臺灣金線蓮與浙江金線蓮多糖含量及抗氧化活性比較研究

唐楠楠,陶佳青,陳常理,金關榮,李　珊*,程　舟

(1 同濟大學 生命科學與技術學院,上海 200092;2 浙江省蕭山棉麻研究所,杭州 311217)

?

臺灣金線蓮與浙江金線蓮多糖含量及抗氧化活性比較研究

唐楠楠1,陶佳青1,陳常理2,金關榮2,李珊1*,程舟1

(1 同濟大學 生命科學與技術學院,上海 200092;2 浙江省蕭山棉麻研究所,杭州 311217)

摘要:臺灣金線蓮和浙江金線蓮均為蘭科開唇蘭屬植物,是民間常用珍稀草藥金線蓮的主要基原植物,體內富含多糖。該研究采用超聲提取法Ⅰ、Ⅱ及溶劑提取法提取臺灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖,對比多糖含量差異;利用比色法比較兩種金線蓮多糖對羥自由基清除能力的差異,并以秀麗隱桿線蟲為模式生物,探討兩種金線蓮多糖對于過氧化氫氧化壓力下線蟲壽命的影響,綜合評價臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的抗氧化活性,為選擇和培育優質基原的金線蓮提供理論依據。結果顯示:(1)溶劑提取法對金線蓮多糖的提取最為有效,浙江金線蓮的多糖含量顯著高于臺灣金線蓮；(2)隨著濃度的增加,多糖對羥自由基的清除率有升高的趨勢,浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率顯著高于臺灣金線蓮多糖；(3)兩種金線蓮多糖均可延長線蟲壽命,但兩者對線蟲壽命的影響無顯著差異。研究表明,兩種金線蓮均富含多糖且具有抗氧化活性,但多糖含量及抗氧化活性在兩種金線蓮間均存在差異。

關鍵詞:金線蓮;多糖;抗氧化;線蟲壽命

金線蓮是民間常用的多年生珍稀草藥,具有清涼解毒、消炎止痛、滋陰降火等功效,享有“藥王”、“金草”等美稱[1]。現代研究表明,金線蓮富含多糖、氨基酸、生物堿、黃酮化合物、有機酸等成分,具有降低血糖、抗衰老、降血壓、抗乙肝病毒等方面的藥理作用,具有良好的開發前景[2-3]。

金線蓮的基原植物主要為蘭科開唇蘭屬植物金線蓮(Anoectochilusroxburghii)、臺灣金線蓮(Anoectochilusformosanus)和浙江金線蓮(Anoectochiluszhejiangensis)等,近年來臺灣金線蓮和浙江金線蓮的功效日益引起重視[4]。

已有研究表明,當機體產生過多自由基,會引起氧化系統和抗氧化系統失衡,誘導細胞調亡,造成機體損傷,導致生物體衰老加速。其中羥自由基是活性最高、損傷最大的一種活性氧,對羥自由基的清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標,尋找活性氧清除劑已成為當今十分活躍的一個研究領域[5]。多糖作為一種活性氧清除劑,其在抗氧化、抗腫瘤、刺激免疫及降血糖方面均具有一定的作用[6]。目前,關于金線蓮多糖的含量及其抗腫瘤、抗氧化和免疫調節等方面的功效已有較多報道[7-8],但對不同基原金線蓮多糖活性對比和藥理功效等方面尚缺乏深入的研究。

本研究通過比較臺灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖含量,分析其清除羥自由基能力的差異,同時基于秀麗隱桿線蟲模型,探討金線蓮多糖對處于過氧化氫氧化壓力下線蟲壽命的影響,綜合評價不同基原金線蓮多糖的抗氧化活性,為選擇和培育最佳基原的金線蓮,揭示其抗氧化藥理提供理論依據,為利用金線蓮多糖開發醫藥保健品提供理論基礎。

1材料和方法

1.1實驗材料

臺灣金線蓮、浙江金線蓮種源分別來自于臺灣和浙江,均取培養6個月的組培苗用于多糖的提取。野生型秀麗隱桿線蟲(N2)和大腸桿菌OP50(E.coliOP50)為同濟大學費儉教授實驗室惠贈。

主要的儀器包括SP-752型紫外分光光度計(上海光譜儀器有限公司)、HJ-CJ-1FD型凈化工作臺(上海蘇凈實業有限公司)、ZHWY 100D型恒溫培養振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司)、AE 2000顯微鏡(麥克奧迪實業集團有限公司)。

1.2金線蓮多糖的提取及純化

1.2.1溶劑提取法金線蓮全草晾干,40 ℃干燥1 h,粉碎,過70目篩。稱取金線蓮粉末,根據1∶10液料比加純化水,于80 ℃水浴1 h,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,重復上述步驟2次,合并3次上清液,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,旋轉蒸發濃縮至小體積,加10 mL氯仿萃取,取上層液,重復3次,合并上清液。

1.2.2超聲提取法采用超聲提取Ⅰ、Ⅱ兩種方法進行金線蓮多糖的提取。超聲提取法Ⅰ的步驟為:將金線蓮全草晾干,40 ℃干燥1 h,粉碎,過70目篩。稱取金線蓮粉末,根據1∶10液料比加純化水,200 W超聲30 min,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,重復上述步驟2次,合并3次上清液,離心15 min(4 200 r/min),取上清液,旋轉蒸發濃縮至小體積,加氯仿萃取,取上層液。超聲提取法Ⅱ與提取法Ⅰ存在以下差別:200 W超聲15 min,離心后取上清液,重復3次,合并4次上清液。

1.2.3Sevag法除蛋白按4∶1的比例在上清液中加入Sevag試劑(氯仿∶正丁醇=4∶1),劇烈振蕩20 min,離心15 min(4 200 r/min),取水相,去除中間的蛋白質層,在水相中加入1/4體積Sevag試劑,重復上述步驟4次[9]。在最終的水相中加3倍體積無水乙醇,4 ℃過夜,去上清液,將沉淀冷凍干燥48 h后得金線蓮多糖。

1.3金線蓮多糖對羥自由基清除率的測定

參照馮惠萍等[10]的原理及方法測定金線蓮多糖對羥自由基的清除率。H2O2與Fe2+反應產生羥自由基,羥自由基與水楊酸反應生成在510 nm處有特殊吸收的2,3-二羥基苯甲酸,通過測定510 nm處的吸光度,計算被測物反應液的羥自由基清除率。反應體系4 mL,其中含有1 mL 9 mmol/L FeSO4,1 mL 8.8 mmol/L H2O2,1 mL 9 mmol/L水楊酸,以及1 mL不同濃度(0.5、1和2 g/L)的金線蓮多糖。加入H2O2啟動反應,于37 ℃下溫浴1 h,測定510 nm處的吸光值。

羥自由基清除率(%)=A0-(Ax-Ax0)/A0·100

式中，A0為空白對照的吸光值,Ax為加樣品的吸光值,Ax0為不加H2O2的吸光值。

1.4金線蓮多糖對秀麗隱桿線蟲壽命的影響

線蟲培養參照唐曉明的方法[11]。使用標準培養基(NGM),E.coliOP50作為線蟲食物,培養溫度為20 ℃。經機械同步化,于72 h后裂蟲,裂蟲后次日將蟲體濃度調整至80～100條/mL,加入羧芐青霉素(Carbeni-cillin)至終濃度50 μg/mL,同日分裝幼蟲至96孔微孔板,每孔中加入120 μL菌蟲混合液并分別加入濃度為0.2、0.4、0.6、0.8 μg/μL的臺灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖10 μL,對照組中加入10 μL滅菌水取代金線蓮多糖,置于20 ℃恒溫培養箱內,48 h后每孔加入15 μL 1.08 mmol/L FUDR stock solution,置于20 ℃恒溫培養箱培養,24 h后向每個孔加入15 mmol/L H2O25 μL,每48 h觀察線蟲生存狀態,記錄總量、存活數量或死亡數量,計算存活率。

2結果與分析

2.1不同方法提取的金線蓮多糖含量差異

采用超聲提取法Ⅰ、超聲提取法Ⅱ和溶劑提取法提取了臺灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖。如表1所示,超聲提取法Ⅰ提取的臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖含量分別為2.57%和2.12%(P<0.05);超聲提取法Ⅱ提取的臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖含量分別為6.64%和11.65%(P<0.01);采用溶劑提取法提取的臺灣金線蓮和浙江金線蓮的多糖含量分別為12.02%和16.28%(P<0.01)。結果表明,采用溶劑提取法提取金線蓮多糖最為有效,浙江金線蓮多糖含量顯著高于臺灣金線蓮。

2.2不同基原金線蓮多糖清除羥自由基能力差異

表2顯示,多糖濃度為0.5 g/L時,臺灣金線蓮多糖與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率分別為11.55%和14.48%(P<0.01);多糖濃度為1 g/L時,臺灣金線蓮多糖與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率分別為19.16%和21.40%(P<0.05);多糖濃度為2 g/L時,臺灣金線蓮多糖與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率分別為22.23%和26.97%(P<0.01)。結果表明,浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率均顯著高于臺灣金線蓮多糖,并且隨著多糖濃度的增加,羥自由基清除率有逐漸升高的趨勢,金線蓮多糖的羥自由基清除能力與多糖濃度成量效關系。

2.3不同基原金線蓮多糖對秀麗隱桿線蟲壽命的影響

如表3所示,對照組線蟲的平均壽命為7.79 d,加入濃度0.2 μg/μL臺灣金線蓮多糖,線蟲的平均壽命為7.39 d,處理組線蟲的平均壽命與對照組相比無顯著差異。加入濃度為0.4、0.6和0.8 μg/μL臺灣金線蓮多糖,線蟲的平均壽命分別為11.12、12.91和12.97 d,與對照組相比,0.4、0.6和0.8 μg/μL處理組線蟲的平均壽命均有顯著提高。對比0.4、0.6和0.8 μg/μL 3個處理組間線蟲的平均壽命,可以看出0.6和0.8 μg/μL處理組較0.4 μg/μL處理組能顯著延長線蟲的平均壽命(P<0.05),但0.6和0.8 μg/μL兩組間線蟲的平均壽命無顯著差異(P>0.05)。基于培養過程中線蟲存活率的變化做生長曲線,如圖1所示,當臺灣金線蓮多糖濃度為0.2 μg/μL時,處理組的生長曲線與對照組差異不大,而當臺灣金線蓮多糖濃度為0.4、0.6和0.8 μg/μL時,處理組的生存曲線發生了不同程度的右移,處理組線蟲的存活時間明顯長于對照組。

表1　3種提取方法對提取不同基原金線蓮多糖的影響

注:同列不同小寫字母表示不同提取方法在0.05水平上存在顯著差異;P值表示相同方法提取的臺灣金線蓮與浙江金線蓮多糖含量的顯著性差異。

Note:Different letters in the same column indicated the significant difference between varieties at the 0.05 level;Pvalue indicated the significant difference ofA.formosanusandA.zhejiangensispolysaccharided the same extraction method.

表2　臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率

注:同列不同小寫字母表示不同濃度間在0.05水平上存在顯著性差異;P值表示同一濃度臺灣金線蓮與浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率的顯著性差異。

Note:Different letters in the same column indicated the significant difference between varieties at the 0.05 level;Pvalue indicated significant difference of calculation of free radical clearance rate ofA.formosanusandA.zhejiangensisat the same concentration.

表3　臺灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖對

注:不同小寫字母表示各濃度間在0.05水平上存在顯著性差異;P值表示同一濃度臺灣金線蓮與浙江金線蓮多糖對線蟲壽命影響的顯著性差異。

Note:Different letters indicate the significant difference between varieties at the 0.05 level;Pvalueindicate the significant difference of effects ofA.formosanuspolysaccharide andA.zhejiangensispolysaccharide on lifetime ofC.elegansat the same concentration.

圖1　不同濃度臺灣金線蓮多糖對

圖2　不同濃度浙江金線蓮多糖對過氧化氫

不同濃度浙江金線蓮多糖對線蟲平均壽命的影響如表3所示,當加入濃度為0.2 μg/μL浙江金線蓮多糖時,線蟲的平均壽命為7.24 d,處理組線蟲的平均壽命與對照組間不存在顯著差異。當加入浙江金線蓮多糖濃度為0.4、0.6和0.8 μg/μL時,線蟲的平均壽命分別為10.56、11.73和13.18 d,與對照組相比,3個處理組線蟲的壽命均有顯著提高。對比0.4、0.6和0.8 μg/μL 3個浙江金線蓮多糖處理組線蟲的平均壽命,處理組0.8 μg/μL組較0.6和0.4 μg/μL組能顯著延長線蟲壽命(P<0.05),而0.4和0.6 μg/μL兩組間線蟲的平均壽命不存在顯著差異(P>0.05)。基于培養過程中線蟲存活率的變化做生長曲線(圖2),當浙江金線蓮多糖的濃度為0.2 μg/μL時,處理組的生長曲線與對照組差異不大,隨著浙江金線蓮多糖濃度的升高,生長曲線出現了不同程度的右移,其中多糖濃度為0.8 μg/μL時,處理組線蟲的存活時間明顯高于對照組。

在相同多糖濃度下,對比臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖對線蟲壽命的影響,結果如表3所示。僅當濃度為0.6 μg/μL時,臺灣金線蓮多糖較浙江金線蓮多糖更能顯著延長線蟲壽命。而多糖濃度為0.2、0.4和0.8 μg/μL時,臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖對線蟲壽命的影響無顯著差異(P>0.05),說明這兩種多糖對線蟲壽命的影響差異不大。

3討論

3.1金線蓮多糖的提取

常用的植物多糖提取方法主要包括溶劑提取法、超聲提取法和酶提取法等。多糖屬于極性較強的物質,可在80 ℃水浴條件下擴散釋放到水中。因此采用水浴提取法可以直接提取植物多糖。由于該方法操作簡便,對實驗設備要求低,提取效果好,是提取植物多糖中較常用的工藝,但耗時較長是該方法的主要缺陷。超聲提取法利用超聲波作用釋放多糖,具有提取所需時間短,對設備要求較高,提取率相對較低的特點,已逐步運用于工業生產。本研究比較了不同方法提取金線蓮多糖的優劣,結果顯示溶劑提取法提取金線蓮多糖的效果優于兩種超聲提取法,得到了與白紅進等對黑果枸杞多糖含量研究、翁梁等對蛹蟲草多糖提取研究相一致的結果[12-13]。進一步優化金線蓮多糖的提取方法和工藝,提高金線蓮多糖的提取率和純度,對大量提取金線蓮多糖、開發金線蓮多糖的藥效價值具有重大的意義。

3.2不同基原金線蓮的多糖含量

多糖普遍存在于自然界高等植物、藻類及動物體內,具有抗腫瘤、抗衰老、降血脂等生物活性,已引起廣泛關注。植物中多糖的含量存在一定差異,例如百合中多糖的平均含量為16.6%[14],海藻中為9.4%[15],甘草中為9.2%[16]。本研究發現,金線蓮多糖的平均含量約為14.0%,多糖含量在高等植物中居于前列,提示金線蓮可作為提取植物多糖的優質種質資源,為金線蓮的大量人工栽培和組織培養提供了理論依據。此外,在本研究中,不同基原的金線蓮其多糖含量存在顯著差異,采用水浴提取法得到的臺灣金線蓮多糖含量為12.0%,浙江金線蓮多糖含量高達16.3%,臺灣金線蓮的多糖含量較低,與張賽男[7]、吳佳溶[17]等的研究結果相一致。鑒于浙江金線蓮多糖含量較高,僅從多糖提取方面考慮,浙江金線蓮是可以優先利用的種質資源。但是與已報道的金線蓮多糖含量相比,本研究測得的金線蓮多糖含量與之存在一定差異[7,17],這可能與選用的多糖提取方法、金線蓮的生長時間、代謝狀況等有關。

3.3金線蓮多糖的羥自由基清除率

機體的代謝過程會因氧化作用而產生大量的自由基,體內氧化系統和抗氧化系統的失衡會導致很多疾病的發生,這些都與自由基引發的氧化反應有關。目前研究表明[18],植物提取物如銀杏葉、茶葉等的提取物均具有抗氧化酶活性,含有可清除自由基的活性物質。因此近年來揭示天然植物提取物清除自由基的活性機制成為了新的研究方向。自由基包括羥自由基和超氧陰離子等,其中羥自由基是活性最高、損傷最大的一種活性氧,對其清除率的大小是反映藥物抗氧化作用的重要指標。本研究結果顯示,金線蓮多糖具有較強的羥自由基清除作用,且清除率與金線蓮多糖濃度成正相關。林麗清等[19]發現金線蓮多糖對氧自由基具有較強的清除作用,其活性也與劑量呈正相關,說明金線蓮多糖具有較高的抗氧化活性。但本研究得到的羥自由基的清除率與林麗清等存在一定差異,推測可能與選取的金線蓮種質不同、種質的生長時期、栽培方法、生活環境存在差異有關,同時測定方法的不同也可能會導致結果的稍許差別。對比臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的羥自由基清除率,顯示浙江金線蓮的抗氧化性活性顯著高于臺灣金線蓮,研究結果為選擇最佳基原的金線蓮,對其進行大規模人工培育、種植提供了理論依據。

3.4金線蓮多糖對線蟲壽命的影響

根據自由基理論,機體的衰老過程與自由基的產生密切相關[20]。在線蟲體內,H2O2可以在線粒體和細胞質之間自由擴散,形成羥自由基和氫氧根離子等自由基,造成線蟲氧化應激損傷。秀麗隱桿線蟲因其生命周期短、體態透明、在顯微鏡下易于觀察、繁殖速度快等優點成為研究機體氧化應激反應的重要模式生物,其壽命的長短可以反映機體的衰老情況[21]。

本研究中用0.2 μg/μL臺灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖處理秀麗隱桿線蟲,在過氧化氫氧化應激條件下,兩者均未顯示出具有延長線蟲壽命的作用,該現象可能與多糖濃度較低有關。但加入0.4、0.6和0.8 μg/μL金線蓮多糖,線蟲壽命均有明顯提高,表明金線蓮多糖能顯著提高秀麗隱桿線蟲在雙氧水壓力條件下的壽命,保護線蟲免受雙氧水作用。據觀察,多糖處理后的線蟲表皮顏色較深,未用多糖處理僅加入過氧化氫的對照組線蟲表皮顏色呈透明,據推測,金線蓮多糖可能作用于線蟲表皮,在線蟲表皮外起一層保護作用,防止過氧化氫從線蟲表皮滲入到線蟲體內,從而延長在過氧化氫氧化壓力下的線蟲壽命。在0.2、0.4和0.8 μg/μL濃度下,臺灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖在過氧化氫氧化壓力條件下對線蟲的保護作用不存在顯著差異,而在0.6 μg/μL濃度下,臺灣金線蓮多糖較浙江金線蓮多糖更能起到保護作用,顯著延長線蟲壽命,推測可能有原因為多糖中含有多種組分,臺灣金線蓮的多糖組分在0.6 μg/μL濃度時的配比比浙江金線蓮能顯著延長線蟲壽命。金線蓮多糖對線蟲壽命影響的結果與通過測定羥自由基清除率反映的臺灣金線蓮多糖和浙江金線蓮多糖的抗氧化性存在一定差異,推測可能原因為在線蟲模型中,多糖僅作用于線蟲表皮,作用結果與多糖的具體空間結構和化學性質無明顯聯系,而在體外抗氧化性的實驗中,多糖的抗氧化性可能與多糖的空間結構和化學組成相關,造成了這兩種方法在檢測臺灣金線蓮和浙江金線蓮多糖的抗氧化活性方面表現出差異。

本研究顯示采用溶劑提取法提取金線蓮多糖最為有效,浙江金線蓮的多糖含量及清除羥自由基能力均優于臺灣金線蓮,兩種金線蓮多糖均可延長處于過氧化氫氧化壓力條件下秀麗隱桿線蟲的壽命。研究結果為金線蓮基原植物的利用、培育提供了參考,為研究植物多糖的抗衰老功效提供了新方法。為進一步研究金線蓮多糖對延長壽命的作用機制奠定了基礎。

參考文獻:

[1]SHYUR,CHIHHUAI C,CHIUPING L,etal.Induction of apoptosis in MCF7 human breast cancer cells by phytochemicals fromAnoectochilusformosanus[J].JournalofBiomedScience,2004,11:928-939.

[2]施滿容,龔林光,鐘幼雄.不同來源金線蓮活性成分含量的研究 [J].安徽農業科學,2014,42(28):9 731-9 734.

SHI M R,GONG L G,ZHONG Y X.Research of activity components in differentAnoectochilusroxburghii[J].JournalofAnhuiAgriculturalSciences,2014,42(28):9 731-9 734.

[3]崔仕超.金線蓮活性物質的提取及生理活性的研究[D].廣東汕頭:汕頭大學,2010.

[4]WANG X X,HE J M,etal.Simultaneous structure identification of nature products in fractions of crude extract of the rare endangerd plantAnoectochilusroxburghiiusing1H NMR/RRLC-MS parallel dynamic spectroscopy[J].InternationalJournalofMolecularSciences,2011,12:2 556-2 571.

[5]許平.黃瓜多糖抗氧化活性研究[J].重慶工商大學學報(自然科學版),2009,26(1):54.

XU P.Study on the antioxidative activities of polysaccharides fromCucumissaticusL.[J].JournalofChongqingTechnologyandBusinessUniversity(Natural Science Edition),2009,26(1):54.

[6]謝明勇,聶少平.天然產物活性多糖結構與功能研究進展[J].中國食品學報,2010,10(2):5-7.

XIE M Y,NIE S P.A review about the research of structure and function of polysaccharides from nature products[J].JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnology,2010,10(2):5-7.

[7]張賽男.不同地區金線蓮多糖含量對比研究[J].北京農業,2014,33:1.

ZHANG S N.Comparison study on thepolysaccharide content ofAnoectochilusin different regions[J].BeijingAgriculture,2014,33:1.

[8]范琳.金線蓮多糖的提取及其藥理作用研究概述[J].生物技術世界,2014,11:71.

FAN L.Research aboutAnoectochiluspolysaccharide extraction and pharmacological[J].BiotechWorld,2014,11:71.

[9]石磊.幾種多糖的分離純化,結構解析和生物活性研究[D].濟南:山東大學,2007.

[10]馮惠萍,杜瑞凝,張珍英.動力學分光光度法測定中藥多糖對羥自由基的清除率[J].中國現代應用藥學,2010,2(27):138-140.

FENG H P,DU R N,ZHANG Z Y.Determination of hydroxyl free radical clearance rate of Chinese medicine polysaccharide by kinetic spectrophotometric method[J].ChineseJournalofModernAppliedPharmacy,2010,2(27):138-140.

[11]唐曉明.香豆素對秀麗隱桿線蟲抗氧化作用的研究[D].長春:長春理工大學,2012.

[12]白紅進,汪河濱,褚志強,等.不同方法提取黑果枸杞多糖的研究[J].食品工業科技,2007,3:145-146.

BAI H J,WANG H B,etal.Study on the extraction of polysaccharide from black fruits with different methods[J].ScienceandTechnologyofFoodIndustry,2007,3:145-146.

[13]翁梁,溫魯,楊芳,等.不同提取方法對蛹蟲草多糖抗氧化性的影響[J].食品科技,2008,33(11):180-182.

WENG L,WEN L,YANG F,etal.Empirical study of different extraction methods influence on the antioxidation of polysaccharide in cordyceps militaris[J].FoodScienceandTechnology,2008,33(11):180-182.

[14]王娜娜,薛培鳳,魏慧,等.百合科藥用植物多糖研究進展[J].北方藥學,2013,10(9):46-47.

WANG N N,XUE P F,WEI H,etal.Research on Polysaccharide of medicinal plants in the lily family[J].NorthernMedicine,2013,10(9):46-47.

[15]曲有樂,李 明,李憲剛,等.海藻多糖片中多糖含量測定[J].浙江海洋學院學報(自然科學版),2009,28(1):91-98.

QU Y L,LI M,LI X G,etal.Determination of polysaccharide in seaweed polysaccha-ride tablets[J].JournalofZhejiangOceanUniversity(Natural Science Edition),2009,28(1):91-98.

[16]楊 全,王文全,魏勝利,等.甘草不同類型間總黃酮、多糖含量比較研究[J].中國中藥雜志,2007,32(5):445-446.

YANG Q,WANG W Q,etal.Comparison study of total flavonoids and polysaccharides of different types of licorice[J].ChinaJournalofChineseMateriaMedica,2007,32(5):445-446.

[17]吳佳溶.不同地理種源金線蓮有效成分含量測定及SRAP標記[D].福州:福建農林大學,2012.

[18]高大文,李偉光,高 艷,等.秀麗隱桿線蟲在植物提取物抗氧化活性研究中的應用[J].軍事醫學,2013,4(37):315-317.

GAO D W,LI W G,GAO Y,etal.Caenorhabditiselegans:a model organism for studies of antioxidant activity of plant extracts[J].MilitaryMedicalSciences,2013,4(37):315-317.

[19]林麗清,黃麗英,鄭艷潔,等.金線蓮多糖的提取及清除氧自由基作用的研究[J].福建中醫學院學報,2006,16(5):37.

LIN L Q,HUANG L Y,ZHENG Y J,etal.Study on extraction of polysaccharide fromAnoectochilusformosanusand its effect of removal of oxygen free radicals[J].JournalofFujianCollegeofTraditionalChineseMedicine,2006,16(5):37.

[20]陳瑗,周玫,劉尚喜,等.營養,衰老與自由基理論[J].營養學報,2005,27(3):177.

CHEN Y,ZHOU M,LIU S X,etal.Nutrition,aging and free radical theory[J].ActaNutrimentaSinica,2005,27(3):177.

[21]趙晴,將湉湉.秀麗隱桿線蟲研究綜述[J].安徽農業科學,2010,38(19):10 092-10 093.

ZHAO Q,JIANG T T.Overview of the nematodeCaenorhabditiselegans[J].JournalofAnhuiAgriculturalSciences,2010,38(19):10 092-10 093.

(編輯:潘新社)

Comparison Study of Polysaccharide Content and Antioxidant Activity ofAnoectochilusformosanusandAnoectochiluszhejiangensis

TANG Nannan1,TAO Jiaqing1,CHEN Changli2,JIN Guanrong2,LI Shan1*,CHENG Zhou1

(1 School of Life Sciences and Technology of Tongji University,Shanghai 200092,China;2 Zhejiang Xiaoshan Cotton and Fiber Bast Institute,Hangzhou 311217,China)

Abstract:Anoectochilus formosanus and Anoectochilus zhejiangensis are Anoectochilus plants,they are main original plants of Anoectochilus roxburghii that is common folk rare herbs and they are rich in polysaccharide.The study extracted polysaccharide of Anoectochilus formosanus and A.zhejiangensis using ultrasonic extraction Ⅰ,Ⅱ,solvent extraction methods to compare polysaccharide content;we use colorimetry method to compare hydroxyl free radical clearance ability of the two A.roxburghii.We use Caenorhabditis elegans as a model organism to study the effects of two A.formosanus polysaccharide on lifetime of Caenorhabditis elegans under oxidative stress,then we can evaluate antioxidant activity of A.formosanus and A.zhejiangensis.The results show that:(1)the solvent extraction method is the most effective method to extract polysaccharide of A.roxburghii,polysaccharide content of Anoectochilus zhejiangensisis significantly higher than that of A.formosanus.(2)With the increase of polysaccharide concentration,hydroxyl free radical clearance rate has a tendency to rise,the hydroxyl free radical clearance rate of Anoectochilus zhejiangensis polysaccharide is significantly higher than that of A.formosanus polysaccharide.(3)Both kinds of Anoectochilus polysaccharide can prolong the lifetime of C.elegans,but the impact of two kinds of polysaccharide to the lifetime of C.elegans is not obviously different.The results show that both kinds of Anoectochilus are rich in polysaccharide and have antioxidant activity,but the polysaccharide content and antioxidant activity of the two kinds Anoectochilus are different.The results lay a good foundation for the further study of choosing and cultivating the best origin A.roxburghii.

Key words:Anoectochilus roxburghii;polysaccharide;antioxidant;Caenorhabditis elegans life span

中圖分類號:Q946.3;Q946.8

文獻標志碼:A

作者簡介:唐楠楠(1990-),女,在讀碩士研究生,主要從事金線蓮藥用植物的研究。E-mail:tiantiande9042@163.com*通信作者:李珊,博士,副教授,主要從事植物資源保護利用研究。E-mail:lishanbio@tongji.edu.cn

基金項目:杭州市科技發展計劃(20140932H21);上海市自然科學基金(12ZR1432900)

收稿日期:2015-11-30;修改稿收到日期:2016-02-26

文章編號:1000-4025(2016)03-0521-06

doi:10.7606/j.issn.1000-4025.2016.03.0521