蜜炙酸棗仁中斯皮諾素含量測定

隋利強　王　建　黃禮書　陳喆明

(1 福建中醫藥大學，福州，350122； 2 濟寧市食品藥品檢驗檢測中心，濟寧，272025)

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蜜炙酸棗仁中斯皮諾素含量測定

隋利強1王建2黃禮書1陳喆明1

(1 福建中醫藥大學，福州，350122； 2 濟寧市食品藥品檢驗檢測中心，濟寧，272025)

摘要目的：以高效液相色譜法測定蜜炙酸棗仁中斯皮諾素的含量。方法：采用反相高效液相色譜法，以WondaCract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5 μm)為色譜柱，乙腈-水為流動相，檢測波長335 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃。結果：斯皮諾素的線性范圍0.005～0.3 mg/mL，r=0.9965，平均回收率為99.74%，RSD=1.46%。結論：該方法準確、重現性好，可為蜜炙酸棗仁的炮制工藝研究及質量控制提供檢測標準。

關鍵詞高效液相色譜法；蜜炙酸棗仁；斯皮諾素

酸棗仁為鼠李科Rhamnaceae植物酸棗的種子，是臨床應用較為廣泛的中藥，具有養肝、寧心安神、生津、斂汗的功效，臨床主要用于治療失眠、心脾氣血兩虛，脾不統血證與治陰虧內熱，心神不寧證,臨床常用于治療虛煩不眠[1-2]。

有關酸棗仁炮制方法的記載，最早見于南齊《劉涓子鬼遺方》，記載方法為炒法。歷代炮制方法包括蒸法、酒浸法、姜汁炒等。2015版《中華人民共和國藥典》中收載酸棗仁、炒酸棗仁。除此之外，福建省臨床常用蜜棗仁，初步調研,福州同春藥業有限公司供應的酸棗仁有酸棗仁、炒酸棗仁、蜜棗仁3種炮制品，近些年蜜棗仁銷售量接近炒酸棗仁，說明蜜棗仁在福建省用的比較普遍，是地方習慣用藥。該飲片用藥歷史悠久，收載于《福建省中藥飲片炮制規范》[3]。

實踐證明,酸棗仁蜜炙后不但可增強益陰斂汗作用，而且利于貯藏。研究顯示，酸棗仁、炒酸棗仁、蜜棗仁3種炮制品在相同條件下貯藏12個月，蜜棗仁顏色、光澤、氣味、霉變、蟲蛀等5個方面均優于酸棗仁和炒酸棗仁。初步分析，酸棗仁經煉蜜炮制后，蜂蜜易滲人酸棗仁內部組織，降低酸棗仁的含水量，使酸棗仁不易吸潮霉變，顏色鮮艷，光澤度好，易于貯藏。此外,蜂蜜含有較豐富的營養成分，如葡萄糖、果糖、蔗糖、有機酸、維生素及無機鹽類等，具滋補作用，味甜能矯味，并具有潤肺止咳、潤腸通便、解毒的作用，所以酸棗仁蜜炙后可增強益陰斂汗作用。另外，蜂蜜中含有大量還原糖，能防止藥材有效成分的氧化變質[4]。

現代研究表明酸棗仁含酸棗仁皂苷、三萜化合物等，具有鎮靜、催眠、安神的作用。此外，2015年版《中華人民共和國藥典》中所規定的酸棗仁質量標準中還包括斯皮諾素，該成分是酸棗仁中起效成分和質控成分。所以本研究以斯皮諾素為標準品，用高效液相色譜法測定了蜜炙酸棗仁中該成分的含量，旨在為蜜炙酸棗仁中斯皮諾素的含量測定及質量控制提供檢測標準[5]。

1儀器與試劑

電子天平(梅特勒-托利多稱重設備有限公司，XS105型)；電子天平(賽多利斯科學儀器有限公司，京制00000246)；高效液相色譜儀(戴安，U3000型)。

甲醇(20141218，國藥集團化學試劑有限公司)；乙腈(20140321，國藥集團化學試劑有限公司)；酸棗仁(20141107，隴西聚堂中藥材實業有限公司)；斯皮諾素(99.35%，MuST-14042311，中國科學院成都生物研究所)。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱WondaCract ODS-2，(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：乙腈-水；檢測波長：335 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進樣量：10 μL；以乙腈為流動相A，以水為流動相B；梯度洗脫；理論板數按斯皮諾素峰計算應不低于2000。

表1　斯皮諾素HPLC梯度洗脫條件

圖1　蜜棗仁樣品HPLC圖譜

圖2　斯皮諾素標準品HPLC圖譜

2.2對照品溶液的制備取斯皮諾素對照品10 mg,精密稱定，于10 mL容量瓶中加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得，HPLC圖譜見圖1。

2.3供試品溶液的制備參考文獻[6-8]，取蜜棗仁樣品粉末(過四號篩)約1 g，精密稱定，置索式提取器中，加石油醚(60%～90%)適量，加熱回流4 h，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，加入70%乙醇20 mL，加熱回流2 h，濾過，濾渣用70%乙醇5 mL洗滌，合并洗液與濾液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得[9-15]，HPLC圖譜見圖2。

2.4標準曲線的繪制精密吸取斯皮諾素對照品貯備液0.1、0.15、0.2、0.3、0.6 mL,分別置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，配成系列對照品溶液。按上述色譜條件進樣測得各濃度峰面積，以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，得回歸曲線Y=220.23x+1.4498，R=0.9930，結果顯示斯皮諾素在0.05～0.3范圍內有良好線性關系。見圖3。

2.5精密度試驗精密量取對照品溶液(1 mg/mL)0.2 mL于2 mL容量瓶，加甲醇定容，進樣量為10 μL,分別連續進樣5次，結果對照品峰面積的RSD=1.52%。見表2。

圖3　斯皮諾素標準曲線

編號123456RSD%峰面積23.9924.0524.1724.1224.3124.991.52

2.6穩定性試驗精密量取對照品溶液(1 mg/mL)0.2 mL于2 mL容量瓶，加甲醇定容，進樣量為10 μL，分別于1、2、3、4、6、8、10和12 h進行測定，結果對照品峰面積的RSD=1.89%。見表3。

表3　穩定性試驗

2.7重復性試驗取同一樣品5份，每份1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別進樣，進樣量10 μL，測定5個結果RSD為2.0%。見表4。

表4　重復性試驗

2.8加樣回收率試驗精密量取已知含量(0.1430 mg/mL)的炒酸棗仁樣品溶液0.9 mL，加入0.1 mL對照品溶液(1 mg/mL)，搖勻，進樣10 μL進行測定，平行測定6份。計算平均回收率，結果平均回收率為99.74%，RSD=1.46%。見表5。

表5　斯皮諾素加樣回收率

2.9樣品含量測定樣品按上述供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液10 μL，依照上述色譜條件進行測定。見表6。

表6　樣品斯皮諾素含量測定結果

3討論

本實驗以斯皮諾素為標準品，用HPLC法測定了福州特色飲片蜜炙酸棗仁中該成分的含量，實驗結果顯示，該方法準確、重現性好，可為蜜炙酸棗仁的炮制工藝研究及質量控制提供檢測標準。

目前，蜜棗仁生產多依賴傳統經驗，缺乏客觀化、數字化、可推廣的工藝參數。如此條件下，很難保證飲片質量，進而會影響臨床療效。因此，斯皮諾素含量可作為質控指標，開展蜜棗仁炮制工藝規范化和質量標準研究。

實驗過程中，嘗試分析生棗仁中斯皮諾素的含量，發現酸棗仁蜜炙后斯皮諾素含量稍有升高，可能與炮制過程輔料和加熱有關，尤其是加熱可在一定程度上促進藥效成分的溶出。如需進一步研究酸棗仁蜜炙過程中的變化，需結合多個化學成分指標和藥效學分析進行深入研究。

參考文獻

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(2015-10-20收稿責任編輯：洪志強)

Determination of Spinosin in Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae

Sui Liqiang1,Wang Jian2,Huang Lishu3,Chen Zheming3

(1FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China; 2JiNingCenterforFoodandDrugControl,JiNing272025,China; 3FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China)

AbstractObjective:To determine the content of Spinosin in Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae(Mizhi Suanzaoren) by HPLC(High Performance Liquid Chromatography).Methods:The experiment was conducted in the condition of WondaCract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5μm),mobile phase isacetonitrile-water,detection wavelength 335nm,and flow velocity 1 mL/min,column temperature 30 ℃,using RP-HPLC.Results:The linearity range of Spinosin is 0.005～0.3 mg/mL,r=0.9965,average recovery rate is 99.74%,RSD=1.46%.Conclusion:This method is accurate with great reproducibility.It can offer testing standards for processing study and quality control of Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae.

Key WordsHPLC; Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae; Spinosin

基金項目：福建省自然科學基金面上項目——基于特征成分“安神”增效的“蜜棗仁”炮制原理研究(編號：2016J01386)；福建中醫藥大學校管重點學科專項課題——福州特色飲片“蜜棗仁”炮制工藝規范化研究(編號：X2014106-學科)

通信作者：隋利強(1981.05—)，男，研究生，講師，研究方向：中藥炮制原理與炮制工藝研究，E-mail：suiliqiang007@163.com

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.040