不同干燥方法對滇重樓總皂苷含量和抗氧化活性的影響

2016-07-06 06:59:04張靜丁博張華祁俊生沈昱翔周濃陳秀紅楊冬梅

中國中醫藥信息雜志 2016年7期

張靜丁博張華祁俊生沈昱翔周濃陳秀紅楊冬梅

摘要：目的研究9種不同干燥方法對滇重樓根莖中總皂苷含量的影響及抗氧化性的差異。方法采用紫外-可見分光光度法測定滇重樓藥材中總皂苷的含量，通過1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）法、2，2'-連氮基-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS+）自由基清除法評價其皂苷提取物的抗氧化能力。結果不同干燥方法滇重樓根莖中總皂苷含量存在顯著差異，35 ℃烘干樣品的總皂苷含量最高，為17.557 mg/g，其次為自然陰干樣品13.740 mg/g。綜合2種抗氧化能力檢測結果，不同干燥方法滇重樓皂苷提取物均有很好的抗氧化能力，其中35 ℃烘干樣品抗氧化能力最強，均表現一定的濃度依賴效應。結論 35 ℃烘干干燥處理是獲得高品質和高活性滇重樓藥材的較好方法。

關鍵詞：滇重樓；干燥方法；烘干法；總皂苷；抗氧化活性

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.024

中圖分類號：R283.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）07-0095-03

Effects of Different Drying Methods on Total Saponin Content and Antioxidant Capacity of Paris polyphylla var. yunnanensis ZHANG Jing1， DING Bo1， ZHANG Hua1， QI Jun-sheng1， SHEN Yu-xiang2， ZHOU Nong1， CHEN Xiu-hong1， YANG Dong-mei1 （1. College of Life Science& Engineering， Chongqing Three Gorges University， Chongqing 404000， China； 2. College of Agriculture， Anshun University， Anshun 561000， China）

Abstract： Objective To study the effects of 9 different drying methods on total saponin content and antioxidant capacity of Paris polyphylla var. yunnanensis. Methods UV-VIS spectrophotometry was used for measuring the total saponin content of P. polyphylla var. yunnanensis， 2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl （DPPH） and 2，2'-azino-bis （3-ethylbenzthiozoline-6）-sulphonic acid （ABTS+） radical scavenging methods were used for evaluating the antioxidant capacity of P. polyphylla var. yunnanensis extracts. Results The total saponin contents of P. polyphylla var. yunnanensis dried by different methods existed significant difference. The sample dried at 35 ℃ showed highest total saponin content （17.557 mg/g）. The sample dried in the shade naturally showed middle total saponin content （13.740 mg/g）. Based on the results of antioxidant capacity detected by two methods， the samples of P. polyphylla var. yunnanensis dried by 9 different methods all showed good antioxidant capacity and showed a certain concentration dependence. Conclusion The samples dried at 35 ℃ have the highest antioxidant capacity. Therefore， drying at 35 ℃ is a better drying method to obtain high quality and high activity of P. polyphylla var. yunnanensis.

Key words： Paris polyphylla var. yunnanensis； drying method； oven drying method； total saponin content； antioxidant capacity

植物皂苷具有良好的抗氧化活性，能有效清除體內自由基、抑制細胞膜的脂質過氧化以及保護機體生物大分子等[1-2]。滇重樓為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var. yunnanensis（Franch.）Hara的干燥根莖，被2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）

基金項目：國家自然科學基金（81260622）；貴州省科技廳科學技術基金[黔科合J字LKA（0122）07]；萬州區科技計劃項目（201301024）；重慶市教委科學技術研究項目（KJ131109）

通訊作者：周濃，E-mail：erhaizn@126.com

收載為中藥重樓的原植物之一[3]。滇重樓主要活性成分是甾體皂苷類化合物，發揮著重要的藥理作用[4-5]。

產地加工是中藥材生產與品質形成的重要環節之一，其目的是提供安全性與有效性于一體的高品質原藥材。傳統重樓的加工為每年秋季采挖，除掉須根，洗凈，曬干[3]。該方法存在干燥時間較長、受環境及天氣的影響較大等弊端，可能導致藥材活性成分損失、藥性改變等問題[6]。目前滇重樓藥材品質參差不齊，部分藥材活性成分含量達不到藥典標準，嚴重影響藥材的供應及以其為原料的中成藥質量[7]。而有關滇重樓干燥加工方法的研究尚未見報道。鑒于此，本研究通過比較不同干燥方法對滇重樓根莖中皂苷物質含量和抗氧化活性的影響，以期找到一種較有利于減少活性物質損失的干燥方式，為滇重樓藥材的產地初加工提供依據。

1 儀器與試藥

UV-2450型紫外可見分光光度計（日本島津公司），DHG-9123A型鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司），EG720FA5型微波爐（額定輸出功率1300 W，額定微波功率50 Hz，美的集團），WS70-1型紅外線快速干燥器（功率500 W，上海錦屏儀器儀表有限公司），SB-5200DTN型超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司），RV 10 basic V型旋轉蒸發儀（德國IKA集團），CP225D型分析天平（德國Sartorius公司）。

薯蕷皂苷元對照品（批號110833-201205，中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用）。滇重樓新鮮根莖為采集于重慶市開縣滿月鄉種植基地苗圃的同一批樣品，重慶三峽學院生命科學與工程學院周濃副教授鑒定為百合科植物云南重樓Paris polyphylla var. yunnanensis的根莖。所用試劑均為分析純。甲醇（批號20141101），重慶川東化工（集團）有限公司；高氯酸（批號2013057），天津市鑫源化工有限公司；1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH，批號2175918），Sigma公司；無水乙醇（批號2013090201），成都市科龍化工試劑廠；2，2'-連氮基-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二銨鹽（ABTS+，批號20110913），Amresco公司；過硫酸鉀（批號20121227），天津市永大化學試劑有限公司。水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 干燥方法

選擇大小均一的滇重樓新鮮根莖180株，隨機分為9組，每組20株，分別采用以下干燥方法干燥至恒重。①自然曬干法（藥典方法）：將洗凈的滇重樓直接在太陽下晾曬（處理代碼S1，下同）；②自然陰干法：將洗凈的滇重樓置室內通風干燥處陰干（S2）；③烘干法：熱風干燥溫度為35 ℃（S3）、70 ℃（S4）、105 ℃（S5）；④微波干燥法：干燥功率為390 W（S6）、650 W（S7）、910 W（S8）；⑤紅外干燥法：將洗凈的滇重樓置紅外線快速干燥器內進行干燥（S9）。

2.2 總皂苷含量測定

參照文獻[8-9]方法略作修改。標準曲線的制備：精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，用甲醇溶解并定容至25 mL，制備濃度為0.22 mg/mL的溶液。精密量取上述對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.5、0.6、0.8 mL于10 mL具塞刻度試管中，揮干溶劑，精密加入高氯酸5.0 mL，置65 ℃水浴中顯色25 min，取出，冷卻至室溫，以相應的試劑為空白，在408 nm處測定吸光度，以對照品濃度（μg/mL）對吸光度建立標準曲線，得回歸方程Y=31.584 X-0.0502（r=0.999 1）。

提取液制備參照文獻[8-9]方法略作修改。精密稱取待測品粉末0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）40 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻后過濾，取續濾液，即得。精密吸取提取液1.0 mL，按上述方法測定吸光度，計算滇重樓根莖中的薯蕷皂苷元含量。結果見表1。

從表1可以看出，35 ℃烘干法（S3）的樣品中總皂苷含量最高，達17.557 mg/g；陰干方法（S2）次之，為13.740 mg/g；910 W條件下微波干燥法（S8）含量最低。同時，35 ℃烘干法與傳統干燥方法（曬干）相比，能顯著降低干燥時間，與周氏等[10]研究結論一致。微波干燥法、烘干法中，總皂苷含量隨著加熱功率（溫度）的增加有降低的趨勢，可能在高溫（高功率）條件下內源酶受到破壞，使藥材自身的呼吸減弱，促進了提取過程中水解薯蕷皂苷的能力[11]。

2.3 體外抗氧化性評價

2.3.1 清除DPPH自由基能力參照孫氏等[12]方法略作修改。精密量取25.61 mg/L DPPH溶液3.5 mL，加入70%乙醇溶液0.5 mL，混勻，在波長517 nm處測吸光度Ac。分別取0.5 mL提取液，加入25.61 mg/L DPPH溶液3.5 mL，混合均勻，室溫避光反應30 min后于波長517 nm處測定吸光度Ai。同時測定70%乙醇溶液3.5 mL中加入0.5 mL不同濃度各提取液的吸光度Aj。DPPH自由基清除率（SH）=[1-（Ai-Aj）÷Ac]×100%。結果見表2、圖1。可以看出，滇重樓總皂苷對DPPH自由基具有較強的清除能力，且隨總皂苷濃度增加而增強，與高氏等[2]研究結果一致，呈現一定的線性關系，樣品S3（35 ℃烘干法）IC50最小，即DPPH抗氧化性最強。

2.3.2 清除ABTS+自由基能力參照楊氏等[13]方法略作修改。取7 mmol/L ABTS+溶液5.0 mL，加入140 mmol/L過硫酸鉀溶液88.0 μL，室溫下置于暗處反應12～16 h，形成ABTS+自由基的貯備液。在734 nm處，用70%乙醇溶液稀釋ABTS+自由基貯備液，備用。準確量取0.5 mL滇重樓總皂苷原液（參照文獻[9]方法略作改進），加入3.5 mL ABTS+溶液，搖勻，在室溫條件下反應6 min，于734 nm處測定吸光度AE。同時吸取3.5 mL ABTS+溶液，加入體積分數70%乙醇溶液0.5 mL于734 nm處測定吸光度AB。ABTS+自由基清除率（SC）=（AB-AE）÷AB×100%。結果見表2、圖2。可見，滇重樓總皂苷對ABTS+自由基具有較強的清除能力，且隨總皂苷濃度的增加而增強，與高氏等[2]研究結果一致。樣品S3（35 ℃烘干法）IC50最小，即ABTS+抗氧化性最強。

3 討論

本試驗結果表明，不同干燥方法對滇重樓中總皂苷含量存在顯著影響，35 ℃烘干樣品中的總皂苷含量最高，達到17.557 mg/g。不同干燥方法滇重樓根莖中總皂苷提取物對DPPH、ABTS+均有一定的清除作用，均具有較好的體外抗氧化能力，且抗氧化能力與總皂苷含量存在一定的量效關系，35 ℃烘干樣品的抗氧化能力最強。

總之，35 ℃烘干處理在一定程度上減少了滇重樓皂苷類成分的損失，能更好地發揮其DPPH和ABTS+抗氧化能力，且具有干燥時間短的優點。因此，35 ℃烘干法可以作為滇重樓產地加工的適宜干燥方法。

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