奇林古丹液對免疫功能低下小鼠的影響

張秋墨 洪華 金丹

【摘要】[目的]觀察奇林古丹液對免疫功能低下模型小鼠的影響，探究奇林古丹液的免疫調節作用。[方法]選用昆明種小鼠，隨機分3組，正常對照組、模型組和實驗組，模型組和實驗組小鼠腹腔注射環磷酰胺注射液，建立免疫功能低下模型，觀察奇林古丹液對血清半數溶血素值及脾臟細胞生成抗體功能的影響。[結果]奇林古丹液明顯提高血清半數溶血素值，提升脾臟細胞生成抗體的功能。[結論]奇林古丹液能明顯增強免疫功能低下小鼠的免疫功能。

【關鍵詞】奇林古丹液；免疫功能低下；溶血素

1 材料與方法

1.1 材料

奇林古丹液，由原河南省微生物學會腫瘤免疫治療研究所提供。昆明種小鼠，雄性，6～7周，體重18～22g，由延邊大學實驗動物中心提供。注射用環磷酰胺為江蘇恒瑞醫藥股份有限公司產品，紅細胞裂解液購于Beyotime公司，豚鼠血清購于北京solarbio公司，都氏試劑（碳酸氫鈉1.0g，氰化鉀0.8g，高鐵氰化鉀0.2g， 蒸水至1L），核蛋白定量分析儀：美國Bio-Rad公司生產，電熱恒溫培養箱：美國SHELLAB公司生產。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組與給藥

將小鼠隨機分為正常對照組，模型組和實驗組，將小鼠的胸前區和兩側前肢腕部去毛后，涂抹奇林古丹液1號液，胸前區70 l，前肢各25l，共120l/只。對照組和模型組涂抹生理鹽水。實驗第 6 天涂抹奇林古丹液2號液，方法同前。模型組和實驗組小鼠在實驗第7天腹腔注射環磷酰胺100 mg/kg，連續3天，正常對照組注射等量生理鹽水。

1.2.2 血清溶血素的測定

造模前一天，給小鼠腹腔注射20%綿羊紅細胞懸液200l/只。48h后取血，室溫放置1h，2000rpm/min，離心20min，收集血清。用生理鹽水稀釋200倍，取稀釋的血清1ml于試管中，依次加入5%綿羊紅細胞懸液0.5ml，1：10稀釋的豚鼠血清1ml，搖勻。將試管置37℃電熱恒溫箱中1h。取出后立即放入冰浴中，終止反應。各試管2000rpm/min，離心20min，取1ml上清液移入另一試管中后再加入3ml都氏試劑，混勻，置室溫10min。以1ml的生理鹽水代替血清樣本，其余操作均相同，此試管做樣品空白對照。取5%綿羊紅細胞懸液0.25ml，加入3.75ml都氏試劑，混勻，置室溫10min，此試管做為綿羊紅細胞的半數溶血管。以對照管做空白，測定各管光密度值A540。血清溶血素含量以半數溶血（HC50）來表示。

1.2.3定量溶血分光光度法

造模前一天給小鼠腹腔注射2%綿羊紅細胞懸液200l/只。造模完成48h后，處死小鼠，取脾臟，用生理鹽水制備2×106 細胞/ml的脾細胞懸液。另取試管，每個試管中依次加入脾細胞懸液、0.2%綿羊紅細胞懸液、1：10稀釋的補體1ml，充分混勻，置37℃水浴箱，溫育1h后，3000rpm/min，離心10min，取上清液，測定光密度A413值。

1.2.4 脾臟細胞懸液的制備

頸椎脫臼法處死小鼠，取出脾臟，置于盛有適量生理鹽水的培養皿中，反復研磨得單細胞懸液后，移入50ml離心管中，1000rpm離心15min，棄上清，吹打混勻，加入5倍量（約2ml）紅細胞裂解液裂解6min，用適量生理鹽水終止裂解后，1000rpm離心10min，棄上清，吹打混勻，過70μm細胞篩，細胞計數，配制成2×106 細胞/ml的細胞懸液。

1.2.5 統計學處理

所有數值均以均數±標準偏差表示，采用SPSS20.0軟件進行數據分析，組間的比較用獨立樣本t檢驗，當P<0.05時，證明組間存在顯著性差異，反之則沒有統計學意義。

2 結果

2.1 對免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響

實驗組（4.49 0.65）和模型組（3.16 0.37）小鼠血清溶血素均低于正常組（15.52 0.87），實驗組明顯高于模型組有顯著性差異（P0.01）（見圖1）。

圖1：奇林古丹液對免疫低下小鼠血清溶血素的影響.（n=6， #表示與正常組比較 P<0.01，*表示實驗組與模型組比較 P<0.01）

2.2對免疫功能低下小鼠分泌抗體的影響

實驗組（3.03 0.012）和模型組（0.28 0.003）小鼠脾臟細胞分泌抗體能力明顯低于正常組（0.31 0.003），有顯著性差異（P0.01）。但實驗組與模型組比較抗體產生細胞明顯增加，有顯著性差異（P0.05）（見 圖 2）。

3 討論

本實驗采用免疫功能低下小鼠模型觀察了奇林古丹液的免疫效應，研究結果顯示，奇林古丹液可有效提高環磷酰胺所致免疫功能低下小鼠的HC50值和脾臟細胞中抗體分泌細胞水平，表明奇林古丹液有增強體液免疫功能。

本研究所用的奇林古丹液給藥途徑操作簡便，用藥劑量少，給藥時間短，說明該藥使用于臨床上，患者可得到提高機體免疫功能的效果。研究結果提示，奇林古丹液作為免疫增強劑，具有巨大的研究價值與應用前景，為進一步開發應用提供了實驗依據。

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