穿透性角膜移植術后植片神經再生的共焦顯微鏡觀察

接　英　王　怡　李　上　阮　方　潘志強 *

(1.首都醫科大學附屬北京同仁醫院北京同仁眼科中心　北京市眼科學與視覺科學重點實驗室，北京 100073；2.首都醫科大學附屬北京佑安醫院眼科，北京 100073)

?

穿透性角膜移植術后植片神經再生的共焦顯微鏡觀察

接英1王怡1李上2阮方1潘志強1 *

(1.首都醫科大學附屬北京同仁醫院北京同仁眼科中心北京市眼科學與視覺科學重點實驗室，北京 100073；2.首都醫科大學附屬北京佑安醫院眼科，北京 100073)

【摘要】目的 應用共焦顯微鏡觀察穿透性角膜移植術后植片神經再生的特征。方法角膜激光共焦顯微鏡(heidelberg retina laser tomography， HRT3)對71例穿透性角膜移植患者于術后1、3、6和12個月行連續系列觀察，分析角膜植片上皮下和基質中神經再生的生長規律及不同因素對其再生的影響。結果穿透性角膜移植術后1個月角膜植片中未觀察到任何神經存在。術后3、6、12個月，角膜植片上皮下神經和基質神經的再生率分別為3個月26眼/71眼(36.62%)和11眼/71眼(15.49%)、6個月44眼/71眼(61.97%)和30眼/71眼(42.25%)、12個月46眼/71眼(64.79%)和36眼/71眼(50.74%)；術后12個月，角膜植片再生的上皮下及基質神經纖維與正常角膜神經明顯不同，表現為直徑小、長度短、密度低。不同病因患者行穿透性角膜移植術后12個月時角膜神經再生的比例分別為機械外傷性角膜白斑9眼/10眼(90.00%)、圓錐角膜10眼/12眼(83.33%)、角膜營養不良3眼/4眼(75.00%)、大皰性角膜病變7眼/11眼(63.63%)、病毒性角膜炎6眼/12眼(50.00%)、穿透性角膜移植術(penetrating keratoplasty，PKP)/板層角膜移植術(lamellar keratoplasty，LKP)術后8眼/18眼(44.44%)、先天性角膜白斑1眼/4眼(25.00%)。發生角膜移植排斥反應導致再生的角膜神經不同程度減少或消失。另有5眼再生的上皮下神經發生不明原因的消退或消失。結論穿透性角膜移植術后神經再生受多種因素的影響而差異較大，激光共焦顯微鏡可以對術后的角膜神經再生進行連續隨訪觀察。

【關鍵詞】穿透性角膜移植；共焦顯微鏡；神經再生

激光共焦顯微鏡(confocal microscopy, CM)是一種新型的高精密度、高放大倍率的角膜影像學檢查儀器，可以在活體對角膜和結膜組織進行無創、實時動態和四維(三維加時間)觀察, 可以對角膜進行縱向逐層掃描，精確定位每一層的深度，并可進行水平橫向掃描，從細胞水平活體、動態觀察角膜不同部位病理生理改變，為穿透性角膜移植術(penetrating keratoplasty，PKP)后角膜上皮細胞、基質細胞、內皮細胞以及神經再生的研究提供了新的方法。Cavanagh等[1]最早應用共焦顯微鏡對活體人眼角膜進行了系統觀察，顯示出不同層次角膜細胞及神經的形態特征，隨后CM檢查對穿透性角膜移植術后植片的形態學研究[2-3]時有出現，但單獨對穿透性角膜移植術后植片神經再生的觀察則比較少見[4-5]，尤其是對術后植片神經再生的系統性隨訪觀察的結果更少。本研究選取了在首都醫科大學附屬北京同仁醫院行穿透性角膜移植的71例患者，應用角膜共焦顯微鏡對術后不同時間患者角膜植片中再生的神經形態和密度進行了系列研究，隨訪時間為1年，現將結果報道如下。

1對象和方法

1.1研究對象

選取2009年11月至2010年11月首都醫科大學附屬北京同仁醫院眼科門診穿透性角膜移植(penetrating keratoplasty，PKP)術后復查患者71例(71眼)于術后1、3、6、12個月時分別行共焦顯微鏡檢查(共3次)，記錄所有患者術前及每次術后檢查時的眼部情況(包括視力、眼壓及裂隙燈檢查結果)。其中，男性48例，女性23例，患者年齡10～79歲，平均年齡(43.45±17.64)歲。本臨床觀察獲得首都醫科大學附屬北京同仁醫院醫學倫理委員會批準。

1.2共焦顯微鏡檢查

1)激光共焦顯微鏡(heidelberg retina laser tomographyⅡ/rostock corneel nodule components, HRTⅡ/ RCM)：由德國海德堡視網膜激光斷層掃描系統Ⅱ代(HRTⅡ)與Rostock角膜模塊組件(RCM)組成。其中激光波長為670 nm，觀察視野為400 μm × 400 μm，放大倍數為800 倍，分辨率為1 μm。

2)檢查過程：首先在受檢眼球表面使用0.5%(體積分數)鹽酸愛爾卡因滴眼液(比利時愛爾康公司) 進行充分表面麻醉。之后在共焦顯微鏡物鏡表面均勻覆蓋一層唯地息眼用凝膠(美國博士倫公司)，之后將一次性無菌角膜接觸帽蓋于物鏡上，使接觸帽內表面與物鏡表面通過凝膠相貼附。轉動角膜顯微物鏡，直到左邊的屏幕中出現明亮的激光反射，設此時焦點位置的深度為0 μm。通過調整共焦鏡下頜托和前額托的位置，將受檢者的下頜與前額分別固定在下頜托與前額托上，并使受檢眼外眥與檢查標記線對齊。之后旋轉調鈕前移物鏡，在前進至靠近角膜表面時，調整物鏡位置，使掃描頭對準角膜中心，囑受檢者盡量睜大眼，前移物鏡至角膜接觸帽觸及到受檢者的角膜，通過前后及水平轉動物鏡探頭位置，調整物鏡使之在角膜表面垂直和水平方向移動，以獲得不同深度和不同層次的角膜細胞和神經的圖像，同時選取特征性的圖像進行保存。檢查時首先使物鏡沿角膜前表面移動，先沿植床植片交界處移動360°，并隨時調整焦平面位置所在的角膜深度，觀察植床植片交界處及植片周邊部上皮下神經叢及上皮間神經末梢的形態和密度；然后沿植片水平方向及垂直方向最大徑線移動物鏡，觀察角膜上皮下神經叢及上皮間神經末梢從周邊到中央的變化。由于角膜基質較厚且可能存在水腫、基質細胞活化、基質瘢痕形成等情況，定位觀察基質神經較困難，故檢查時盡量選取多個位置進行逐層掃描，觀察基質神經再生情況。

3)評價方法：根據出現位置及密度的不同，將角膜植片再生的上皮下神經叢及上皮間神經末梢分為4級：①全角膜植片未見神經；②僅角膜植片周邊可見短小的神經纖維，中央未見；③全角膜植片有神經纖維分布，但中央處密度明顯低于周邊；④全角膜植片可見神經纖維，中央處和周邊密度相差不大。同時觀察神經纖維的形態。對于角膜植片再生的基質神經的評價，由于基質神經精確定位困難，故主要觀察角膜植片中是否有基質神經再生，以及再生的角膜基質神經形態。

1.3角膜移植術后常規用藥方案

術后至術后1周：妥布霉素地塞米松滴眼液(典必殊，美國愛爾康公司)Qid，妥布霉素地塞米松滴眼膏(典必殊，Alcon)QN，玻璃酸鈉滴眼液(愛麗，日本參天公司)Qid；術后1周至術后1個月：妥布霉素地塞米松滴眼液Qid，重組牛堿性成纖維細胞生長因子滴眼液Qid，加用環孢素滴眼液Qid；術后1月至術后3個月：復方新霉素多黏菌素(帕利百，Allergan公司，美國)Tid，玻璃酸鈉滴眼液Tid，環孢素滴眼液Qid；術后3月至術后6個月：復方新霉素多黏菌素Tid，玻璃酸鈉滴眼液Tid，環孢素滴眼液Tid；術后6至12個月：復方新霉素多黏菌素Bid，玻璃酸鈉滴眼液Bid，環孢素滴眼液Bid。

2結果

2.1角膜移植術后神經再生觀察

術后1個月，71例71眼角膜植片中，未觀察到有任何上皮下神經叢、上皮內神經末梢及基質神經的形態。可見植床植片交界處位于植床的神經斷端還未進入植片，前彈力層處未見芽生狀態的神經纖維，基質中未見明顯的神經纖維樣結構(圖1A)。

2.2術后植片上皮下神經叢和基質神經再生

隨時間延長呈逐漸增加趨勢，71例穿透性角膜移植患者術后3～6個月神經再生最明顯，術后12個月上皮下神經叢的再生率為46眼/71眼(64.79%)，基質中神經再生率為36眼/71眼(50.74%)(圖2)。

1)上皮下神經叢：術后3個月，半數以上角膜植片中未見到上皮下神經叢(45眼/71眼，63.38%)，小部分可見細短、迂曲的神經纖維從植床長入植片周邊(22眼/71眼，30.99%)，僅有極少數植片中央可見神經纖維存在(4眼/71眼，5.63%)(圖1B、1C)。

術后6個月，半數以上(44眼/71眼61.97%)植片有神經長入，其中18眼(25.35%)是術后首次發現有神經長入植片，中央有神經長入的植片比術后3個月時明顯增多，神經纖維形態依舊是細、短、迂曲，分支少，平行排列少(圖1D)。

術后12個月，有神經再生的植片所占的百分比與術后6個月基本相同，但中央有神經長入的植片所占比例高于術后6個月，再生的神經纖維比術后6個月時長度更長、密度更高，植片中央神經排列趨于平行(圖1E)。再生的神經纖維均位于前彈力層、基底細胞及翼狀細胞之間，即上皮下神經叢，未觀察到分布于表層上皮細胞間的神經纖維，即上皮內神經末梢(圖1F，圖3A)。

圖1 　PKP術后植片上皮下神經及基質神經再生的共焦顯微鏡(40×)觀察

A:1 Month after PKP, there is no nerve fiber in corneal stroma; B: 3 Months after PKP, subepithelial fibers cross the corneal incision; C: There is a few nerve fibers in the center area; D: 6 Months after PKP, subepithelial fibers are still slight and few; E: 12 Months after PKP, subepithelial fibers are parallel arranged with increased density; F:Subepithelial fibers on the corneal graft is fine and regular arranged； PKP：penetrating keratoplasty；LSCM：laser scanning confocal microscopy.

表1　上皮下神經叢再生情況

2)基質神經：與角膜植片上皮下神經再生比較，在術后同一時期，基質神經再生的比例總低于上皮下神經叢，但隨著術后時間的延長，二者差距逐漸縮小。

圖2　神經纖維分支現象及棉線樣再生的基質神經纖維的共焦顯微鏡(40×)觀察

A:Distribution of subepithelial nerve is basically synchronized with stromal nerve fibers; B:Bifurcation phenomenon of nerve fibers can be seen in 2 cases;C,D: curving regenerate nerve fibers can be seen in the other 6 cases;LSCM：laser scanning confocal microscopy.

與正常角膜基質神經纖維相比，再生的基質神經纖維明顯細，且在3次檢查中發現隨時間延長神經纖維增粗不明顯；基質神經纖維的密度也明顯低于正常角膜；且極少能觀察到有神經纖維分叉的現象(僅在術后6個月時觀察到2例)(圖3B)。另外還觀察到6例植片中存在彎曲呈棉線樣的再生的基質神經纖維(圖2C，圖3D)。

2.3排斥反應對角膜神經再生的影響

在71例連續隨訪患者中，術后3～12個月內，共觀察到23例正在發生混合型排斥反應(術后3個月11例，術后6個月7例，術后12個月5例；原發病因分別為非化學性外傷性角膜白斑2眼，圓錐角膜0眼，角膜營養不良1眼，大皰性角膜病變2眼，病毒性角膜炎3眼，PKP/LKP術后10眼，先天性角膜白斑4眼，原發病不詳1眼),其中21眼未觀察到再生的上皮下神經纖維叢，2眼中雖可見再生的上皮下神經纖維，但密度較排斥前明顯減少，而且出現神經纖維變短、變細、斷裂；17眼未觀察到基質神經纖維，6眼可見再生的基質神經纖維，形態及密度未見明顯異常(圖3A)。

圖3 　角膜植片排斥反應發生后及

A,B:The rejection reaction of corneal craft results in subepithelial nerves to be reductive, shorter, slighter, and fractured, but regenerate stromal nerves cannot see obvious abnormal of morphology and density; C， D：Even though the no postoperative complication cases also have the phenomenon of regenerate subepithelial nerves automatically disappearance, but none in stromal nerves； LSCM：laser scanning confocal microscopy.

隨訪至術后12個月時，在9例原有上皮下神經再生而之/后發生了排斥反應的植片中，6例未觀察到任何上皮下神經存在；5例原有基質神經再生而之后發生了排斥反應的植片中，2例未觀察到任何基質神經存在。

排斥反應治療后恢復透明的植片共觀察到9例，其中：上皮下神經：排斥前有神經再生治療后再生神經消失4例，排斥前與治療后都沒有神經再生4例，治療后再生的神經仍存1例。基質神經：排斥前有神經再生治療后再生神經消失2例，排斥前與治療后都沒有神經再生5例，治療后再生的神經仍存1例，排斥前無神經再生治療后有神經再生1例。且在同一個患者的植片中，再生的上皮下神經與基質神經對排斥反應及治療的反應不同，即并不是同時消失或同時存留。

2.4眼壓升高對角膜神經再生的影響

隨訪至術后12個月的71例患者中，5例術后發生了眼壓升高，均發生在術后1個月內，其中3例經藥物治療后眼壓恢復正常，2例藥物治療無效，行睫狀體光凝后眼壓正常。截止術后1年時，上皮下神經和基質神經的再生率均為80%(其中3例上皮下神經和基質神經均有再生，2例僅有上皮下或基質神經再生)。由于發生術后高眼壓的患者例數過少，與術后眼壓正常患者的神經再生率很難進行統計分析，本研究只能推測術后短期眼壓升高不影響角膜神經再生。

2.5不同病因對角膜神經再生的影響

不同病因的角膜移植患者隨訪至末次檢查時，角膜植片內有神經再生的比例(包括單獨有上皮下神經或基質神經再生，或二者同時存在)：非化學性外傷性角膜白斑9眼/10眼(90.00%)、圓錐角膜10眼/12眼(83.33%)、角膜營養不良3眼/4眼(75%)、大皰性角膜病變7眼/11眼(63.63%)、病毒性角膜炎6眼/12眼(50.00%)、PKP/LKP術后8眼/18眼(44.44%)、先天性角膜白斑1眼/4眼(25.00%)。

2.6再生神經纖維的不明原因消退

經過仔細詢問病史和臨床檢查后，確定沒有發生過術后合并癥(包括：排斥反應、繼發性青光眼、縫線松脫、傷口漏水或哆開、原發病復發的等)的5例角膜植片中，3例(術后6個月1例、術后12個月2例)已有上皮下神經再生的植片在之后一次檢查時發現再生的神經消失，2例(術后12、16個月各1例)已有再生的上皮下神經纖維明顯比上一次檢查時密度降低，長度變短，迂曲呈斷續狀；再生的基質神經纖維沒有觀察到類似的情況發生，且上述5例角膜植片中再生的基質神經纖維均沒有消退(圖3C)。

3討論

CM是一種新型的光學顯微鏡,其分辨率可達1 μm，放大倍數可達到800倍，與傳統的組織學檢查方法相比，其是一種活體檢查方法，無須組織固定、切片及染色等程序，通過對角膜組織進行無損傷的光學斷層掃描成像，在活體條件下就能觀察到角膜內不同層次和部位細胞和神經的形態和結構，而且能夠在不同時間進行動態連續觀察。本研究利用此技術連續觀察PKP術后1年內的神經再生情況。

Rozsa等[2]對兔同種異體穿透性角膜移植術后的角膜神經再生進行了為期3個月的觀察，發現術后24 h～14 d內，神經仍處于退行狀態,從術后21 d開始，開始神經再生，處于恢復期,但僅見到少數上皮內神經末梢。Darwish等[3]應用CM對11例PKP患者進行術后1、3、6及12個月的隨訪觀察，發現術后12個月內均無上皮下神經叢再生，前部基質神經再生為術后6個月有5例，術后9～12個月有8例。Richter等[4]發現PKP術后2年可觀察到上皮下神經叢的再生，再生的基質神經于術后2個月可在角膜植片周邊觀察到，術后7個月可在角膜植片中央觀察到。Niederer等[5]發現PKP術后40年，上皮下神經叢的神經纖維密度及分支數低于正常人。Tervo 等[6]應用組織化學染色技術發現PKP術后3年角膜神經纖維的結構和密度仍不能完全恢復，上皮下神經術后可再生，但基質神經缺乏，推測可能是Schwann細胞在供-受體結合處的不連續性妨礙了基質神經的再生。

徐建江等[7]觀察PKP術后3～6個月即可在角膜植片周邊觀察到細小再生的角膜神經纖維，但在植片中央區缺如；上皮下神經叢的再生則至少需要2～3年，再生的神經纖維的形態與正常神經纖維有差異，表現為神經異常扭曲，走行方向異常以及明顯粗于或細于正常神經纖維。有研究[8]以兔為動物模型，分為兩組，一組行上方180°的角膜緣全層切開，一組行植片自體旋轉180°后的穿透性角膜移植,結果發現前者再生的神經速度明顯快于后者，主要是由基質神經構成，而在后者在術后很長時間, 也只有極少數基質神經再生, 而且再生的神經纖維局限于上皮下神經。 造成這種差異的原因可能在Schwann細胞被膜和神經內管整齊對合排列是否破壞、微環境神經肽和其他細胞因子狀況、瘢痕存在與否及其程度大小等因素的影響。謝立信[9]發現，PKP術后角膜瘢痕明顯區域內神經再生程度和數量均相對較低，提示減少術后瘢痕形成，有利于術后角膜神經的再生。

本研究發現，PKP術后1個月內角膜植片均沒有上皮下神經叢和基質神經存在，與已知報道結果一致[3-4，7]。術后1個月內植片的供體神經在被切斷后逐漸消失，同時受體角膜植床的神經纖維未開始長入角膜植片，間接證明術后3個月觀察到的植片神經纖維是再生的神經纖維。同時筆者還發現上皮下神經叢在術后3個月已有少量神經再生，這比大部分報道[3-4，7]的人角膜移植術后神經再生的最早時間要早，比動物實驗[2]結果晚，推測可能與本研究觀察患者數量較多且為連續隨訪觀察有關。筆者也觀察到植片內再生的上皮下神經是由植床植片交界處植床的神經纖維斷端向植片內生長，但未發現明顯的芽生狀態的細小神經纖維，推測PKP術后上皮下神經再生主要由受體植床內的上皮下神經纖維直接長入植片內。

基質神經再生最早見于術后3個月，直到術后6～12個月內陸續有約50%的角膜植片有基質神經再生，與術后2～3個月可見周邊部基質神經再生的報道[4-7]一致。大多數研究[3-4，7]均觀察到基質神經再生早于上皮下神經，但本研究發現術后早期基質神經再生比例少于上皮下神經再生，這仍可能與不同觀察選取的患者數量及隨訪方法有關。本研究還發現，6例植片中存在彎曲呈棉線樣的再生的基質神經纖維，PKP術后1年[7]和準分子激光視角膜原位磨鑲術(laser-assisted in situ keratomileusis，LASIK)術后都觀察到了再生的角膜基質神經纖維扭曲、纖細并卷曲等現象，但其產生機制不明，筆者推測PKP術后彎曲的基質神經可能與新生神經纖維的Schwann細胞神經內管形態異常有關。

林躍生等[10]應用CM觀察發現，排斥反應發生時角膜上皮下神經水腫呈串珠樣改變，本研究發現排斥反應發生時再生的上皮下神經纖維數較排斥前明顯減少，纖維變短、變細和斷裂，且治療后部分再生的神經纖維又消失，但排斥反應對角膜基質神經的影響相對較小。由于本研究所觀察的排斥反應均為較嚴重的混合型排斥反應，且就診時間晚，植片損害嚴重，故所觀察到的神經明顯減少和斷裂已屬神經損傷后不可逆死亡，與發現治療后再生的神經消失可能相關。

不同病因角膜移植術后植片的神經再生差異較大，角膜營養不良、圓錐角膜和非化學性外傷性角膜白斑術后神經再生恢復最好，與眼部環境改變小及患者相對年輕有關[11-13]。大泡性角膜病變和病毒性角膜炎角膜白斑患者術后神經再生比例較低，推測與術后仍然存在病理性眼部環境有關。PKP/LKP術后及先天性角膜白斑的患者術后神經再生比例最低與容易發生排斥反應有關。

PKP術后無合并癥情況下，上皮下神經再生后又明顯減少甚至消失的報道罕見。Calvillo等[11]使用共焦顯微鏡對LASIK術后神經再生進行了觀察，發現雖然在術后2年時上皮下神經密度與術前水平基本一致, 而此后又發現神經密度再次下降，在術后3年時上皮下神經數量低于術前的60%。本研究共發現5例上皮下再生神經減少或消失，這些患者再生神經消退的原因不明，是否預示著之后可能發生的晚期植片失敗還有待進一步追蹤隨訪。

總之，穿透性角膜移植術后角膜神經再生緩慢，術后多年再生的神經在形態和密度上仍達不到正常人水平，上皮下神經叢和基質神經再生的時間有差異。利用共焦顯微鏡這一技術，可在活體上實現對角膜不同部位的連續動態觀察，為角膜移植術后神經再生的觀察提供了新的手段，為角膜移植術后神經再生的精準治療提供了依據。

4參考文獻

[1]Cavanagh H D, Jester J V, Essepian J, et al. Confocal microscopy of the living eye[J]. CLAO J, 1990, 16:65-73.

[2]Rozsa A J, Guss R B, Beuerman R W. Neural remodeling following experimental surgery of the rabbit cornea[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1983, 24(8): 1033-1051.

[3]Darwish T, Brahma A, et al. Subbasal nerve regeneration after penetrating keratoplasty[J]. Cornea, 2007, 26(8): 935-940.

[4]Richter A, Slowik C, Somodi S, et al. Corneal reinnervation following penetrating keratoplasty-correlation of esthesiometry and confocal microscopy[J]. Ger J Ophthalmol, 1996, 5: 513-517.

[5]Niederer R L, Perumal D, Sherwin T, et al. Corneal innervation and cellular changes after corneal transplantation: an in-vivo confocalmicroscopy study[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2007, 48: 621-626.

[6]Tervo T, Vannas A, Tervo K, et al. Histochemical evidence of limited reinnervation of human corneal grafts[J]. Acta Ophthalmol: Copenh, 1985, 63: 207-214.

[7]徐建江, 樂琦驊. 眼表活體共聚焦顯微鏡[M]. 上海: 復旦大學出版社, 2009: 78-80.

[8]張增群, 謝立信, 董曉光. 角膜神經損傷后再生的形態和功能學研究[J]. 中華眼科雜志, 1994, 30: 301-304.

[9]謝立信. 角膜移植學[M]. 北京: 金盾出版社, 2000: 37-38.

[10]林躍生, 孫明霞, 陳家琪,等. 角膜移植排斥反應的共焦顯微鏡研究[J].中國實用眼科雜志, 2001, 19(8): 592-595.

[11]Calvillo M P, McLaren J W, Hodge D O, et al. Corneal reinnervation after LASIK: prospective 3-year longitudinal study[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci, 2004, 45(11): 3991-3996.

[12]許鳳,王林菊,封亞玲,等. 連續性護理干預對角膜移植患者術后療效的影響[J]. 中國煤炭工業醫學雜志，2015，18(9)：1572-1574.

[13]王玲,張淑貞,張小利,等. 主動點眼與被動點眼對病毒性角膜炎的療效分析[J]. 中國煤炭工業醫學雜志，2014，17(12)：1944-1946.

編輯慕萌

Characteristics of nerve regeneration after penetrating keratoplasty observed by confocal microscopy

Jie Ying1, Wang Yi1, Li Shang2, Ruan Fang1, Pan Zhiqiang1*

(1.BeijingTongrenEyeCenter,BeijingOphthalmologyandVisualScienceKeyLaboratory,BeijingTongrenHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100073,China; 2.DepartmentofOphthalmology,BeijingYouanHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100073,China)

【Abstract】ObjectiveTo observe the characteristics of nerve regeneration after penetrating keratoplasty. Methodsheidelberg retina laser tomography (HRT3) corneal confocal microscopy was used to observe patients after penetrating keratoplasty. 71 patients were observed at1, 3, 6 and 12 months after the surgery. The characteristics of nerve growth and the associated factors influencing nerve regeneration in corneal grafts including subepithelial nerves and stromal nerves were analyzed. ResultsThere was no regenerated nerves in the grafts at 1 month after the surgery. In all 71 patients, the rate of nerve regeneration, including subepithelial nerves and stromal nerves, at 3,6 and 12 months after penetrating was 26/71 (36.62%) and 11/71 (15.49%), 44/71 (61.97%) and 30/71 (42.25%), 46/71 (64.79%) and 36/71 (50.74%) respectively. At 12 months after the surgery, we found the characteristics of the regenerated nerves was significantly different from that of the normal corneal nerves. The regenerated nerves tended to be smaller in diameter, shorter in length and lower in density. For different etiology, the rate of nerve regeneration at the twelfth month after the surgery was different, among which traumatic corneal walleye was 9/10 (90.00%), keratoconus 10/12 (83.33%), corneal dystrophy 3/4 (75.00%), bullous keratopathy 7/11 (63.63%), viral keratitis 6/12 (50.00%), past PKP/LKP surgery 8/18 (44.44%), congenital corneal walleye 1/4 (25.00%). Regenerated nerves decreased or disappeared in different degrees in the rejected corneal grafts. We also found that regenerated nerves occured unexplained subside or disappear in 5 patients. ConclusionCorneal nerve regeneration after penetrating keratoplasty was affected by many factors and was varied. Confocal microscopy can do a continuous follow-up observation of nerve regeneration after corneal transplantation.

【Key words】penetrating keratoplasty; confocal microscope; nerve regeneration

基金項目：國家自然科學基金 (81170824)。This study was supported by National Natural Science Foundation of China(81170824).

*Corresponding author， E-mail：panyj0526@163.com

[doi：10.3969/j.issn.1006-7795.2016.03.024]

【中圖分類號】R 779.65

(收稿日期：2016-03-06)

網絡出版時間：2016-06-0719∶07網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160607.1907.060.html

· 臨床研究 ·