玉簪白絹病菌最適培養基的篩選

劉智會，鄧小芳，許曉明

(長春市園林植物保護站，長春130022)

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玉簪白絹病菌最適培養基的篩選

劉智會，鄧小芳，許曉明

(長春市園林植物保護站，長春130022)

摘要：采用了從不同采集地得到的3個玉簪白絹病菌株，選用了5種常見培養基，對3個白絹病菌株進行培養。實驗結果表明，所有供試菌株在5種培養基上均能生長、產核。但是菌絲生長與產核量存在差異，3個菌株在PDA、玉米粉瓊膠培養基和燕麥片瓊膠培養基上均生長良好，以PDA最佳，營養瓊膠培養基上生長最差；平均產核量以PDA上最多；故得出，PDA為最適培養基。且菌株之間的在菌絲生長和產核量方面也存在差異，具體表現為Y1>Y3>Y2，菌絲生長與產核量成正相關關系。

關鍵詞：玉簪；白絹病菌株；菌絲生長；產核量；最適培養基

玉簪是玉簪屬(Hosta)植物的統稱，屬百合科(Liliaceae)多年生宿根草本植物，主要分布在東北亞的溫帶與亞熱帶地區，如中國、日本、朝鮮及蘇聯的遠東地區[1]。玉簪屬名從1712年開始進行簡單分類，經過多次更改確認，直到1905年Hosta才成為合法屬名。目前美國玉簪協會及國際登陸以專著《The Genus Hosta》(1991)為基準[2]Schmid在研究新資料的前提下將玉簪屬分3個亞屬10個組，共43種，而中國有4種。目前，世界已命名的玉簪品種多達4000種，每年還有許多新的優良品種培育出來[3-4]。玉簪以品種繁多、花葉觀賞俱佳、抗逆性強，深受人們的喜愛，至20世紀末成為世界銷量第一的草本花卉[5-6]。另外，玉簪全株均可入藥，主要具有清熱、解毒、止血、止咳等功效。

玉簪在生長過程中極易遭受病原菌的危害，使葉片出現大片枯黃，影響開花觀賞甚至發生莖基部腐爛引起整株死亡。其中發生最普遍最常見造成危害最嚴重的要屬玉簪白絹病，發生面積大，危害時期長，危害程度嚴重，常常對玉簪的葉片造成極為嚴重的危害，影響觀賞效果，常常是整個生長季，大片的玉簪都是遍地枯黃，只留一株株花蕊獨立，而且不易防治。本文選用了從長春市區的御花園、勝利公園、杏花邨3處采集到的玉簪白絹病的病株，通過菌株分離純化得到的3個白絹病原菌菌株。由于白絹病在三處所表現的致病力不同，所以為了更深入了解玉簪白絹病的生物學特性，更好的防治白絹病在玉簪上的發生及有效的防治，現在實驗室條件下，選取5種不同培養基，進行培養，選出最適合玉簪白絹病菌株菌絲生長、更利于菌核產生的培養基。通過觀察其對菌絲生長及產核量的影響，明確不同營養條件對玉簪白絹病菌株是否存在影響以及不同來源的菌株之間是否存在差異。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試的3個菌株分別來自長春市的御花園、勝利公園、杏花邨三個公園，將在3處采集到的帶病植株進行病原菌組織分離、純化得到3個玉簪白絹病病原菌，并采用常規方法將其在PDA培養基上進行培養[2]，得到相應菌株，編號分別為Y1、Y2、Y3，放于4℃的冰箱中保存。

1.2試驗方法

供試培養基供試培養基為PDA、營養瓊脂培養基、寄主葉片培養基、玉米粉瓊膠培養基、燕麥片瓊膠培養基，配方如下[6-8]。馬鈴薯葡萄糖培養基(PDA)：葡萄糖20.0g、馬鈴薯200.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；營養瓊脂培養基：蛋白胨10g、氯化鈉5g、牛肉膏粉3g、瓊脂15g、蒸餾水1000mL；寄主汁液(加葡萄糖)培養基：寄主葉10.0g、瓊脂20.0g、葡萄糖20.0g、蒸餾水1000mL；玉米粉瓊脂培養基：玉米粉30.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；燕麥片瓊脂培養基：燕麥片30.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；將上述培養基高溫滅菌后，取10mL倒入培養皿內，冷卻后，接入5mm菌塊，每個處理3次重復，25℃下培養，3d后測量菌落直徑，并在無菌室拍照[8]。菌落在測量直徑后繼續培養10d，開始觀察，35d后統計菌核產量。

2結果與分析

圖1　供試菌株在各個培養基上的生長狀況

圖2　供試菌株在各個培養基上的產核狀況(第21d)

培養基名稱菌株編號菌落平均直徑/mm菌絲生長狀況平均產核量/個營養瓊脂培養基Y1Y2Y326.323.622.7******1321511玉簪葉片培養基Y1Y2Y34034.633**********402420玉米粉瓊膠培養基Y1Y2Y343.34139************1644882燕麥片瓊膠培養基Y1Y2Y340.838.838.6************675252PDAY1Y2Y3454440************24464136

備注：“**”，生長差，“***”生長良好，“****”生長特別好。

2.13個菌株在5種培養基菌絲生長情況

從圖1和表1可以看出，3個供試菌株在5種培養基上均能生長，但生長速度存在一定差異，以PDA、玉米粉瓊膠培養基和燕麥片瓊膠培養基最佳，營養瓊膠培養基上生長最差。其中，菌絲生長最好的是在PDA培養基上，菌絲不但生長速度快，而且菌絲粗壯、濃密；其次是玉米粉瓊膠培養基和燕麥片瓊膠培養基，3天后菌絲也幾乎長滿整個培養基表面，但是菌絲與PDA上的比較，較為稀薄，纖細。3個供試菌株在營養瓊膠培養基上生長都很緩慢，只有PDA上平均生長直徑的一半。而且在5種培養基上，3個菌株之間的生長狀況也有明顯差異，Y1>Y3>Y2。Y1生長狀況最好，其次是Y3，Y2最差。

2.23個菌株在5種培養基上的產核情況

從表1、圖2可以看出來，3個供試菌株在5種培養基上均能夠產生菌核尤其是PDA培養基，所有供試菌株產核的數量最多，菌核也最大；同時在產生菌核的時間上也有顯著差異。燕麥片瓊膠培養基最先產生菌核，是在接種后的第10天產生，且菌核分散、大小也極其均勻；然后依次是PDA培養基，第11天產核，菌核密集，個別菌核極大，顏色深，成熟度好，但是大小不均；玉米粉瓊膠培養基第12天產核，且菌核分散、大小也較均勻；寄主汁液培養基第13天產核，菌核分散、大小均勻，顏色深，但是數量最少；營養瓊膠培養基最后產生菌核，是在培養21天后，產生菌核,整個培養基表面布滿氣生菌絲，但不產生菌核，即使產生極少的菌核，菌核也極小，顏色很淺，直至第35天菌核才接近成熟，可以清洗統計。所以，無論是產核時間還是產核數量都是PDA最佳，而且菌核較大，成熟快。

實驗中還發現在產核能力方面，3個菌株之間的也存在顯著差異。從產核總數來看Y1(647個)>Y3(301)>Y2(203)。尤其在營養瓊膠培養基上Y1產核數為132個，而Y2為15，Y3則為11個，菌核數量相差最大；差異最小的是燕麥片瓊膠培養基Y1產核數為67個，Y2、Y3則均為52個。

3結論

玉簪是目前園林綠化上比較常用的宿根花卉，廣泛用于各個庭院、綠地。而玉簪的白絹病是目前危害較重的常見病害，且不易防治，給園林養護工作帶來極大困擾。鑒于園林花卉的特性，各地白絹病發生情況也不同，故本實驗采集不同發病地點病株通過分離純化得到的菌株，以探知其致病力的強弱，并篩選出最適合的培養基，為以后的深入實驗做好基礎，也有助于對該病害的進一步研究。實驗結果表明，3個供試菌株均能在5種培養基上生長且產核，只是菌絲生長與產核量存在差異。除營養瓊膠培養基菌絲生長較差外，供試菌株均能在PDA、玉米粉瓊膠培養基、燕麥片瓊膠3種培養基快速、良好，以PDA最佳，菌絲濃密、粗壯，生長速度最快；供試菌株在PDA上平均產核量最多。而且所選用的5種常用的培養基中，PDA培養基成本低廉最易取得，制作也很簡單。故綜合來看，PDA才是最適合玉簪白絹病菌培養的培養基。

同時，我們在實驗中通過比較實驗數據發現3個菌株的在菌絲生長和產核量方面存在顯著差異，證明3個菌株之間的致病力存在較大差異，以Y1最強，其次是Y3、Y2，即，Y1>Y3>Y2，而且，在同一培養基上，一般來說，菌絲生長越好的，產核也越多。

參考文獻

[1]傅立國，陳潭清．中國高等植物[M]．13卷．青島：青島出版社，2002：91-92．

[2]Schmid W G.Hosta Species Update W.George Schmid 2007[EB/OL].http://www.hostalibrary.org.

[3]李錢魚,夏宜平.玉簪屬植物種質資源及其園林應用現狀[J].中國園林，2004，20(2)：77-79．

[4]Schmidw G.The Genus Hosta[M].London:Tmi ber Press,1991.

[5]Grenfell D.The gardener’s guide to growing Hosta[M].Portland,Oregon:Tinber Press,1996:160.

[6]方中達.植病研究法[M].北京：中國農業出版社，1998.

[7]李小霞.貴州省草烏病害調查及白絹病菌生物學特性研究[D].貴陽:貴州大學,2007.

[8]肖仲久,李曉霞.6種培養基對不同來源白術白絹病菌培養的影響[J].廣州農業科技，2012(6).

中圖分類號:S436.8+1

文獻標識碼:A

收稿日期：2015-12-10

作者簡介：張麗(1976-)，女，高級農藝師，主要從事農業技術推廣工作，E-mail:wjk8272915@163.com。 劉智會(1980-)，女，工程師，主要從事園林植物保護工作，E-mail:woliuzhihui@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.02.016