不同處理方法對金花茶組培苗不定根發生的影響

李桂娥， 文 萍， 李志輝， 蔣昌杰， 羅燕英， 黃連冬

(南寧市金花茶公園，廣西南寧 530022)

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不同處理方法對金花茶組培苗不定根發生的影響

李桂娥， 文 萍， 李志輝， 蔣昌杰， 羅燕英， 黃連冬*

(南寧市金花茶公園，廣西南寧 530022)

摘要[目的]篩選金花茶組培苗的最適生根培養條件。[方法]以金花茶組培苗為材料，研究不同激素處理、不同生根培養基、不同形態MW培養基對金花茶組培苗生根的影響。[結果]就促生根激素而言，500 mg/L IBA溶液浸泡處理效果較好，其生根率達82.5%，顯著優于NAA；就基礎培養基而言，MW培養基的生根效果更好，其生根率是1/2MS培養基的1.5倍；固體培養和濾紙橋液體培養同樣都能誘導不定根產生，且生根率相當，不定根都較發達，側根多。[結論]將金花茶無菌苗基部浸泡于500 mg/L IBA溶液后，轉接于MW固體培養基進行生根培養，效果最好。

關鍵詞金花茶；組培苗；不定根發生；生根率

20世紀60年代初，我國廣西首次發現金花茶(Camellianitidissima)，其屬山茶科山茶屬金花茶組植物，是一種喜陰濕環境的常綠闊葉植物[1]，被譽為“茶族皇后”以及“植物界的大熊貓”[2]。金花茶的花朵具有金黃色蠟質，因其含有特殊的黃色遺傳基因，是培育黃色山茶新品種的重要遺傳資源[3]，被公認為是茶科植物中最珍貴的品種之一，已被引種到日本、澳大利亞及北美等地。近年來，金花茶因其具有較強的抗氧化能力和自由基清除能力而受到廣泛關注[4]。

隨著金花茶價值不斷被開發利用，對金花茶苗木的需求量迅速增加，傳統的育苗方法已無法滿足市場需求，能在短期內實現大量繁殖的金花茶組織培養技術備受矚目。雖然關于金花茶組培快繁已有一些研究，但對于木本植物而言，組織培養生根難度較大，無菌苗能否生根是組培快繁成功與否的關鍵[5]。筆者針對金花茶組培苗生根難的問題，探討不同處理方法對金花茶組培苗生根的影響，以期獲得金花茶無菌苗瓶內生根的最佳培養方法，為金花茶大規模生產提供理論依據。

1材料與方法

1.1材試驗料供試材料為筆者前期試驗獲得的長勢健壯、4～6 cm高的金花茶無菌苗。

1.2試驗方法

1.2.1不同促生根激素處理。誘導生根培養基以MW培養基為基本培養基，其主要成分：KNO380 mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 150 mg/L，MgSO4·7H2O 350 mg/L，NaH2PO4·H2O 100 mg/L，KCl 65 mg/L，Na2SO4200 mg/L，KI 0.83 mg/L， H3BO3 6.2 mg/L， MnSO4·4H2O 22.3 mg/L， ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L，Na2Mo4·H2O 0.025 mg/L， CuSO4·5H2O 0.025 mg/L， CoCl2·6H2O 0.025 mg/L， FeSO4·7H2O 27.8 mg/L， Na2EDTA·7H2O 37.3 mg/L，維生素B11 mg/L,維生素B61 mg/L,煙酸1 mg/L， 肌醇 20 mg/L，甘氨酸 2 mg/L， 蔗糖20～40 g/L，瓊脂 6～7 g/L。

處理方法1：先將金花茶無菌苗基部浸泡于500 mg/L IBA溶液中20 min，而后轉接于生根培養基中進行生根培養。生根培養基以MW為基本培養基，添加蔗糖20 g/L和瓊脂7 g/L，pH 5.8。處理方法2：將金花茶無菌苗直接轉接至含有5 mg/L IBA的誘導生根培養基中，生根培養基以MW為基本培養基，附加5 mg/L IBA，20 g/L蔗糖，7 g/L瓊脂，pH 5.8。處理方法3：將金花茶無菌苗直接轉接至含有NAA的誘導生根培養基中，生根培養基以MW為基本培養基，分別附加2、4、8 mg/L NAA，20 g/L蔗糖，7 g/L瓊脂，pH 5.8。

1.2.2不同培養基處理。將用500 mg/L IBA溶液浸泡基部20 min的金花茶無菌苗轉接于2種誘導生根培養基中進行生根培養。2種誘導生根培養基分別以MW和1/2MS為基本培養基，同時添加蔗糖20 g/L和瓊脂7 g/L，調整pH為5.8。MS培養基配方：除大量元素含量不同外，其他元素與MW培養基相同，大量元素含量：KNO31 900 mg/L，NH4NO31 650 mg/L， CaCl2·2H2O 440 mg/L ，MgSO4·7H2O 370 mg/L，KH2PO4170 mg/L。 1/2MS培養基為MS的大量元素減半，其他成分不變。

1.2.3不同形態培養基接種處理。先將金花茶無菌苗基部浸泡于500 mg/L IBA溶液中20 min，而后轉接于以下2種生根培養基中進行生根培養。固體培養基：以MW為基本培養基，附加蔗糖20 g/L和瓊脂7 g/L，調整pH為5.8。濾紙橋液體：以MW為基本培養基，附加蔗糖20 g/L，調整pH為5.8。

1.3培養條件以上生根培養均在植物組培室采用日光燈照射進行光照培養，光照時間16 h/d，光照強度2 000～3 000 lx，溫度(25±2)℃。接種培養后，統計不同處理金花茶組培苗的生根率，并觀察記錄組培苗的生長情況。為了確保試驗結果的可靠性，每個處理至少50個重復。

2結果與分析

2.1不同激素處理對金花茶組培苗生根的影響接種培養42 d后，觀察并統計不同激素處理的金花茶組培苗生根和生長情況，結果見表1和圖1。由表1和圖1可知，在5種不同處理中，浸泡500 mg/L IBA后轉接于無激素的MW培養基的無菌苗生根率最高，達82.5%，且根系呈輻射狀，不定根發達，側根較多較長，組培苗生長健壯(圖1A)。其次是培養基中添加5 mg/L IBA的處理，其生根率為35.6%，不定根短小且少，無菌苗長勢良好(圖1B)。培養基中添加NAA的處理效果均不佳，3種濃度的生根率均很低，基部均有愈傷組織產生，不定根短小，且均由愈傷組織上長出，組培苗長勢較弱，葉子卷曲，嚴重的甚至脫落(圖1C、D)。

表1　不同激素處理的金花茶組培苗生根和生長情況

注：接種體外植體50個。

Note：There are 50 inoculation explants.

注：A.無菌苗經IBA浸泡后在MW培養基上；B.無菌苗直接接種至添加5 mg/L IBA的MW培養基中;C.無菌苗直接接種至添加2 mg/L NAA的MW培養基中;D.無菌苗直接接種至添加(4或8 mg/L)NAA的MW培養基中。Note: A. The aseptic plantlets soaked in IBA and inoculated in MW culture; B. The aseptic plantlets inoculated in MW medium with 5 mg/L IBA; C. The aseptic plantlet inoculated in MW medium with 2 mg/L NAA; D. The aseptic plantlet inoculated in MW medium with NAA (4 or 8 mg/L).圖1　不同激素處理金花茶組培苗生根和生長情況Fig.1　The rooting and growth condition of tissue culture plantlets of C. nitidissima under different rooting hormone treatments

2.2不同生根培養基對金花茶組培苗生根的影響將經5 mg/L IBA浸泡處理的金花茶無菌苗接種于不同生根培養基中，培養42 d后，觀察并統計不同培養基上金花茶組培苗的生根和生長情況，結果見表2。由表2可知，MW培養基的生根效果較好，生根率為73.6%，是1/2MS培養基的1.5倍，且在MW培養基上組培苗長勢更好，生長健壯，并有新葉長出，不定根均呈輻射狀。

2.3不同形態MW培養基對金花茶組培苗生根的影響將經IBA浸泡處理的金花茶無菌苗分別接種于MW固體培養基和MW濾紙橋液體培養基，培養90 d后，觀察并統計金花茶組培苗的生根和生長情況，結果見表3和圖2。由表3和圖2可知，MW培養基的形態對金花茶組培苗生根率影響較小，2種形態的培養基中金花茶組培苗生根率均在84.0%左右，根系呈輻射狀，須根多且發達，生長健壯，但在液體培養基中，組培苗的不定根略多而長，且根系更粗壯發達。

表2不同生根培養基對金花茶組培苗生根和生長的影響

Table 2The effects of different rooting medium on rooting and growth ofC.nitidissimatissue culture plantlets

培養基Culturemedium生根率Rootingrate∥%組培苗生長情況GrowthsituationoftissuecultureplantletsMW73.60長勢健壯,有新葉長出1/2MS49.15長勢良好

注：接種體外植體50個。

Note：There are 50 inoculation explants.

3結論與討論

金花茶組培苗不定根發生需要外源生長素的誘導，NAA和IBA是常用的生長素[6]。不同促生根激素處理試驗結果表明，當生根處理激素采用NAA時，生長一段時間后，在培養基與外植體的接觸面上易產生愈傷組織，葉子卷曲，嚴重時葉子脫落；而采用IBA浸泡處理生根效果好，且組培苗長勢好。因此，對于金花茶而言，IBA的促生根效果顯著優于NAA，同時高濃度IBA短時間浸泡處理的效果顯著優于將其直接添加到培養基中。這與莊承紀等[7]、梁盛業等[8]的研究結果一致。

表3不同形態培養基對金花茶組培苗生根和生長的影響

Table 3The effects of different morphology culture medium on rooting and growth ofC.nitidissimatissue culture plantlets

培養基形態Culturemedium生根率Rootingrate∥%組培苗生長情況Growthsituationoftissuecultureplantlets固體培養基Solidculturemedium83.2長勢好,苗粗壯濾紙橋液體培養基Filterpaperbridgeliquidculturemedium84.7長勢健壯,葉翠綠

注：接種體外植體50個。

Note：There are 50 inoculation explants.

注：A.MW固體培養基；B.MW液體濾紙橋培養基。Note:A.MW Solid medium; B. Filter paper bridge liquid MW medium. 圖2　不同形態MW培養基上金花茶組培苗的生根情況Fig.2　The rooting of C. nitidissima tissue culture plantlets inoculated in different morphology MW medium

就金花茶組培苗生根效果而言，MW培養基是較為合適的生根培養基，生根率高，幼苗長勢健壯，其效果顯著優于1/2MS培養基。而MW培養基與1/2MS培養基的差異在于大量元素的種類和含量，說明無機鹽濃度不同誘導生根的效果也不同，不定根的發生有其最適濃度。促生根激素和基礎培養基相輔相成，只有在最適無機鹽濃度下，促生根激素才能更好地發揮作用，促進金花茶組培苗不定根又多又好地發生[9]。

山茶科植物組織培養在固體培養基上生根較困難，在以往的生根試驗中多采用濾紙橋液體生根[10]。該試驗結果表明，只要培養基選擇適當，激素配比合適，在固體培養基上同樣可以生根，根系發達，生根率與濾紙橋液體培養相當；濾紙橋液體培養的根系較粗壯，但優勢不明顯，且濾紙橋法操作繁瑣，不利于普及推廣，以采用固體培養生根為宜。

參考文獻

[1] 韋霄,蔣運生,韋記青，等.珍稀瀕危植物金花茶地理分布與生境調查研究[J].生態環境,2007,16(3):895-899.

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[3] 劉林.世界珍稀觀賞植物金花茶[J].廣西林業科學,1997,28(2):94-96.

[4] Lü J F,CHEN R,ZHANG M H,et al.Plant regeneration via somatic embryogenesis and shoot organogenesis from immature cotyledons ofCamellianitidissimaChi[J].J Plant Physiol,2013,170:1202- 1211.

[5] 龔一富.植物組織培養實驗指導[M].北京:科學出版社,2011.

[6] 沈海龍.樹木組織培養微枝試管外生根育苗技術[M].北京:中國林業出版社,2009.

[7] 莊承紀,周建葵.云南山茶莖尖培養中多芽體的形成和生根的研究[J].實驗生物學報，1997,30(1):1-11.

[8] 梁盛業,陸敏珠.中國金花茶栽培與開發利用[M].北京：中國林業出版社,2005.

[9] 黃曉娜,葉品明,黃連冬,等.金花茶組培苗試管外生根研究[J].安徽農業科學,2014(18):5751-5752.

[10] 袁學軍,王志勇.植物組織培養[M].北京:北京師范大學出版社,2011.

Effects of Different Processing Methods on Adventitious Rooting ofCamellianitidissimaTissue Culture Plantlets

LI Gui-e,WEN Ping,LI Zhi-hui,HUANG Lian-dong*et al

(Nanning Golden Camellia Park,Nanning,Guangxi 530022)

Abstract[Objective] The aim was to screen out the optimal rooting conditions for Camellia nitidissima tissue culture plantlets. [Method] With C. nitidissima tissue culture plantlets as materials,effects of different hormone treatments,different rooting culture medium and different morphology MW medium on rooting of C. nitidissima tissue culture plantlets were studied. [Result] The results showed that for promoting rooting hormone,the effect of 500 mg/L IBA solution soaking treatment is better,its rooting rate is as high as 82.5%,significantly better than that of NAA; in terms of basic medium,MW rooting medium is better,the rooting rateis nearly 1.5 times than that of 1/2MS culture medium; solid cultivation and filter paper bridge liquid cultivation can both induce adventitious roots,and their rooting rates are nearly the same,both of them can induce many adventitious roots and lateral roots. [Conclusion] The rooting effect of soaking in 500 mg/L IBA solution and inoculating on MW culture medium is the best.

Key wordsCamellia nitidissima; Tissue culture plantlets; Adventitious rooting; Rooting rate

基金項目南寧市科學技術局科技攻關項目(20132309)。

作者簡介李桂娥(1985- )，女，廣西桂林人，中級工程師，碩士，從事金花茶病理生理學和組織培養研究。

收稿日期2016-03-15

中圖分類號S 603.6

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)10-157-03