織中存在表達異常。此外，本研究與Vesuna等〔8〕報道一致，說明TWIST(+)ERα(-)可能會促進乳腺癌的進展，影響患者預后。高表達TWIST對ERα的表達產生抑制，使得患者更易對治療方案產生不耐受，從而不利于預后生存。而病理分級為低分化及有淋巴結轉移的乳腺癌患者由于癌癥病情較重，易導致其生存預后不良。Ouelaa-Benslama等〔9〕針對乳腺癌癌癥病理分級及淋巴結轉移影響患者的生存率作出了分析，與本文研究結果大體一致，但未涉及TWIST與ERα的表達情況，本文給予了補充，完善了研究結果。但須指出，樣本量較少是本次研究的短板。綜上，TWIST的高表達及ERα的低表達對乳腺癌患者的生存預后具有不利影響，臨床通過上檢測二者的表達情況，可評估患者的預后。

4參考文獻

1于丁,臧愛華,吳輝菁,等.乳腺癌干細胞通過上調Twist表達的上皮-間葉轉化參與腫瘤轉移〔J〕.腫瘤學雜志,2010；16(9):710-4.

2周明莉,唐石伏,張海龍,等.Twist促進乳腺癌細胞BT-549乳腺細胞小球形成及其遷移〔J〕.細胞與分子免疫學雜志,2015；31(3):321-4.

3宋一民,朱雅萍,薛金慧,等.乳腺浸潤性導管癌組織中轉錄因子Twist和缺氧誘導因子-1α表達與上皮-間充質轉化的關系〔J〕.中華實驗外科雜志,2014；31(10):2284-6.

4劉瑜,孫曉紅.Twist、Wnt信號傳導通路與女性相關腫瘤的關系〔J〕.社區醫學雜志,2014；12(8):49-52.

5周明莉,楊佳佳,唐石伏,等.高表達Twist基因促進人乳腺癌細胞MCF-7干細胞樣細胞富集和遷移〔J〕.第三軍醫大學學報,2014；36(20):2083-6.

6Tilghman SL,Townley I,Zhong Q,etal.Proteomic signatures of acquired letrozole resistance in breast cancer:suppressed estrogen signaling and increased cell motility and invasiveness〔J〕.Mol Cell Proteomics,2013；12(9):2440-55.

7Fu J,Zhang L,He T,etal.TWIST represses estrogen receptor-alpha expression by recruiting the NuRD protein complex in breast cancer cells〔J〕.Int J Biol Sci,2012；8(4):522-32.

8Vesuna F,Lisok A,Kimble B,etal.Twist contributes to hormone resistance in breast cancer by downregulating estrogen receptor-α〔J〕.Oncogene,2012；31(27):3223-34.

9Ouelaa-Benslama R,De Wever O,Hendrix A,etal.Identification of a GαGβγ,AKT and PKCα signalome associated with invasive growth in two genetic models of human breast cancer cell epithelial-to-mesenchymal transition〔J〕.Int J Oncol,2012；41(1):189-200.

〔2015-11-23修回〕

(編輯滕欣航)

〔中圖分類號〕R737.9

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)05-1128-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.049

通訊作者：張緯建(1955-)，男，碩士，主任醫師，主要從事放射腫瘤治療方面的研究。

1福建醫科大學附屬第一醫院影像科

第一作者：何清(1978-)，女，主治醫師，主要從事腫瘤放射治療方面的研究。