海洋魚低聚肽增強(qiáng)骨密度的作用

陳大偉　于蘭

隨著人類數(shù)量的增加，陸生資源的匱乏及污染，海洋漁業(yè)成為我國(guó)近年未發(fā)展速度最快的產(chǎn)業(yè)之一。我國(guó)是一個(gè)海洋大國(guó)，漁業(yè)資源非常豐富，水產(chǎn)品產(chǎn)量約占世界的1/3，海洋魚加工過程中會(huì)產(chǎn)生的大量下腳料，包括皮、骨、鱗、鰭等，其重量占原料魚的40%-60%。這些下腳料含有豐富的蛋白，如果不加以利用，不但造成資源的浪費(fèi)，還會(huì)帶來環(huán)境的污染。海洋膠原蛋白酶解技術(shù)是目前國(guó)內(nèi)研究的熱門領(lǐng)域，崔鳳霞采用風(fēng)味蛋白酶從仿刺參、墨西哥參及菲律賓刺參體壁中提取了膠原蛋白肽；祝靖等研究了海鱸魚膠原蛋白肽的制備分離機(jī)對(duì)皮膚傷口的愈合作用。通過生物酶解技術(shù)，以海洋魚下腳料為原料制備的海洋魚低聚肽，相比蛋白質(zhì)分子量更小，更易于被人體吸收，并且還可以提高海洋水產(chǎn)加工行業(yè)的附加值。本文旨在探究海洋魚低聚肽對(duì)小鼠增加骨密度的作用，為其在補(bǔ)鈣產(chǎn)品中的應(yīng)用提供依據(jù)。

海洋魚低聚肽的制備

海洋魚下腳料中主要成分的為膠原蛋白，水解后制備的低聚肽，更易于被人體吸收，具有很多重要的生理功能。水解蛋白質(zhì)有酸法、堿法和酶法三種方式，酶法水解制備低聚肽反應(yīng)條件溫和，其產(chǎn)物無任何毒副作用，安全可靠，本文選用鱈魚皮為原料，高溫高壓進(jìn)行蛋白質(zhì)變性后，采購堿性蛋白酶和中性蛋白酶進(jìn)行梯度酶解，其制備工藝如下：

海洋魚下腳料→脫脂→高溫變性→酶解→脫色脫腥→過濾→真空濃縮→瞬時(shí)滅菌→噴霧干燥。

海洋魚低聚肽增強(qiáng)密度功能評(píng)價(jià)

材料

（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)雌性SD大鼠，60-80g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018。

（2）動(dòng)物飼料：低鈣飼料按低鈣飼料配方配制，鈣質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為0.1%。

（3）樣品及配制：陽性對(duì)照組為碳酸鈣，準(zhǔn)確稱取4g碳酸鈣，加去離子水至100ml；樣品組準(zhǔn)確稱取2.5g、5g、10g海洋魚皮低聚肽（相當(dāng)于人體劑量的5倍、10倍、20倍），加入去離子水至100ml。

（4）主要儀器：原子吸收分光光度計(jì)、SD-1000C骨礦物質(zhì)測(cè)量?jī)x，電子天平。

實(shí)驗(yàn)方法

分別給予受試動(dòng)物灌胃，每天灌胃一次，灌胃體積為1.0ml/100g·bw，低鈣對(duì)照組給予等體積的去離子水，連續(xù)灌胃三個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)：每周稱量體重和身長(zhǎng)。

股骨重量級(jí)骨密度測(cè)定：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，斷頭處死大鼠，剝離右股骨，經(jīng)105℃烘箱烤至恒重，冷卻至室溫后，稱取股骨重量，測(cè)量股骨的骨密度。

骨鈣含量的測(cè)定：用原子吸收分光光度法測(cè)定骨鈣含量。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：采用SPSS（11.0）軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差標(biāo)示（r±s）。

結(jié)果判定：陽性對(duì)照組的骨鈣含量或骨密度顯著高于低鈣劑量組，給予受試物組的骨鈣含量或骨密度顯著高于陽性對(duì)照組，可判定受試物具有增加骨密度的作用。

結(jié)果

（1）海洋魚低聚肽粉對(duì)大鼠體重的影響

由表1可知，各實(shí)驗(yàn)組大鼠起始重量體重?zé)o顯著性差異（P>0.05）；各劑量組大鼠的末期體重和體重增加值與低鈣相比差異沒有顯著性（P>0.05）。

（2）海洋魚低聚肽對(duì)大鼠股骨的影響

由表2可知，碳酸鈣組大鼠右股骨骨重、左股骨骨密度較低鈣組有顯著性差異（P<0.05）；各劑量組大鼠的右股骨骨重、骨鈣含量和左股骨骨密度較低鈣組具有顯著性或極顯著性差異（P<0.05，P<0.01），并且各劑量組大鼠的左股骨骨密度和右股骨骨鈣含量與碳酸鈣組對(duì)比有顯著性差異（P<0.05）

（3）功能評(píng)價(jià)結(jié)果

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，海洋魚低聚肽3個(gè)劑量組和碳酸鈣陽性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)后體重較低鈣劑量組無顯著性差異（P>0.05），說明海受試物對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)無不良影響；受試物的三個(gè)劑量組在右股骨骨重、骨鈣含量和左股骨骨密度較低鈣對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05，P<0.01），因此，根據(jù)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，海洋魚低聚肽具有增加骨密度的功能。

結(jié)論

在我國(guó)，海洋漁業(yè)資源相當(dāng)豐富，通過酶解純化技術(shù)從魚下腳料中提取的低聚肽，具有多種功能活性。朱翠鳳等通過觀察海洋魚膠原肽對(duì)高血壓患者脂肪內(nèi)分泌激素表達(dá)的影響，結(jié)果顯示海洋魚膠原肽可抑制或促進(jìn)脂肪內(nèi)分泌激素的表達(dá)而發(fā)揮降血壓、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用；裴新榮等研究了海洋魚低聚肽抗皮膚老化作用的實(shí)驗(yàn)研究，證明了具有抗皮膚老化的作用，王靜鳳等研究魷魚皮膠原蛋白肽對(duì)B16黑素瘤細(xì)胞黑素合成的影響，證明具有美白作用；王波軍等對(duì)海洋膠原肽的分子組成及其降血脂和抗氧化作用研究發(fā)現(xiàn)其具有降血脂和抗氧化的做用。本文研究的海洋魚低聚肽增加骨密度的作用，對(duì)于改善我國(guó)中老年人骨質(zhì)疏松有十分重要的意義，也擴(kuò)展了其在功能性食品中的應(yīng)用。