黔產(chǎn)吊石苣苔中總黃酮提取工藝優(yōu)化

汪志勇， 劉 紅， 徐 紅*， 江 峰， 朱念南

(1．貴州醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，貴州貴陽 550004；2．貴州醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，貴州貴陽 550004)

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黔產(chǎn)吊石苣苔中總黃酮提取工藝優(yōu)化

汪志勇1， 劉 紅1， 徐 紅1*， 江 峰2， 朱念南1

(1．貴州醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，貴州貴陽 550004；2．貴州醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，貴州貴陽 550004)

摘要[目的]探索黔產(chǎn)吊石苣苔總黃酮的最佳提取工藝條件。[方法]以吊石苣苔總黃酮的提取率為考察指標，以乙醇為提取劑，采用單因素和正交試驗考察了乙醇濃度、料液比、浸提次數(shù)、提取時間對吊石苣苔總黃酮提取率的影響。[結果]吊石苣苔總黃酮的最適宜提取工藝條件是乙醇濃度55%、料液比1∶20、提取時間2 h、浸提2次，在該條件下黔產(chǎn)吊石苣苔總黃酮提取率為5.152%。[結論]該工藝可為吊石苣苔的進一步綜合開發(fā)提供參考。

關鍵詞吊石苣苔；總黃酮；提取工藝；優(yōu)化

吊石苣苔廣泛分布于我國南方，如貴州、云南東部、四川、廣西等省區(qū)[1-2]，生于丘陵或山地溝谷石崖上或樹干上，因其具有清熱、止咳、止血的功效，系貴州省苗族習用藥材[3-4]。研究表明，吊石苣苔化學成分以黃酮類物質為主[5-6]。目前，關于吊石苣苔的研究主要集中在化學成分分析和抑菌活性作用[7-8]，未見吊石苣苔總黃酮提取工藝的相關報道。該研究以吊石苣苔總黃酮的提取率為考察指標，以乙醇為提取劑，采用單因素和正交試驗考察了乙醇濃度、料液比、浸提次數(shù)及提取時間對吊石苣苔總黃酮提取率的影響，探索黔產(chǎn)吊石苣苔總黃酮的最佳提取工藝條件，以期更好地開發(fā)利用吊石苣苔。

1材料與方法

1.1試材吊石苣苔的全草；0.1 mg/mL的蘆丁標準溶液、70%乙醇溶液、1 mol/L NaOH溶液、5%NaNO2溶液、10%Al(NO3)3溶液、石油醚。

1.2儀器TU-1800pc紫外可見分光光度計，北京普析公司； RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠。

1.3方法

1.3.1方法的線性關系。根據(jù)文獻[9-10]方法，分別吸取0.1 mg/mL蘆丁標準溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于10 mL具塞比色管中，依次加入0.30 mL 5%NaNO2溶液、0.30 mL 10%Al(NO3)3溶液、4.00 mL 1 mol/L NaOH溶液，用70%乙醇溶液定容，搖勻后靜置15 min。于510 nm波長處測定吸光度A，以吸光度A為縱坐標、標準溶液濃度C(mg/mL)為橫坐標繪制標準曲線，得到方法的線性回歸方程A=16.694 0C-0.002 2(R2=0.998 3)。

1.3.2提取流程。將吊石苣苔洗凈，低溫烘干，用電動植物粉碎機粉碎。分別稱取5.00 g干燥的吊石苣苔粉末，加入石油醚浸泡24 h，抽濾，濾渣低溫烘干。加入適量的乙醇溶液，控制料液比，對濾渣進行回流提取，抽濾，濾液減壓濃縮，得到吊石苣苔總黃酮粗提物，60 ℃下真空干燥后稱重，記為m粗提物。

1.3.3總黃酮的測定及提取率的計算。稱取吊石苣苔總黃酮粗提物10 mg，用70%乙醇溶解并定容至50.00 mL，作為供試品溶液。量取5.00 mL的供試品溶液(相當于粗提物1 mg)，按“1.3.1”測定溶液的吸光度A，代入標準曲線方程即可換算出1 mg吊石苣苔總黃酮粗提物中總黃酮含量。則吊石苣苔總黃酮提取率的簡化公式為：總黃酮提取率=[(m粗提物×C×V)/5]×100%。

1.3.4單因素試驗。

1.3.4.1乙醇濃度。料液比為1∶10、提取時間1 h、浸提2次，考察乙醇濃度35%、45%、55%、65%、75%對吊石苣苔中總黃酮提取率的影響。

1.3.4.2料液比。用75%乙醇溶液、提取時間1 h、浸提2次，考察料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40對吊石苣苔中總黃酮提取率的影響。

1.3.4.3提取時間。用75%乙醇溶液、料液比1∶10、浸提2次，考察提取時間1、2、3、4 h對吊石苣苔中總黃酮提取率的影響。

1.3.4.4浸提次數(shù)。用75%乙醇溶液、料液比1∶10、提取時間1 h，分別浸提1、2、3、4次，考察提取次數(shù)對吊石苣苔中總黃酮提取率的影響。

1.3.5正交試驗。以總黃酮提取率為考察指標，根據(jù)單因素試驗結果，選取乙醇濃度(A)、料液比(B)、提取時間(C)、浸提次數(shù)(D)為4個考察因素，將各考察因素取3個水平進行了L9(34)正交試驗設計(表1)，篩選最佳提取條件。

表1　吊石苣苔總黃酮的提取因素及水平

圖1　4種不同因素對吊石苣苔中總黃酮提取率的影響Fig. 1　Effects of four factors on the extraction rate of total flavonoids from L. pauciflorus

Table 2Results of orthogonal test on the extraction rate of total flavonoids fromL.pauciflorus

處理TreatmentABCD總黃酮提取率Extractionrateoftotalflavonoids∥%①35%1∶10123.757②35%1∶20234.823③35%1∶30343.350④55%1∶10243.799⑤55%1∶20325.225⑥55%1∶30133.459⑦75%1∶10334.158⑧75%1∶20144.122⑨75%1∶30224.230k13.9773.9043.7794.404k24.1944.7234.2844.147k34.1703.6794.2443.757R0.2171.0430.5050.647

2結果與分析

2.1單因素試驗由圖1可知，當乙醇濃度55%、料液比1∶20、提取時間3 h時提取率最大。因為乙醇濃度太低，料液比低于1∶20，提取時間太短，黃酮類物質的溶出有限。但乙醇濃度太高、料液比>1∶20、提取時間太長，浸出液中非黃酮類物質的濃度也增加，協(xié)同競爭，反而影響黃酮類物質的溶出，且不利于分離過濾。

隨浸提次數(shù)的增加，吊石苣苔總黃酮提取率也逐漸升高，但浸提3、4次得到的提取率差異不顯著，浸提次數(shù)增加不僅浪費試劑，且延長操作時間。綜合考慮選擇浸提2次。

2.2正交試驗由表2中極差分析可知，各主次因素是B>D>C>A,即料液比>浸提次數(shù)>提取時間>乙醇濃度。在所選因素水平下4種因素的優(yōu)化工藝組合為乙醇濃度55%、料液比1∶20、提取時間2 h、浸提2次。

2.3驗證試驗按上述優(yōu)化工藝對黔產(chǎn)吊石苣苔中總黃酮進行提取，3次平行驗證，得到吊石苣苔總黃酮的提取率分別為5.296%、5.147%、5.015%，平均提取率為5.152%，RSD為2.73%。

3結論

該研究以吊石苣苔總黃酮的提取率為考察指標，以乙醇為提取劑，采用單因素和正交試驗考察了乙醇濃度、料液比、浸提次數(shù)及提取時間對吊石苣苔總黃酮提取率的影響，探索黔產(chǎn)吊石苣苔總黃酮的最佳提取工藝條件。結果表明，黔產(chǎn)吊石苣苔總黃酮的最佳提取工藝條件是以乙醇濃度55%為提取溶劑，料液比1∶20、提取時間2 h、浸提2次，在該條件下吊石苣苔總黃酮平均提取率為5.152%。貴州山區(qū)生長有大量的吊石苣苔，該工藝可為吊石苣苔的進一步綜合開發(fā)提供參考。

參考文獻

[1] 中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒:第4冊[M].北京:科學出版社,2002:119.

[2] 中國植物志編委會.中國植物志[M].北京:科學出版社,1990:136.

[3] 馬竣,冉懋雄.貴州苗族醫(yī)藥研究與開發(fā)[M].貴陽:貴州科技出版社,1999：141.

[4] 孫超,張勇民.貴州特有藥用植物資源與可持續(xù)利用評價[J].中草藥,2004,35(11):1311-1315.

[5] 馮衛(wèi)生,李倩,鄭曉珂.吊石苣苔的化學成分研究[J].中國藥學雜志,2007,42(5):337-338.

[6] LIU Y,WANGNER H,BAUER R.Phenylpropanoids and flavonoidglycosides fromLysionotuspauciflorus[J].Phytochemistry,1998,48(2):339-343.

[7] 魏金鳳,陳林,王金梅,等.髯絲蛛毛苣苔和吊石苣苔抗菌活性成分研究[J].中國中藥雜志,2011,36(17):1975-1978.

[8] 汪志勇,江峰,徐紅,等.苗藥吊石苣苔的抑菌活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2015，22(43)：64-66.

[9] 鄭媛媛,李辰,封士蘭,等.油橄欖葉中總黃酮含量測定方法探討[J].光譜學與光譜分析,2011,31(2):547-550.

[10] 王自軍,楊紅兵,齊譽,等.正交設計研究石韋總黃酮和鞣質提取工藝[J].時珍國醫(yī)國藥，2007,18(2):463.

Extraction Process Optimization of Total Flavonoids fromLysionotuspauciflorusGrown in Guizhou Province

WANG Zhi-yong,LIU Hong,XU Hong*et al

(School of Basic Medicine,Guizhou Medical University,Guiyang,Guizhou 550004)

Abstract[Objective] To explore the optimal extraction conditions of total flavonoids from L. pauciflorus. [Method] Extraction rate of total flavonoids from L. pauciflorus was used as the investigation index,single factor test and orthogonal test were carried out by using ethanol as the extraction solvent,so as to research the effects of ethanol concentration,solid-liquid ratio,extraction time and extraction times on the extraction rate of total flavonoids. [Result] The optimal extraction conditions of total flavonoids from L. pauciflorus were as follows: 55% ethanol concentration,1∶20 solid-liquid ratio,3 h extraction time and 2 extraction times. Under these conditions,extraction rate of total flavonoids could reach 5.152%. [Conclusion] This technology provides references for the further comprehensive development of L. pauciflorus.

Key wordsLysionotus pauciflorus; Total flavonoids; Extraction technology; Optimization

基金項目貴州省科技廳聯(lián)合基金[黔科合LH字(2014)7080]；貴州省教育廳自然科學研究青年項目[黔教科研發(fā)(2013)405號]；2015年國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練項目(201510660026)。

作者簡介汪志勇(1981- )，男，貴州遵義人，副教授，碩士，從事天然產(chǎn)物的提取和分離研究。*通訊作者，教授，碩士生導師，從事天然產(chǎn)物的提取和分離研究。

收稿日期2016-03-08

中圖分類號S 567

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)10-163-03