ELISA檢測無償獻血者HBsAg設置灰區的意義

王振財

（朝陽市中心血站，遼寧 朝陽 122000）

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ELISA檢測無償獻血者HBsAg設置灰區的意義

王振財

（朝陽市中心血站，遼寧 朝陽 122000）

【摘要】目的 研究探討ELLSA檢測無償獻血者HBsAg設置灰區的臨床意義。方法 配置出不同濃度的HBsAg血清樣本，使用ELISA檢測方法進行檢測，將檢測所獲得的S/CO、CV 值分別作為自變量和應變量，使用相應的軟件就可以獲得相應方程式，即可獲得灰區范圍。結果 檢測結果顯示，濃度越高的HBsAg血清樣本，所得的CV值就會越低，而SD與S/CO則會由于血清濃度的升高升高，使用ELISA檢測方法檢測HBsAg灰區的范圍為0.681～1.317。結論 在檢測無償獻血者HBsAg的時候，使用ELISA的檢測方法可以設置灰區的范圍，相對比固定值設置灰區更為科學、合理，同時還能夠降低弱陽性標本的漏檢率和假陽性率，提高檢測的準確性。

【關鍵詞】ELLSA檢測法；HBsAg；無償獻血者

臨床治療疾病的時候，如若需要輸血，最為關鍵的就是保證血液輸注的安全性［1］。全國范圍內的血站都是根據國家衛生部的規定來檢測采集血液進行檢驗。將合格的血液發放到臨床中輸注。隨著血液篩檢程序的嚴格性與病毒血清學敏感性的提高，通過血液傳播乙型肝炎病毒的危險性明顯降低。目前各血站檢測HBsAg的時候，都是用酶聯免疫吸附（ELLSA）檢測法。該種檢測方法特異性較強、靈敏度較高。本文配置出不同濃度的HBsAg血清樣本。研究探討ELLSA檢測無償獻血者HBsAg設置灰區的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料：酶聯免疫吸附法乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒：廈門新創生物有限公司生產；HBsAg強陽血清：采集自乙型肝炎患者；小牛血清：蘭州民海生物工程有限公司生產。

1.2方法：在HBsAg強陽性血清中加入小牛血清，配置成濃度分別為4.1%、4.6%、24%、49%、100%血清樣品。在檢測的時候需要嚴格根據試劑盒上的操作要求進行操作，針對不同濃度的血清，需要進行HBsAg檢測。每種濃度都需檢測10次，均做雙孔，共50次，測定吸光度（A值），取平均值。

1.3統計學處理：應用統計學軟件SPSS 19.0處理實驗結果，應用統計學軟件中的二次方程曲線、直線方程曲線、對數方程、等比級數曲線、復合曲線、指數方程曲線、S形曲線等進行擬合，并進行擬合優度檢驗。最終選出擬合度最好的曲線方程為回歸方程，將S/CO值設為1，根據回歸方程計算出CV值。然后將CV值帶入灰度范圍計算公式，計算出上下限值，獲得灰度設置范圍。

2 結 果

檢測結果顯示，濃度越高的HBsAg血清樣本，所得的CV值就會越低，而SD與S/CO則會由于血清濃度的升高升高，使用ELISA檢測方法檢測HBsAg灰區的范圍為0.681～1.317，見表1。

表1　不同濃度HBsAg血清標本的ELISA檢測結果比較

3 討 論

酶聯免疫吸附（ELLSA）檢測法通過檢測樣本的吸光度值與臨界閾值之間的關系來判定標本的陰陽性［2］。如果吸光值超過臨界閾值，就判斷為陽性；如果小于閾值，則為陰性。如果兩種相等，就需要進行多次檢驗。受到檢驗結果的變異性特點，S/CO（吸光度值/臨界閾值）主要是分布在1的兩側區域。曾經有報道就指出，使用ELLSA檢測法對HBsAg檢測的時候，檢測值在灰區內的標本需要進行重復檢測，結果就發現超過20%的樣本值高于閾值。具體而言，該種方法是對灰區內標本檢測HBsAg進行復檢。部分學者認為0.9～1.1屬于比較高陽性傾向，需要以陽性標本的S/CO值始終保持在灰區范圍內，從而達到控制臨界陽性標本的目的。在本次研究活動開展的過程中擬在S/CO=1（即吸光度等于臨界閾值）的理想狀態下，對標本做無限次ELISA實驗，將（均數±2×標準差）作為質量控制限時，均數+2×標準差為S/CO值上限，均數－2×標準差為S/CO值下限。其中標準差為變異系數與均數的乘積，而均數值又設為 1，所以可將上述公式轉換為（1±2×CV），這樣就可以將灰區的范圍計算出來。但是，事實上，S/CO為1來作為臨界陽性標本是難以實現的，并且無限次的ELISA的試驗也是不會實現的，造成在實際工作中可以直接設定ELISA灰區。通過本次實驗研究，結果顯示ELISA法檢測HBsAg獲得的S/CO值與CV值存在一定相關性，在對5種濃度的HBsAg陽性標本進行ELISA檢測時，獲得了多個CV和S/CO數據，分別將其作為應變量和自變量，應用SPSS軟件擬合曲線獲得回歸方程，再將S/CO值設為1，通過回歸方程算出擬合CV值，最終帶入灰區計算公式獲得灰區范圍［3］。

綜上所述，在檢測無償獻血者HBsAg的時候，使用ELISA的檢測方法可以設置灰區的范圍，相對比固定值設置灰區更為科學、合理，同時還能夠降低弱陽性標本的漏檢率和假陽性率，提高檢測的準確性。

參考文獻

［1］ 宋美蘭，任芙蓉，龔曉燕，等.獻血者HBsAg及抗-HCV ELISA篩查不合格標本的假陽性分析［J］.北京醫學，2013，35（5）:391-395.

［2］ 容瑩，孫秀雙，鄭望春，等.乙型肝炎表面抗原檢測結果分析及灰區設置探討［J］.檢驗醫學與臨床，2010，7（15）:1593-1595.

［3］ 徐錦霞 .ELISA 檢測獻血者HBsAg設定灰區的必要性［J］.檢驗醫學與臨床，2010，7（21）:2361-2362.

中圖分類號：R446.62

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）05-0150-01