一種實驗兔膝關節滑膜組織提取新方法

王俊偉，陳利鋒，王華松，陳 芳，王麗平，劉 琴（.湖北中醫藥大學針灸骨傷學院，武漢430065；.廣州軍區武漢總醫院，武漢 430060）

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簡 訊

一種實驗兔膝關節滑膜組織提取新方法

王俊偉1，陳利鋒2，王華松2，陳 芳2，王麗平2，劉 琴2
（1.湖北中醫藥大學針灸骨傷學院，武漢430065；2.廣州軍區武漢總醫院，武漢 430060）

類風濕性關節炎（RA）典型病理表現之一為滑膜組織增生。成纖維樣滑膜細胞（FLSs）在RA的發生、發展中發揮著重要作用。在原代FLSs體外培養過程中，滑膜組織提取成功與否是實驗順利進行的關鍵。以往兔膝關節滑膜組織提取大都是提起髕骨上下進行分離，在實驗中我們發現將髕骨提起分離兩側及脛骨時需要將髕骨翻轉，此時難以辨認關節囊內外層組織的解剖關系，致使分離困難，可能將纖維層混雜導致培養細胞純度不高。本研究在此基礎上進行改良，建立一種簡單易行的提取方法并附圖做詳盡說明。

方法：取新西蘭兔一只，耳緣靜脈空氣栓塞處死，75%酒精浸潤雙大腿皮膚5 min。沿踝關節切開皮膚至大腿根部，充分剝離皮膚，顯露膝關節。將膝關節周圍筋膜層剝離，捫及髕骨骨性標志。采取髕骨下極上緣0.5 cm處切開長約1 cm橫行切口，離斷髕腱，保留髕下脂肪墊作為識別滑膜組織標志。沿切口向內外側髁游離，提夾關節囊層，必要時離斷內外側副韌帶。仔細辨認關節囊內壁一層薄薄的組織，即為滑膜。助手輔助下仔細分離小心鉗夾，剔出滑膜組織上的血液及脂肪組織。將取出滑膜組織置于EP管中（內含100 U/mL青霉素、100 mg/mL鏈霉素的PBS液）。

提取前明確滑膜組織解剖關系將大大減少術中辨認時間（圖1）。本研究中，取髕骨下極上緣0.5 cm處切口，考慮此處為關節間隙水平，其下方為髕下脂肪墊。髕下脂肪墊與滑膜組織毗鄰，可作為滑模層辨認的標志，術中需離斷外側副韌帶（圖2）。橫行切開髕韌帶，從一側打開即可肉眼見到關節囊的內外分層，內層即為實驗所需的滑膜層（圖3）。研究組以該法提取兔膝關節滑膜組織，操作簡單，實驗時間約1 h，組織純度高，經傳代培養，細胞呈典型纖維樣改變（圖4），是一種切實可行且簡單的實驗方法。

術中注意：（1）提取時需避免滑膜組織混雜血液及脂肪；（2）正常滑膜組織透亮，有一定黏性，但韌度不足，操作需動作輕柔，切勿粗暴。關節炎誘導模型兔滑膜組織則因充血、炎性增生而變厚、質韌，形態學發生一定改變，需注意辨清層次關系。

圖1 正常膝關節解剖

圖2 實驗兔膝關節組織層次關系

圖3 實驗兔膝關節組織層次關系

圖4 所提取滑膜培養的細胞

【中圖分類號】

【文獻標識碼】A

【文章編號】1671-7856（2016）06-0094-01

doi：10.3969.j.issn.1671-7856.2016.06.017

［基金項目］湖北省衛生廳中醫藥科研課題（2013Z-Y37）；廣州軍區武漢總醫院課題（YZ201422）。

［作者簡介］王俊偉，湖北中醫藥大學研究生院，2014級碩士研究生在讀。

［通訊作者］陳利鋒，廣州軍區武漢總醫院中西醫結合科，副主任醫師。