牛蒡子萃取物對血瘀證動物模型血液流變學的影響

朱　凱　楊永剛　李　輝　李軍鴿　李　娜　律廣富　劉　柳　楊　擎　王寶森　于智莘　邱智東

(長春中醫(yī)藥大學，吉林　長春　130117)

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牛蒡子萃取物對血瘀證動物模型血液流變學的影響

朱凱楊永剛李輝1李軍鴿李娜律廣富劉柳楊擎王寶森于智莘邱智東

(長春中醫(yī)藥大學，吉林長春130117)

〔摘要〕目的探討牛蒡子萃取物對血瘀證動物模型血液流變學的影響。方法Wistar大鼠60只，按體重隨機分為假手術組、模型組、陽性組、牛蒡子提取物高、中、低劑量組，每組10只，除假手術組外，每組分別給予相應藥物7 d，末次給藥30 min后，各組動物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液，間隔6 h后同上述方法再注射一次，兩次注射鹽酸腎上腺素注射液之間將動物置于2℃冰水浴中游泳5 min，制備血瘀動物模型，假手術組不造模。檢測大鼠血液流變學指標、凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、血小板聚集率(PA)。結(jié)果與模型組比較，陽性組、高、中劑量組的全血黏度有所降低(P<0.05)；陽性組，高、中、低劑量組的PT、APTT升高，F(xiàn)IB含量有所降低(P<0.05)；陽性組PA有顯著性降低(P<0.01)，高劑量與中劑量組有差異(P<0.05)，與低劑量組無差異。結(jié)論牛蒡子萃取物具有降低血瘀證大鼠全血黏度、改善血液流變學指標的作用；牛蒡子萃取物能夠改善凝血功能，降低血小板聚集。

〔關鍵詞〕牛蒡子萃取物；血液流變學；血瘀證

血瘀證是指人體內(nèi)血行不暢、壅阻血脈、停積為瘀的證候。牛蒡子具有疏散風熱透疹解毒、消腫利咽等功效，主治發(fā)熱咳嗽疹出不暢麻疹初起風熱稍癢等證〔1〕；現(xiàn)代藥理研究證明其有抗腫瘤、抗病原微生物、抗菌、降血糖等作用〔2〕。牛蒡子超聲萃取物可以改善大鼠中動脈缺血(MACO)模型動物的神經(jīng)功能缺損評分，減輕MACO模型動物腦水腫，減少腦梗死體積，對腦缺血動物有一定的神經(jīng)保護作用〔3〕。本文旨在探討牛蒡子萃取物對血瘀大鼠的保護作用。

1材料與方法

1.1實驗動物清潔級Wistar雄性大鼠，體重180～220 g，由吉林大學動物中心提供〔SCXK-(吉)2013-0005〕。飼養(yǎng)條件：室溫20℃～25℃，濕度40%～50%，動物自由進食及飲水，自然晝夜節(jié)律。

1.2主要試劑凝血酶原時間(PT)測定試劑盒、活化部分凝血活酶時間(APTT)測定試劑盒、纖維蛋白原(FIB)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3實驗藥品及儀器

1.3.1藥品牛蒡子提取物(由長春中醫(yī)藥大學研發(fā)中心藥理實驗室提供)、銀杏葉分散片(深圳海王藥業(yè)有限公司)、水合氯醛(沈陽市試劑三廠)、鹽酸腎上腺素注射液〔開封制藥(集團)有限公司)〕、肝素(北京鼎國生物技術有限公司)、二磷酸腺苷(北京普利生公司)。

1.3.2儀器血凝儀(COATRON M4，賽默費世爾儀器有限公司)、血小板聚集儀(LBY-NJ4，北京普利生儀器有限公司)、血流變儀(LBY-N6K，北京普利生儀器有限公司)、離心機(TG18K，長沙東旺實驗儀器有限公司)。

1.4實驗方法

1.4.1分組及給藥Wistar大鼠60只，隨機分成假手術組、模型組、陽性組、牛蒡子提取物高、中及低劑量組，每組10只。 假手術組與模型組給予蒸餾水；陽性組給予銀杏葉分散片0.50 g/kg；牛蒡子提取物低劑量組給予牛蒡子提取物0.1 g/kg、中劑量組予0.2 g/kg、高劑量組予0.4 g/kg。連續(xù)7 d，1次/d。

造模：末次給藥30 min后，除假手術組外，各組動物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液(0.1%)0.2 ml/只共2次，2次之間間隔6 h。兩次注射之間置于2℃冰水浴中游泳5 min〔4〕。

1.4.2指標動物于第8日全部腹腔注射3%水合氯醛(1 ml/100 g體重)麻醉，腹主動脈取血，肝素抗凝，取3 ml全血以血流變儀測定血液流變學各項指標；剩余全血于4℃ 3 000 r/min離心15 min，分離血漿，以全自動凝血儀測定PT、APTT、FIB含量；計算血小板聚集率(PA)。

1.5統(tǒng)計學分析使用SPSS16.0軟件進行方差檢驗。

2結(jié)果

2.1全血黏度測定結(jié)果與假手術組比較，模型組高、中、低切全血黏度有所升高(P<0.05)；與模型組比較，陽性組、牛蒡子提取物高、中劑量組的全血黏度有所降低(P<0.05)，見表1。

表1　牛蒡子提取物對血瘀證大鼠血液流變學指標的影響

與假手術組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；下表同

2.2凝血指標測定結(jié)果與假手術組比較，模型組大鼠PT、APTT降低，F(xiàn)IB含量有所增高(P<0.05)；與模型組比較，陽性組，高、中、低劑量組的PT、APTT升高，F(xiàn)IB含量有所降低(P<0.05)，見表2。

2.3血漿PA測定結(jié)果與假手術組〔(40.6±3.21)%〕比較，模型組PA〔(57.8±4.11)%〕有所增高(P<0.05)。與模型組比較組，陽性組PA〔(42.2±6.46)%〕顯著性降低(P<0.01)。高劑量組〔(45.7±5.10)%〕與中劑量組〔(48.3±3.07)%〕與模型組比較有差異(P<0.05)。模型組與低劑量組〔(54.8±5.37)%〕比較無差異。

表2　牛蒡子提取物對血瘀癥大鼠凝血功能的影響

3討論

血瘀證可見于多種疾病，也可見于疾病的不同發(fā)展階段〔4〕。它主要由于人體瘀血內(nèi)阻、血行不暢導致的整體反應狀態(tài)，如氣虛血瘀、熱郁血瘀、痰凝血瘀等〔5，6〕。因此，本研究從氣虛瘀證入手，辨析與提取氣虛、血瘀等證候要素，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學技術和方法，采用兩次皮下注射鹽酸腎上腺素、間隔內(nèi)對大鼠進行冰浴游泳模擬血瘀證。

牛蒡子味苦、辛，性寒、歸肺胃二經(jīng)，歷代古籍都有收錄，是臨床上常用的中草藥，其主要的功效有消腫利咽，透疹解毒，疏散風熱，主治熱毒疼腫，疹出不暢，痄腮，麻疹初起等〔2〕；藥理研究發(fā)現(xiàn)牛蒡子還具有抗腫瘤、抗病原微生物、抗菌等藥理作用作用〔7〕。本研究結(jié)果提示，牛蒡子萃取物具有降低血瘀證大鼠全血黏度，改善血液流變學指標的作用；牛蒡子萃取物能夠改善凝血功能，降低血小板聚集。本研究為牛蒡子萃取物治療血瘀證的有效性提供了可靠的理論基礎和實驗依據(jù)，并為牛蒡子的合理利用與開發(fā)提供了新的思路，為今后安全合理的利用牛蒡子奠定了基礎。

4參考文獻

1Han ZW，Wang MZ，Wang LY，etal.Chemical analysis of burdock root constituents〔J〕.Asian J Chem，2013;25(5)：2573-80.

2尹丹丹.牛蒡子提取物的抗氧化活性研究〔J〕.西北農(nóng)林科技大學學報,2011;39(4)：201-5.

3隋欣，邱智東，李輝，等.牛蒡子萃取物對大鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用〔J〕.中國老年學雜志，2015;35(11)：2929-30.

4趙玲，魏海峰，李雅莉,等.從血液流變學的改變分析腎上腺素致血瘀證大鼠模型的建立〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010;8(2)：188-90.

5趙輝，王鍵，李凈，等.多因素復合制作氣虛血瘀證腦缺血動物模型體會〔J〕.河南中醫(yī)，2001;21(4)：18-20.

6陳會敏.牛蒡子對實驗性高脂血癥大鼠降血脂效應及其機理研究〔J〕.中華中醫(yī)藥學報,2010;28(3)：626-7.

7Wang CH，Chung FY，Tsai TR，etal.Development of great burdock essence compounds〔J〕.Genomic Med Biomark Health Sci，2012;4(1)：45-7.

〔2015-09-21修回〕

(編輯李相軍)

基金項目：吉林省教育廳資助項目〔吉教科合字(2014)第98號〕

通訊作者：于智莘(1977-)，女，副教授，主要從事中藥藥劑學研究。

〔中圖分類號〕R749

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)12-2854-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.012

1吉林省前衛(wèi)醫(yī)院

邱智東(1965-)，男，教授，主要從事中藥藥劑學研究及新藥研發(fā)研究。

第一作者：朱凱(1980-)，男，副教授，主要從事生物活性分子研究。