大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇病原真菌的抑制作用及對平菇生長的影響

段奧其　楊亞苓　湯慧盟　呂祚森　國淑梅　周軍　牛貞福

摘要：采用抑菌圈法研究了大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇（Pieurotus ostreatus）病原真菌的抑制作用，用出菇試驗法測定了混合提取液對平菇菌絲體和子實體生長的影響。結果表明，在pH9時，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質量比例的混合提取液抑制平菇病原真菌效果最好，與對照相比增產31.40%，縮短了采菇間隔。大蒜、生姜、苦瓜以4.5：4.5：1.0質量比例提取12h，pH為8、9時混合提取液抑菌效果最好，加入提取12h混合提取液的菌袋增產35.84%，縮短了采菇間隔，增大了蓋柄比，提高了商品性。

關鍵詞：混合提取液；平菇（Pieurotus ostreatus）；病原真菌；抑制作用

中圖分類號：S646.1⁺4 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）09-2283-04

平菇（Pleuyotus ostreatus）屬側耳科側耳屬，是中國栽培最為廣泛的食用菌之一。目前平菇生產以農戶分散栽培為主，栽培管理不規范，生產過程中易受細菌、真菌為害，菇農常用多菌靈、百菌清等化學藥劑進行防治，給食用菌產品帶來一定的安全隱患。

研究表明，大蒜、生姜、苦瓜等的提取液對細菌、真菌具有一定的抑制作用。為此。本試驗以大蒜、生姜、苦瓜的混合提取液對平菇生產中的主要病原真菌進行室內抑菌測定和平菇生產試驗，以期為相關生物農藥的開發應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

大蒜為脫毒品種，苦瓜為航天九號（F₁），均取自山東農業工程學院校內實習基地：生姜為山東綿姜，山東萊蕪生產。

真菌為青霉（Penicillium）、木霉（T.viride）、擬青霉（Paecilomyces）、枝孢霉（Cladosporium）。

平菇為德豐5號，由禹城市清香園蔬菜種植專業合作社提供。

1.2 方法

1.2.1 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的制備 用食品加工機將大蒜（鮮）、生姜（鮮）、苦瓜片（干）按照一定比例勻漿或粉碎。與乙酸乙酯（AR）按照質液比（m/V）1：1的比例置于28℃下恒溫振蕩一定時間，轉速120r/min。其中大蒜、生姜、苦瓜質量比例分別為4：4：2、5：4：1、4：5：1、4，5：4，5：1.0，提取時間為24h；大蒜、生姜、苦瓜比例為4.5：4.5：1.0的提取時間為4、6、12、24、36、48h；不加乙酸乙酯的為空白對照（CK）：用乙酸乙酯浸泡的濾片為對照（CK1）。最后用抽濾裝置抽濾得大蒜、生姜、苦瓜混合提取液，置于4℃冰箱內保存備用。

1.2.2 真菌菌懸液的制備 將上述真菌菌株分別經PDA培養基純化、活化培養后。用無菌生理鹽水進行梯度稀釋，菌體濃度為10⁵-10⁶cfu/mL，置于4℃冰箱內保存備用。

1.2.3 不同DH平板的制備 PDA培養基高壓滅菌后，在45℃左右用NaOH調pH至7、8、9，無菌條件下倒入直徑90mm的培養皿中即可。

1.2.4 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液抑菌效果測定 ①用移液槍取0，01mL“1.2.2”中制備的菌懸液于平板上。用無菌涂布棒涂布均勻：⑦用無菌鑷子將滅菌后的濾紙片（直徑6mm，用大蒜、生姜、苦瓜混合提取液充分浸泡20min再晾干）貼入涂菌的平板內：③將平板倒置在24℃生化培養箱中培養48h。采用十字交叉法測量抑菌圉直徑。3次重復。

1.2.5 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇生長的影響 ①平菇栽培料配方：棉子殼90%，麥麩5%，石灰3%，石膏2%，料水比1.0：1.2：培養料中分別加入培養基含水量1%的大蒜、生姜、苦瓜不同質量比例（提取24h）的混合提取液、不同提取時間（大蒜、生姜、苦瓜質量比4.5：4.5：1.0）的混合提取液，不加混合提取液的為對照（CK2）：各處理水分（包括對照）調節一致后拌勻。⑦按4層菌種3層料的方式把平菇菌種接至17cm×45cm×0，04cm的聚乙烯塑料袋中。③測定混合提取液對平菇菌絲及子實體生長的影響。5次重復。

1.3 分析方法

試驗數據用DPS統計軟件進行分析。

2 結果與分析

2.1 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇病原真菌的抑制作用

2.1.1 不同比例大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇病原真菌的抑制作用 從表1可以看出，提取溶劑乙酸乙酯和CK對4種病原真菌均無抑菌效果：大蒜、生姜、苦瓜不同質量比例的混合提取液對4種病原真菌都有抑制作用，不同處理的抑菌效果有一定差異。4.5：4.5：1.0質量比例的混合提取液抑制效果較好，其次為比例4：5：1。

DH對大蒜、生姜、苦瓜不同比例混合提取液的抑菌效果也有一定影響，從表1可以看出，pH為9時對平菇病原真菌抑制效果最好。

2.1.2 不同提取時間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇病原真菌的抑制作用 表1結果表明，4.5：4.5：1.0質量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液抑菌效果最好，故選用此比例進行不同提取時間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的抑菌試驗。從表2可以看出，提取溶劑乙酸乙酯對平菇病原真菌無抑菌效果；大蒜、生姜、苦瓜不同提取時間的混合提取液對4種真菌都有抑制作用，其中以提取12h的抑菌效果較好。

pH對不同提取時間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的抑菌效果也有一定影響，混合提取液pH為8時，對青霉、枝孢霉抑菌效果較好，pH為9時對木霉、擬青霉抑制效果較好。

2.2 大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇生長的影響

2.2.1 不同質量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇生長的影響

1）對菌絲生長的影響。從圖1可以看出，不同質量比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇菌絲的生長均有影響，其中比例為4：5：1時平菇菌絲生長速度最快，其次是CK2，再依次為比例5：4：1、4.5：4.5：1.0、4：4：2；但各處理的菌絲生長與CK2相比沒有明顯差異。

2）對平菇子實體的影響。從表3可以看出，大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇的顏色無影響；但不同比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇產量有較大影響，其中比例為5：4：1和4，5：4.5：1.0的混合提取液具有明顯的增產效果，與CK2相比分別增產39.89%和31.40%：比例為4：5：1和4：4：2的混合提取液則表現出一定的減產，與CK2相比分別減產26.75%和43.20%。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇的現蕾時間和采菇間隔有所影響，與CK2相比，比例為4.5：4.5：1，0的處理現蕾晚11d。但采菇間隔縮短27d：大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇的形態有所改變，比例為5：4：1和4.5：4.5：1，0的混合提取液處理的平菇，與CK2相比蓋柄比分別增加7.17%、7.60%。

2.2.2 不同提取時間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇生長的影響

1）對菌絲生長的影響。從圖2可以看出。不同提取時間的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液一定程度上減緩了平菇菌絲的生長速度，但總體上與CK2沒有明顯差異。

2）對子實體的影響。從表4可以看出。大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇的顏色無影響：但不同提取時間的混合提取液對平菇產量的影響較為明顯，與CK2相比，提取時間為6、12、24h的混合提取液處理分別增產33.76%、35.84%和31.40%；提取時間為4、36、48h的處理分別減產31.94%、63.47%和65.41%。

大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0比例的混合提取液。其不同提取時間處理的平菇現蕾時間、采菇間隔和蓋柄比均有差異。與CK2相比，除提取6、12h的處理外，其他處理的現蕾時間均延長，以提取36、4h的處理延長最多，分別為22、12d；采菇間隔與CK2相比均縮短，以提取24、36h的處理縮短最多，分別縮短27、25d；平菇蓋柄比除提取4h的處理外，其他處理均增加，以提取48、36h的處理增加最大，分別增加34.60%、50.74%。

3 小結與討論

試驗結果表明，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質量比例的混合提取液對平菇生產中的病原真菌抑制效果較好，不同比例的大蒜、生姜、苦瓜混合提取液pH為9時抑菌效果較好；大蒜、生姜、苦瓜混合提取液對平菇菌絲生長有一定影響，但與CK2相比差異不顯著；大蒜、生姜、苦瓜5：4：1和4，5：4.5：1.0比例的混合提取液具有明顯的增產效果。與CK2相比，分別增產39.89%和31.40%?？傊?，大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質量比例的混合提取液抑菌效果最好，表現出增產效果?？s短了采菇間隔。增大了蓋柄比。

大蒜、生姜、苦瓜4.5：4.5：1.0質量比例提取12h的混合提取液抑菌效果最好：pH為8、9時抑菌效果較好。平菇菌絲生長與CK2相比無顯著差異。與CK2相比，提取時間為6-24h的混合提取液增產31.40%-35.84%，并縮短了采菇間隔，增大了蓋柄比。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液改善了單一提取液在中性偏堿條件下抑菌效果下降的缺點，并且在5：4：1和4.5：4.5：1.0的比例下分別增產39.89%和31.40%。研究還表明，4.5：4.5：1.0質量比例提取時間為12h的混合提取液抑菌效果較好，增產35.84%，蓋柄比提高5.877%；大蒜、生姜、苦瓜混合提取液在一定程度上延長了平菇的現蕾時間，在生產時提前15d種菇，不會影響產品上市：出菇期菇潮間隔縮短8-10d，可縮短平菇的生產周期，減少人力、物力的投入。

大蒜、生姜、苦瓜混合提取液的增產機理、延長平菇的現蕾時間和縮短菇潮間隔的原因，其理化性質如何等有待進一步研究。