γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10在強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的表達(dá)及其臨床意義

楊　彪， 王　瑤， 趙曉光， 王　磊

(1西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，西安　710077； 2西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科；*通訊作者，E-mail:95244556@qq.com)

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γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10在強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的表達(dá)及其臨床意義

楊彪1， 王瑤2*， 趙曉光1， 王磊1

(1西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，西安710077；2西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科；*通訊作者，E-mail:95244556@qq.com)

摘要：目的 檢測強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者血清中γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)的表達(dá)水平，分析IP-10與疾病的關(guān)系，評價其在AS疾病活動中的臨床意義。方法選取AS活動期患者34例、AS穩(wěn)定期患者24例及體檢健康者46例作為研究對象，采用ELISA法檢測血清中IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平，分析血清IP-10水平與AS各臨床和實驗室指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果AS活動期組及穩(wěn)定期組患者血清IP-10含量水平均顯著高于健康對照組(P<0.05)；IP-10在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(P<0.05)；兩組AS患者血清IL-17、IL-23及TNF-α含量水平均高于健康對照組(P<0.05)；IL-17和TNF-α在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(P<0.05)。相關(guān)性分析表明，AS患者中IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分呈正相關(guān)。結(jié)論血清中IP-10水平可能是AS發(fā)病過程中重要的免疫學(xué)標(biāo)志，檢測IP-10有助于對AS的診斷和病情的評估。

關(guān)鍵詞：γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10；強(qiáng)直性脊柱炎；細(xì)胞因子

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一種與遺傳相關(guān)的自身免疫性疾病[1]，主要侵犯骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織及外周關(guān)節(jié)，致殘率高。AS通常在青壯年發(fā)病，目前病因尚未完全闡明，多數(shù)研究顯示其發(fā)病可能與遺傳、感染及免疫環(huán)境等因素有關(guān)[2]。

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(interferon-γ-inducible protein 10,IP-10)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種在誘導(dǎo)白細(xì)胞遷移至炎癥部位的過程中扮演重要角色的趨化因子。已有研究證實IP-10通過促進(jìn)CD4+T細(xì)胞和F4/80+巨噬細(xì)胞的遷移及上調(diào)滑膜CD4+T細(xì)胞核因子-κB受體活化因子配體表達(dá)等多種方式引發(fā)骨質(zhì)破壞，是風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼兒特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病的重要發(fā)病因素[3-5]。本文以AS患者為研究對象，以健康人作為對照，檢測血清中IP-10含量，結(jié)合IL-17、IL-23和TNF-α的分泌水平，探討IP-10與IL-17、IL-23和TNF-α分泌模式在AS患者致病過程中發(fā)生的變化，為進(jìn)一步了解IP-10的致病機(jī)制提供資料。

1材料與方法

1.1研究對象

研究對象為2014-03～2015-12在我院門診或收治住院中符合2010年中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病分會制定的《強(qiáng)直性脊柱炎診斷及治療指南》[6]中疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者58例，按照強(qiáng)制性脊柱炎疾病活動指數(shù)(bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)計分方法進(jìn)行評分，將其分為兩組：活動期組34例(定義為BASDAI≥4分)，穩(wěn)定期組24例(定義為BASDAI<4分)。46例本院體檢健康者入選標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能、血脂、血常規(guī)、尿常規(guī)、影像學(xué)檢查均正常，與AS組的性別、年齡相匹配。所有參與研究的AS患者及健康對照組均排除:①處于急性或慢性感染期；②患有嚴(yán)重心、肝、腎及血液系統(tǒng)疾病；③合并其他診斷明確的自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、嚴(yán)重性腸病、銀屑病、葡萄膜炎等；④患有糖尿病、甲狀腺等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病；⑤腫瘤患者。

1.2研究方法

所有研究對象均在臨床干預(yù)治療前清晨空腹采集靜脈血，送我院檢驗科，常規(guī)檢查血分析、血沉、C反應(yīng)蛋白、類風(fēng)濕因子、HLA-B27等相關(guān)項目，同時另采集靜脈血3 ml，3 500 r/min離心10 min，取血清于-80 ℃冷凍保存待測。采用雙抗體夾心ELISA法，按照試劑盒說明書的操作要求檢測外周血清中IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平。

對所有研究對象進(jìn)行詳細(xì)的審查、登記，填寫統(tǒng)一編制的表格，內(nèi)容包括一般情況(如：姓名、性別、年齡、身高、體重、BMI等)及檢測各項指標(biāo)及結(jié)果，數(shù)據(jù)編入計算機(jī)進(jìn)行統(tǒng)計分析。實驗所用人IP-10 ELISA監(jiān)測試劑盒購自美國Biosource公司，IL-17及IL-23 ELISA監(jiān)測試劑盒購自美國B&D公司,TNF-α ELISA監(jiān)測試劑盒購自上海北諾公司。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理

2結(jié)果

2.1一般資料比較

AS活動期組、AS穩(wěn)定期組及健康對照組在性別、年齡、BMI和類風(fēng)濕因子上的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，在白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)、血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、HLA-B27陽性率和BASDAI評分上差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且AS活動期組的PLT、CRP和BASDAI評分均顯著高于AS穩(wěn)定期組(P<0.05，見表1)。

表1AS患者與健康對照一般資料比較

Table 1Comparison of general datum between AS patients and healthy controls

組別n男性[例(%)]年齡(歲)BMI(kg/m2)白細(xì)胞計數(shù)(×109/L)血小板計數(shù)(×109/L)類風(fēng)濕因子(IU/ml)血沉(mm/h)C反應(yīng)蛋白(mg/L)HLA-B27陽性率(%)BASDAI評分(分)AS活動期組3428(82.4)29.0±7.323.0±5.19.6±5.1*303.0±116.2*6.8±2.130.9±14.2*19.3±14.1*91.2*6.1±1.1*AS穩(wěn)定期組2419(79.2)28.8±11.724.7±4.89.0±4.7*241.6±103.8*#7.1±1.226.2±14.7*11.7±6.1*#87.5*2.4±0.7*#健康對照組4637(80.4)30.1±9.224.8±4.96.8±1.7184.8±72.17.0±2.87.3±4.62.1±1.42.20.6±0.8

與健康對照組比較，*P<0.05；與AS活動組比較，#P<0.05

2.2血清IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α含量檢測結(jié)果比較

AS活動期組及穩(wěn)定期組患者血清IP-10含量水平均顯著高于健康對照組(F分別為88.68，12.81，均P<0.05)；IP-10在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(F=26.80，P<0.05)。兩組AS患者血清IL-17、IL-23及TNF-α含量水平均高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F分別為99.49，59.19，15.96，均P<0.05)；IL-17和TNF-α在AS活動期組含量水平高于穩(wěn)定期組(F分別為12.14，5.24，均P<0.05,見表2)。

2.3AS患者IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、WBC、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分間相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，AS患者中IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分呈正相關(guān)，與WBC無相關(guān)性(見表3)。

表2三組血清IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平比較(pg/ml)

Table 2Serum IP-10,IL-17,IL-23 and TNF-α levels in three groups(pg/ml)

組別nIP-10IL-17IL-23TNF-αAS活動期組34256.32±119.53*39.50±12.60*46.44±17.14*17.14±7.58*AS穩(wěn)定期組24120.71±58.70*#28.92±9.39*#39.16±13.72*13.08±5.06*#健康對照組4669.78±54.589.37±6.9415.85±8.528.93±6.17

與健康對照組比較，*P<0.05；與AS活動組比較，#P<0.05

表3AS患者IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、WBC、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分間相關(guān)性分析

Table 3Correlation analysis between IP-10 and IL-17,IL-23,TNF-α,WBC,PLT,ESR,CRP,BASDAI score

檢驗項目因子rPIL-170.53<0.01IL-230.58<0.01TNF-α0.39<0.01WBC0.120.23PLT0.29<0.01ESR0.55<0.01CRP0.55<0.01BASDAI0.70<0.01

3討論

AS是一種多因素共同參與的慢性炎癥性疾病，發(fā)病年齡輕，致殘率高，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量。雖然近年來對AS的診斷與治療均已取得了長足的進(jìn)步，但目前仍然無法完全闡明該病發(fā)生的確切病因，無法找到根治性的治療方法。

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)是近年來發(fā)現(xiàn)的半胱氨酸-X-半胱氨酸(CXC)類谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(Glu-Leu-Arg,ELR)亞族趨化因子,又名CXC趨化因子配體10(CXCL10)。是由γ干擾素所誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類可以趨化淋巴細(xì)胞的蛋白質(zhì)，主要表達(dá)在活化的T淋巴細(xì)胞上，特別是Th1型T淋巴細(xì)胞，IP-10與之結(jié)合后能夠誘導(dǎo)Th1細(xì)胞活化并定向遷移至特定的組織中從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。此外IP-10還具有介導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生長和增殖、調(diào)節(jié)血管生成等功能。近年來，已有研究證實IP-10參與多種器官特異性自身免疫性疾病(如1型糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、Graves病等)和系統(tǒng)性自身免疫性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化等)的發(fā)病過程[7]，同時也是風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼兒特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病的重要發(fā)病因素[3-5]。

通過本研究發(fā)現(xiàn)，AS患者血清中的IP-10含量明顯高于健康對照組(P<0.05)，說明AS患者存在IP-10表達(dá)的增加。同時，AS活動期患者血清IP-10水平高于穩(wěn)定期組，提示IP-10水平與AS病程分期密切相關(guān)。進(jìn)一步分析顯示，AS患者外周血中IL-17、IL-23的水平明顯高于健康對照組(P<0.05)，并且IL-17與IL-23的表達(dá)呈正相關(guān)，這與近年來內(nèi)外相關(guān)研究的結(jié)果相一致[8-13]。而TNF-α通過激活多形核細(xì)胞，刺激前列腺素產(chǎn)生，抑制堿性磷酸酶和膠原的合成及促進(jìn)軟骨細(xì)胞分泌纖維蛋白溶解酶激活劑，促使纖維蛋白酶的合成等多種機(jī)制在AS的致病過程中發(fā)揮著重要的作用已經(jīng)成為學(xué)者們公認(rèn)的事實[14-16]。通過相關(guān)性分析，可以看出，AS患者IP-10水平與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評分均呈顯著正相關(guān)，而與WBC無相關(guān)性，這些結(jié)果再次提示IP-10在AS的發(fā)生和進(jìn)展過程中起到了重要的作用，是AS特異性極強(qiáng)的敏感性指標(biāo)，檢測血清IP-10水平可能有助于對AS疾病活動性的評估。

本研究通過監(jiān)測AS患者及健康人血清中IP-10含量，結(jié)合IL-17、IL-23和TNF-α的分泌水平，探討IP-10與IL-17、IL-23和TNF-α分泌模式在AS患者致病過程中發(fā)生的變化，證實IP-10同IL-17、IL-23及TNF-α均可能為AS發(fā)病過程中重要的免疫學(xué)標(biāo)志，并且在AS發(fā)病的過程中發(fā)揮著重要的作用。

此外，研究IP-10在AS患者體內(nèi)血清中的表達(dá)及臨床意義，不僅有助于進(jìn)一步了解AS的發(fā)病機(jī)制，還能為AS的臨床治療提供重要實驗室依據(jù)。已有研究表明，應(yīng)用CXCR3小分子拮抗劑AMG487能顯著降低滑膜細(xì)胞的侵襲性，降低滑液中基質(zhì)金屬蛋白酶水平，阻止IP-10-CXCR3介導(dǎo)的滑膜細(xì)胞的激活，從而減少肌動蛋白細(xì)胞骨架重組及板狀偽足的形成[17]。而應(yīng)用抗IP-10的單克隆抗體治療對甲氨蝶呤耐藥的RA患者有顯著的療效[18]。因此，針對IP-10的靶點治療有望成為AS治療的一種新的方向。

由于本研究的樣本量相對較少，研究方法僅局限于ELISA法定量檢測，干擾因素相對較多，可能存在系統(tǒng)誤差等問題，IP-10的臨床意義尚需更大的樣本、多中心研究進(jìn)一步驗證。但我們有理由相信，IP-10作為一種新型的標(biāo)志物，在不遠(yuǎn)的將來一定能夠在AS等免疫相關(guān)疾病的早期篩查、輔助診斷、監(jiān)測病情、療效評價及判斷預(yù)后上得到廣泛的應(yīng)用。

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Expression of interferon-γ-inducible protein-10 in serum of patients with ankylosing spondylitis and its clinical significance

YANG Biao1, WANG Yao2*, ZHAO Xiaoguang1, WANG Lei1

(1DepartmentofOrthopedics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,China;2DepartmentofLaboratoryMedicine,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity;*Correspondingauthor，E-mail: 95244556@qq.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate the levels of serum interferon-γ-inducible protein 10(IP-10) in patients with ankylosing spondylitis(AS)，and evaluate its clinical significance in the disease activity of AS.MethodsThe levels of IP-10,IL-17,IL-23 and TNF-α in serum from 34 patients with active ankylosing spondylitis,24 patients at stable phase and 46 healthy controls were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA). The correlation of serum IP-10 level with AS-associated clinical and laboratorial indexes were analyzed. ResultsThe levels of serum IP-10 in active and stable phase AS patients were significantly higher than that of healthy controls(P<0.05),and the serum IP-10 level in active AS patients was significantly higher than that in inactive AS patients(P<0.05). The levels of serum IL-17,IL-23 and TNF-α in AS patients were higher than that of healthy controls(P<0.05),and the levels of serum IL-17 and TNF-α in active AS patients were significantly higher than those of inactive AS patients(P<0.05). Correlation analysis showed that the level of IP-10 was positively correlated with IL-17,IL-23,TNF-α,PLT,ESR,CRP, BASDAI score in AS patients.ConclusionThe serum IP-10 level may be an important immune marker in the process of AS, and it can be helpful to diagnose and evaluate AS.

Key words:interferon-γ-inducible protein-10；ankylosing spondylitis；cytokines

作者簡介：楊彪，男，1977-03生，碩士，主治醫(yī)師,E-mail:yangbiao1977@126.com

收稿日期：2016-03-06

中圖分類號：R593.23

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007-6611(2016)05-0459-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.05.014