HPLC法測定抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量

陳　健

(重慶市涪陵食品藥品檢驗所，重慶　408000)

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HPLC法測定抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量

陳健

(重慶市涪陵食品藥品檢驗所，重慶408000)

摘要：目的建立抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素含量測定的高效液相色譜方法。方法色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：360 nm。結果槲皮素質量濃度在1.034～20.68 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系(r=0.999 3)，加樣回收率為97.14%，RSD值為0.84%(n=6)；山柰素質量濃度在2.061～41.22 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系(r=0.999 1)，加樣回收率為98.05%，RSD值為0.59%(n=6)。結論該方法定量準確可靠，操作簡便，靈敏度高，可用于抗菌消炎膠囊的質量控制。

關鍵詞：槲皮素；山柰素；抗菌消炎膠囊；高效液相色譜法

抗菌消炎膠囊是由金銀花、大黃、大青葉、金錢草等7味中藥制成，具有清熱、瀉火、解毒的功效。方中的金錢草是主藥，有效成分為槲皮素和山柰素等。筆者參考文獻[1-6]，采用高效液相色譜法對抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量進行測定，建立了該產品有效成分含量測定的方法。

1儀器與試藥

1.1儀器Sartorius-ME215S電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；Agilent 1260高效液相色譜儀(安捷倫科技(中國)有限公司)。

1.2試藥抗菌消炎膠囊，伊春五加參藥業有限責任公司生產，批號分別為20140902，20150101和20150301；槲皮素和山柰素對照品，由中國食品藥品檢定研究院提供，批號為100081-200406和110861-200808，質量分數為96.5%和93.2%；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：安捷倫Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；檢測波長：360 nm；流動相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(50∶50)，使用前經0.45 μm有機濾膜抽濾并脫氣；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2溶液制備

2.2.1供試品溶液取樣品2 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加鹽酸3 mL，再加入體積分數為80%的甲醇40 mL，密塞，加熱回流1 h，放冷，移至50 mL量瓶中，用體積分數為80%的甲醇定容，搖勻，過濾。取續濾液，即得。

2.2.2對照品溶液取槲皮素對照品及山柰素對照品適量，精密稱定，加體積分數為80%的甲醇制成1 mL含槲皮素10 μg、山柰素20 μg的混合溶液，即得。

2.2.3陰性對照品溶液按照抗菌消炎膠囊制備工藝，制備缺少金錢草的陰性樣品溶液，按照供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3方法學考察

2.3.1專屬性考察取2.2項下3種溶液，依照2.1項下色譜條件進行測定。結果樣品與槲皮素對照品和山柰素對照品在相同時間內有色譜峰出現，而陰性對照品溶液在此處未出現色譜峰，表明該方法專屬性良好。見圖1。

2.3.2線性關系考察精密量取對照品溶液1，5，10，15和20 mL，加體積分數為80%的甲醇分別定容于100 mL量瓶中，按照2.1項下色譜條件HPLC法進行分析。以峰面積Y和質量濃度X繪制標準曲線，得回歸方程：槲皮素Y=48.524X+8.023 4，r=0.999 3，質量濃度在1.034～20.68 μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系。山柰素Y=51.420X-19.361，r=0.999 1，質量濃度在2.061～41.22 μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系。

圖1HPLC圖

A.陰性對照； B.對照品； C.供試品；1.槲皮素；2.山柰素

Fig.1 HPLC chromatograms

A.negative sample；B.reference substances；C.sample；1.quercetin；2.kaempferol

2.3.3精密度實驗取同一質量濃度對照品溶液，重復進樣6次，計算槲皮素和山柰素峰面積的RSD值分別為0.52%和0.46%(n=6)。

2.3.4重復性實驗取樣品(批號為20140902)6份，每份2 g，按照2.2.3項下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，測定含量，計算槲皮素和山柰素含量的RSD值分別為0.89%和0.82%(n=6)。

2.3.5穩定性實驗取同一供試品溶液，室溫放置，分別于配制后0，2，4，8，12和24 h進樣測定，計算槲皮素和山柰素峰面積的RSD值分別為0.96%和0.84%(n=6)。

2.3.6加樣回收實驗取同一批樣品(批號為2014 0902)6份，精密加入槲皮素對照品(質量濃度為0.103 4 mg·mL-1)和山柰素對照品(質量濃度為0.206 1 mg·mL-1)適量，按照供試品溶液制備方法進行制備，并依法測定，結果見表1。

表1回收實驗結果

Tab.1 Results recovery tests

(n=6)

2.4樣品測定依法測定3批樣品，計算含量。結果顯示，批號為20140902，20150101和20150301的抗菌消炎膠囊中槲皮素和山柰素的含量分別為0.247 2和0.303 1，0.250 8和0.311 7，0.247 5和0.320 3 mg·g-1。

3討論

取槲皮素對照品溶液和山柰素對照品溶液，用島津UV-2006型紫外分光光度計在200～400 nm波長范圍內進行掃描，結果在254和360 nm波長處有最大吸收；在360 nm處吸收更靈敏，參考《中國藥典》2010年版，采用360 nm為檢測波長[7]。

取槲皮素對照品溶液和山柰素對照品溶液，用二極管陣列檢測器進行光譜掃描，同時樣品也進行光譜掃描，在相應保留時間內掃描結果峰形一致，無雜質峰干擾。

考察水解時間，在0.5，1，2和5 h水解后測定槲皮素和山柰素的含量，在水解1 h后含量無明顯增加，所以采用水解時間為1 h。

參考文獻：

[1]譚忠謀，韋建喬，蒙露露.高效液相色譜法測定金錢草顆粒中槲皮素含量[J].中國藥業，2012，21(9)：24-25.

[2]梁國華，梁曉琪.HPLC測定復方肝炎顆粒中槲皮素和山柰素的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19(24)：90-92.

[3]李洪斌，余翔，李洪剛.HPLC法測定尿毒清顆粒中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量 [J].西北藥學雜志，2012，27(3)：221-222.

[4]衛星星，王轉花.高效液相色譜法測定苦蕎籽殼中蘆丁和槲皮素的含量 [J].藥物分析雜志，2007，27(12)：1909-1910.

[5]徐國防，郭娜，李俊明，等.HPLC法同時測定泌感顆粒中小檗堿和槲皮素的含量 [J].藥物分析雜志，2008，28(3)：394-397.

[6]陳健.HPLC法測定含化上清片中白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量 [J].西北藥學雜志，2015，30(3)：251-252，317.

[7]國家藥典委員會.中國藥典2010年版[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010:248.

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.017

中圖分類號：R927.2

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)04-0383-03

(收稿日期：2015-10-14)

Determination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules by HPLC

CHEN Jian

(Fuling Institute for Food and Drug Control，Chongqing 408000，China)

Abstract:Objective To establish an HPLC method for the content ditermination of quercetin and kaempferol in Kangjunxiaoyan Capsules.Methods Agilent Eclipse XDB-C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used with methanol-4 mL·L-1phosphoric acid solution(50∶50) as the mobile phase；The column temperature was 30 ℃；The flow rate was 1.0 mL·min-1；The detection wavelength was 360 nm.Results The sample of quercetin in the range of 1.034-20.68 μg·mL-1showed a good linear relation-ship with the peak area(r=0.999 3)，The addition recovery rate was 97.14%，RSD was 0.84%(n=6)；The sample of kaempferol in the range of 2.061-41.22 μg·mL-1showed a good linear relationship with the peak area(r=0.999 1).The addition recovery rate was 98.05%，RSD was 0.59%(n=6).Conclusion The method is simple，rapid, accurate，and suitable for the determination of Kangjunxiaoyan Capsules.

Key words：quercetin；kaempferol；Kangjunxiaoyan Capsules;HPLC