不同加工方法對杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響

吳兵，龍飛，衛(wèi)瑩芳，許萍，周元靂

·品種品質(zhì)·

不同加工方法對杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響

吳兵，龍飛，衛(wèi)瑩芳，許萍，周元靂

目的：考察不同加工方法對杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的影響，為優(yōu)化杜仲產(chǎn)地加工方法提供科學依據(jù)。方法：在產(chǎn)地將三批新鮮藥材分別進行“直接曬干”、“發(fā)汗—曬干”、“ 微煮—發(fā)汗—曬干”、“微煮—切制—發(fā)汗—曬干”實驗。并采用高效液相色譜測定不同加工方法杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量變化。結(jié)果：不同加工方法樣品松脂醇二葡萄糖苷含量的高低：“微煮—發(fā)汗—曬干”＞“發(fā)汗—曬干”＞“微煮—切制—發(fā)汗—曬干”＞“直接曬干”。結(jié)論：“發(fā)汗”在杜仲在產(chǎn)地加工中是必要的；微煮后再“發(fā)汗”的杜仲質(zhì)量較佳。

杜仲；產(chǎn)地加工；發(fā)新汗；微煮；松脂醇二葡萄糖苷；高效液相色譜

杜仲是杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮，具有補肝腎，強筋骨，安胎的功效[1]。歷版藥典均規(guī)定采收后的杜仲皮應“刮去粗皮，堆置發(fā)汗至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干”。在目前栽培杜仲的10余省[2]中，不少產(chǎn)地采用直接曬干的加工方法。同時，傳統(tǒng)產(chǎn)地加工中，杜仲在“發(fā)汗”前尚有“微煮”步驟。另據(jù)報道，一種新方法[3]已被運用于同為皮類藥材的厚樸加工中，該方法直接將厚樸鮮皮進行蒸煮、切制、發(fā)汗、干燥加工。這種方法是否可以運用于杜仲藥材加工中？針對以上問題，本文針對產(chǎn)地不同加工方法杜仲中有效成分松脂醇二葡萄糖苷進行比較研究，為確定杜仲適宜的產(chǎn)地加工方法提供科學依據(jù)。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀 (SPDM20AT檢測器，LC-Solution 工作站)；德國Sartorius公司BP121S電子分析天平(萬分之一)；德國Sartorius公司BP211D電子分析天平(十萬分之一)；松脂醇二葡萄糖苷(PDG)對照品（購自成都貝斯特試劑有限公司 批號：S-047-110830，供含量測定用）；色譜甲醇（德國默克公司）；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

杜仲樣品采集于四川省都江堰市虹口鄉(xiāng)，三批胸徑分別為8cm、10cm、18cm，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學藥學院中藥鑒定教研室副教授龍飛鑒定為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 產(chǎn)地加工

將三批樣品各分取2份，刮去粗皮，按照下述方法加工處理后備用。

2.1.1 直接曬干樣品 將鮮杜仲皮攤開，直接曬干。

2.1.2 不同發(fā)汗樣品 發(fā)汗—曬干 將鮮杜仲皮內(nèi)面相對，覆上棕墊，進行“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干。

微煮—發(fā)汗—曬干 將鮮杜仲皮于沸水中微煮5min，晾干，余同“發(fā)汗—曬干”法。

微煮—切制—發(fā)汗—曬干 將鮮杜仲皮于沸水中微煮5min，晾干，將皮切制成長約3cm，寬約2cm的小方塊，裝入密封袋，放入木箱中“發(fā)汗”至內(nèi)皮呈紫褐色，曬干。

2.2 水分含量測定

按《中國藥典》2015版一部附錄Ⅸ H第一法測定經(jīng)不同加工方法的三批樣品水分含量, 各樣品平行測定2 次。結(jié)果見表1。

表1 杜仲不同加工樣品水分含量(n=2)

結(jié)果所示，各樣品的水分含量在7.62～11.18%之間，均符合《中國藥典》2010版一部杜仲項下規(guī)定的杜仲的水分不得超過13.0%。

2.3 PDG含量測定

《中國藥典》2005年版和2010年版均采用索氏提取法制備供試品，該法操作較繁瑣費時。本文以藥典杜仲項下含測方法為基礎，結(jié)合相關文獻[4～6]，并通過方法學研究，對提取方法進行改進。

2.3.1 色譜條件 色譜柱為Amethyst C18柱(250mm ×4.6mm，5μm)，以甲醇-水（25：75）為流動相，流速1.0ml/min，柱溫25℃，檢測波長277nm，進樣10μl。色譜圖見圖1。

圖1 對照品（A）和供試品（B）HPLC圖

2.3.2 對照品溶液的制備 取PDG對照品適量約5mg，精密稱定，加甲醇制成含PDG 0.5mg/mL的溶液，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取不同加工方法的三批樣品（各樣品分取兩份）約3g，剪成碎片，揉成絮狀，各取約2g,精密稱定，加入三氯甲烷適量20ml，超聲提取30分鐘，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，再加甲醇20ml超聲45分鐘，過濾，甲醇洗滌3次，將濾液于50℃水浴條件下?lián)]甲醇至適量，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[4]。

2.3.4 線性關系的考察 分別精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10μl，按“2.3.1”色譜條件，注入液相色譜儀，測定峰面積。以Y為峰面積，X為進樣量（μg），得到PDG的線性回歸方程為：Y=454.1X-391.46，相關系數(shù)r= 0.999 0。結(jié)果表明，PDG在1～5μg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關系。

2.3.5 含量測定 按上述色譜條件，精密吸取混合對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算樣品中PDG的量。結(jié)果見表2。

表2 杜仲不同加工樣品PDG質(zhì)量分數(shù)(n=2)

結(jié)果表明，樣品中PDG含量在0.16%～0.22%，均符合《中國藥典》杜仲含量測定項下“本品含松脂醇二葡萄糖苷(C32H42O16)不得少于0.10%”的規(guī)定；樣品中PDG的高低分別為：“微煮—發(fā)汗—曬干” ＞“發(fā)汗—曬干”＞“微煮—切制—發(fā)汗—曬干”＞“直接曬干”。

3 討論

3.1 實驗結(jié)果表明，直接曬干的樣品中PDG含量較低，而發(fā)汗后樣品中PDG含量增加，說明杜仲產(chǎn)地加工中進行“發(fā)汗”是必要的；經(jīng)微煮后發(fā)汗樣品PDG含量較未微煮發(fā)汗樣品增加，可能此步驟抑制了分解PDG的某些酶類。

3.2 本文參考厚樸藥材的新加工方法[3]，將鮮杜仲皮進行 “微煮—切制—發(fā)汗—曬干”加工實驗，結(jié)果表明，PDG含量較“微煮—發(fā)汗—曬干”及“發(fā)汗—曬干”低，顯示在切制后再“發(fā)汗”有一定損失。

3.3 索氏提取法制備杜仲供試品較費時且繁瑣，本研究結(jié)合文獻[5]采用超聲法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的索氏提取法提取杜仲中的PDG，簡單、方便、可行。此外，還有人提出以乙腈－磷酸水溶液(15：85)為流動相，可使PDG出峰時間相對縮短，鋒行窄而對稱且分離度高[6]。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015 年版一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

[2] 何方,王承南,張康健,等.杜仲產(chǎn)區(qū)的劃分[J].經(jīng)濟林研究,2010,28(2)：87.

[3] 馮斌,陳文文,張大永.厚樸及其加工工藝：中國,200810055725.5 [P].2008-12-31.

[4] 姜新義,楊中林,李萍.杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量測定的樣品處理方法優(yōu)化[J].藥學進展,2009,33(1)：30.

[5] 李曄,劉峰,李彤暉,等.杜仲藥材含量測定方法的研究[J]．西北藥學雜志,2010,25(5)：348.

[6] 王月茹,謝偉,王西芳,等.HPLC測定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2009,29(6)：78.

（責任編輯：胡慧玲）

Study on the influence of different processing methods on pinoresinol diglucoside (PDG) content in Duzhong

/ WU Bing, LONG Fei, WEI Ying-fang, XU Ping, ZHOU Yuan-li(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To investigate the influence of different processing methods on pinoresinol diglucoside (PDG) content in Duzhong, and provide evidence for the optimization of Duzhong processing method.Method:Three batches raw material medicine were processed by four methods including "Direct drying", "Fahan-Drying”, "Slightly decocted in boiling water-Fahan-Drying", " Slightly decocted in boiling water-Cutting- Fahan-Drying ", respectively. The pinoresinol diglucoside content was detected by HPLC.Result:The content of PDG in processed Duzhong was in the order of "Slightly decocted in boiling water-Fahan-Drying" ＞ "Fahan-Drying " ＞ " Slightly decocted in boiling water-cutting- Fahan-Drying "＞"Direct drying".Conclusion:”Fahan” is necessary in Duzhong Processing. Duzhong has better quality after being processed by "Fahan" and"Slightly decocted in boiling water".

Duzhong; processing method; Fahan; slightly decocted in boiling water; pinoresinol diglucoside; HPLC

R282.4

A

1674-926X(2016)05-004-03

成都中醫(yī)藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用重點實驗室省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

吳兵（1966-），男，主要從事中藥品種、質(zhì)量與資源研究 Email：466945108@qq.com

龍飛（1977-），男，博士，主要從事的研究方向：中藥品種、質(zhì)量與資源研究

Email：514195017@qq.com

2015-11-11