不同產地木香中兩種倍半萜內酯的含量測定

饒文霞 ，張開元，尹顯梅，薛倩倩，李杰，尹鴻翔

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不同產地木香中兩種倍半萜內酯的含量測定

饒文霞 ，張開元，尹顯梅，薛倩倩，李杰，尹鴻翔

目的：測定不同產地木香中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為Comatex C18( 250 mm × 4.6 mm，5 μm)，以甲醇－水（65∶35）為流動相，檢測波長225 nm，流速 1.0 mL．min-1，柱溫30℃。結果：木香烴內酯在0.2108 μg～1.2648 μg、去氫木香內酯在0.2332 μg～1.3992 μg范圍內線性關系良好，木香烴內酯、去氫木香內酯回收率分別為100.75% ,100.21% 。結論：不同產地木香藥材中木香烴內酯和去氫木香烴內酯的含量差別較大，產地對藥材質量有明顯影響。

高效液相色譜法；木香；木香烴內酯；去氫木香內酯

木香為傳統常用中藥，為菊科植物木香(Aucklandia lappa Decne.）的干燥根。性溫，味辛、苦，具有行氣止痛、健脾消食的功效，臨床上用于胸脘脹痛、瀉痢后重、食積不消、不思飲食等癥[1]。

木香主含揮發油，其主要活性成分木香烴內酯和去氫木香內酯具有松弛平滑肌和解痙作用[2-3]，含量高低可作為木香質量優劣的評價指標之一。本文參考相關文獻[4-6]，以木香烴內酯和去氫木香內酯的含量為指標，用HPLC法對11個不同產地木香的木香烴內酯和去氫木香內酯含量進行了測定。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1200高效液相色譜儀（四元泵、自動進樣器、柱溫箱、檢測器、工作站），SB-52000超聲波清洗器（寧波新藝超聲設備有限公司），ULUP-1-10T 型超純水機（成都優普超純水科技有限公司），BSA124S 電子分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司），電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司），SHZ—D（Ⅲ）型循環水真空泵（上海一科儀器有限公司），FW-200高速粉碎機（北京中興偉業儀器有限公司），木香烴內酯對照品（批號：140720，純度≥98%）、去氫木香內酯對照品（批號：141027，純度≥98%）均購自成都普菲德生物技術有限公司，甲醇為色譜純，水為超純水。木香藥材于2014年分別在不同產地進行采集，經成都中醫藥大學尹鴻翔副教授鑒定為菊科植物木香（Aucklandia lappa Decne.）的根，來源見表1。

表1 木香樣品采集情況

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Comatex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇—水（65∶35），流速：1 mL．min-1，柱溫：30 ℃，檢測波長：225 nm。

2.2 對照品溶液的制備

取木香烴內酯、去氫木香內酯對照品，精密稱定，加甲醇制成木香烴內酯質量濃度為0.1054 mg．mL-1、去氫木香內酯質量濃度為0.1166 mg．mL-1的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將木香藥材于60 ℃烘箱中干燥，粉碎，過4號篩，取木香粉末約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 50 mL，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理（功率：250 W，頻率：40 kHz）30 min，取出，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，用0.22 μm的微孔濾膜濾過，即得。

2.4 測定波長的選擇

取木香烴內酯、去氫木香內酯對照品，用甲醇溶解后，用紫外-可見分光光度計掃描，測得木香烴內酯最大吸收波長為211 nm，去氫木香內酯最大吸收波長為209 nm，參考相關文獻及考慮到末端吸收，選擇文獻報道常用的225 nm作為測定波長。吸收光譜圖見圖 1、圖 2。

圖 1 木香烴內酯對照品吸收光譜

圖 2 去氫木香內酯對照品吸收光譜

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系考察 精密吸取木香烴內酯和去氫木香內酯對照品混合溶液 2，4，6，8，10，12 μL，注入色譜儀，測定不同進樣量下木香烴內酯和去氫木香內酯的峰面積，以進樣量(μg)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，繪制標準曲線。木香烴內酯的回歸方程為：Y=1453.4X-3.4733，R=1，去氫木香內酯的回歸方程為：Y=1149.9X-4.6133，R=0.9999，結果表明木香烴內酯在0.2108 μg～1.2648 μg，去氫木香內酯在0.2332 μg～1.3992 μg范圍內線性關系良好。

2.5.2 重復性考察 取同一批藥材6份，每份約 0.3 g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備，進樣10 μL，測定木香烴內酯、去氫木香內酯的含量，結果木香烴內酯和去氫木香烴內酯的RSD分別為 0.38%、0.67%，表明該方法重復性良好。

2.5.3 精密度考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，連續進樣 6 次，測定峰面積值，結果木香烴內酯峰面積RSD為0.19%，去氫木香內酯峰面積RSD為0.27%，表明方法精密度良好。

2.5.4 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，在0、4、8、12、16、24 小時進樣10 μL，測其峰面積，結果木香烴內酯峰面積RSD為0.25%，去氫木香內酯峰面積RSD為 0.38%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.5.5 加樣回收率考察 取已知含量同一批木香藥材6 份（木香烴內酯含量2.05%，去氫木香內酯含量2.68%），每份約 0.1 g，精密稱定，精密加入一定量的木香烴內酯、去氫木香內酯對照品，照供試品溶液制備方法制備，進樣10 μL，計算木香烴內酯、去氫木香內酯的含量，并計算回收率，結果見表2、3。

表2 木香烴內酯加樣回收率試驗

40.10232.1020 1.05403.1660100.95 50.10352.12661.05403.1801 99.95 60.10342.12461.05403.1771 99.86

表3 去氫木香內酯加樣回收率試驗

木香烴內酯平均回收率為100.75%，RSD為1.59 %；去氫木香內酯平均回收率為100.21%，RSD為1.70%，表明該方法回收率好，方法可行。

2.6 不同產地木香中木香烴內酯、去氫木香內酯含量測定

精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，計算含量。含量測定結果見表4，色譜圖見圖3、4。

圖3 對照品色譜圖

圖4 供試品色譜圖

表 4 11批木香藥材中木香烴內酯和去氫木香內酯的含量測定結果(n=3)

3 討論

從11個不同產地的木香烴內酯和去氫木香烴內酯的含量來看，除個別產地外，大多數去氫木香內酯的含量高于木香烴內酯含量，不同產地之間兩者含量差別比較大，說明木香藥材受產地影響較大。木香的傳統產區為云南，被奉為道地產區，實驗結果表明云南麗江、大理的木香兩種成分含量總和高達5.40%和5.77%，說明云南產的木香質量較佳，符合道地產區的內涵。其次是四川的宣漢及九寨溝等地，近年來，四川已成為木香的主要產區，說明道地藥材引種后仍能保持很好的質量，這對于木香的產地擴大具有重要意義。

[1] 林明俠.木香的藥理及臨床研究概況[J].中醫藥信息,2005,22(3)： 18.

[2] 肖培根.新編中藥志： 第一卷[M].北京： 化學工業出版社,2001： 184．

[3] 王永兵,王強,毛福林.木香的藥效學研究[J].中國藥科大學學報,2001,32(2)：146.

[4] 劉正清.不同產地和采收時間木香藥材中木香烴內酯和去氫木香內酯的測定[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(16)：116.

[5] 趙小民,殷高彬.不同產地木香中木香烴內酯和去氫木香內酯的 HPLC 測定[J]. 安徽醫藥,2009,13(6)：617.

[6] 徐宇,方魯延,談紅,等.HPLC 法測定木香中去氫木香內酯的含量[J].中草藥,2004,35(12)： 1416.

(責任編輯：李蕓霞）

Determination of the contents of two kinds sesquiterpenoids in Muxiang produced in different areas

/RAO Wen-xia, ZHANG Kai-yuan, YIN Xian-mei, XUE Qian-qian, LI Jie,YIN Hong-xiang//(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine , Chengdu 611137, Sichuan )

Objective:To determine costunolide and dehydrocostuslactone in Muxiang from different productive areas.Method:HPLC method was used in the determination with Comatex C18column. The mobile phase was methanol-water (65：35), and detection wavelength was set at 225 nm with the flow rate of 1.0 mL．min-1. Column temperature was 30℃.Result:The peak area of Costunolide was linear within the range of 0.2108 μg～1.2648 μg. The peak area of Dehydrocostuslactone was linear within the range of 0.2332 μg-1.3992 μg. The average recovery of costunolide and dehydrocostuslactone was 100.75% and 100.21%, respectively.Conclusion:The contents of costunolide and dehydrocostuslactone are greatly different in Muxiang produced in different areas, which indicates that production area significantly influence Muxiang quality.

HPLC; Muxiang; costunolide; dehydrocostuslactone

R282.6

A

1674-926X(2016)05-003-03

科技部“邊遠貧困地區、邊疆民族地區和革命老區人才支持計劃科技人員專項 計劃”

成都中醫藥大學，四川 成都 611137

饒文霞，女，碩士研究生，主要從事生藥學方向研究 Tel：18314514527 Email：1192884154@qq.com

尹鴻翔，男，副教授，主要從事民族藥資源可持續利用及質量評價研究 Email：hongxiangy@126.com

2015-09-25